隐形膜 薄膜过滤法
实验目的：验证隐形膜中微生物限度的检查条件和方法。
实验方法：采用薄膜过滤法，消除隐形膜的抑菌作用，使其微生物限度检查测定结果准确。设立四组实验：1、供试品 2、稀释液和50-100cfu/ml的菌悬液 3、供试品和50-100cfu/ml的菌悬液 4、50-100cfu/ml的菌悬液。分别采用100ml、200 ml、300 ml、400 ml、500 ml的冲洗液进行冲洗，取出滤膜，在培养基中培养。实验1中不得有菌检出，2/4和3/4中菌回收率不得低于70%。选择菌回收率最高的一组作为隐形膜微生物限度检查的条件。（实验2、3、4都是为实验1的准确度服务）
实验准备：平皿4个 营养琼脂（加染色剂）80 ml 100 ml量筒 滤器4个 泵管1付 试管8支 烧杯2个 10 ml、1 ml注射器 菌种 离心管 磷酸盐缓冲液 硫酸锰溶液 抹布 在121摄氏度湿热灭菌
生理盐水 一次性手套、口罩等 实验步骤： 一、 菌悬液的制备
斜面菌中加5 ml磷酸盐缓冲液进行洗脱。得 1*105-1*106cfu/ml的菌原液。稀释103-104倍，得50-100cfu/ml的菌悬液备用。剩余菌原液可冷藏以备下次使用。 二、 供试液、稀释液的制备
供试液的制备：取10ml隐形膜于烧杯中，加入60ml磷酸盐缓冲液轻轻摇动。后加入30ml硫酸锰溶液，使卡波姆凝结。置于500
转/分的离心机中离心10min，取上清液，即得供试液。
稀释液的制备：取磷酸盐缓冲液70ml，加入硫酸锰溶液30ml即可。 三、 四组实验
1、10ml供试液，用0.9%的氯化钠溶液冲洗。（分别100ml、200 ml、300 ml、400 ml、500 ml冲洗液，下同） 2、10ml稀释液中加入1ml菌悬液，冲洗。 3、10ml供试液中加入1ml菌悬液，冲洗。 4、1ml菌悬液，冲洗。 实验结果：
注意：染色剂0.1g加10ml的水。灭菌。100ml培养基中加1ml染色剂即可。