华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及DNA结构的影响
华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及D N A 结构的影响
华蟾素对晶状体上皮细胞增殖及DNA 结构的影响
1. 福建医科大学附属第一医院眼科中心王婷婷
[摘要]
1，2
2. 福建省眼科研究所
3
3. 福建医科大学技术工程学院眼科学与视光学系
徐国兴
1，2
何青
1，2
黄焱
目的：探讨华蟾素对兔晶状体上皮细胞(Len epi t hel i al cel l s , L EC s ) 的增殖及D N A 的影响。方法：兔L EC s 分别与终
L 、0. 2m g
-1
浓度为0. 1m g L 及0. 3m g
L
-1
-1
L 的华蟾素培养72小时。M T T 法测定不同浓度的华蟾素对培养的兔LEC s 的增殖抑制
L ～0. 3m g
-1
-1
-1
率；D N A 电泳观察华蟾素对LE C s D N A 结构的影响。结果：0. 1m g 率随药物浓度的升高而升高；0. 1m g 预防后发性白内障的药物之一。[关键词]
华蟾素
晶状体上皮细胞
抗增殖
D N A 结构
凋亡
～0. 3m g
-1
L 的华蟾素能明显抑制兔LEC s 增殖，增殖抑制
-1
L 浓度的华蟾素在作用72小时后，D N A 凝胶电泳可观察到兔LE C s 出现典L ～0. 3m g
-1
型梯状D N A ，而空白对照组则为完整D N A 。结论：0. 1m g L 的华蟾素能抑制LE C s 增殖、诱导L EC s 凋亡，可能成为
华蟾素（Cinobufotalin ）为纱蟾蜍科动物中华大蟾蜍（Bufobufo gargarizans Cantor ）或黑眶蟾蜍（B.melano stictus Schneider ）等的全皮提取制剂, 具有清热解毒，利水消肿，化瘀溃坚等作用，已列为国家级中药保护品种并已广泛应用于临床[1]。本研究通过建立兔晶状体上皮细胞（Len epithelial cells, LECs ）的体外培养体系，探讨不同浓度的华蟾素干预兔LECs 生长的效应及对DNA 结构的影响。
1.2.2实验分组将对数生长期兔LECs 分设不加药物的空白对照组和药物干预组，药物干预组加入华蟾素注射液，使终浓度为0.1mg L -1、0.2mg L -1、0.3mg L -1, 加入药物后继续培养72小时。
1. 3观察指标及方法1.3.1MT T 比色法
将对数生长期兔LECs 调整至5×10个／mL ．按照上述的实验分组每组6个复孔，药物干预2h 后MTT 比色法计算细胞增殖抑制率。抑制率=（1-实验组吸光度值／对照组吸光度值）×100％。
1.3.2DNA Ladder s 电泳
将细胞以5×10/孔接种于6孔板。经过如上述的实验分组及药物干预处理后，按试剂盒（碧云天生物技术公司）说明书操作。DNA 抽提完毕将洗脱液中加入1/4体积的酚兰染色，2%琼脂糖凝胶电泳。电泳2h 后，在紫外灯下观察并摄影。1. 4统计学方法
实验数据采用SPSS 12．0软件进行统计学分析，以P
5
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l 材料与方法
1. 1实验材料
华蟾素注射液（Cinobufacini Injection ）为安徽金蟾生化股份有限公司生产（批号060228-1）；DMEM/F12培养基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA ，均购自美国Gibco 公司；DNA Marker 、DNA Ladders 凋亡检测试剂盒均购自碧云天生物技术公司。
CO 2细胞培养箱（371型，美国），超净工作台（BDHC-1300ⅡA/B，苏州），全自动酶标读数仪（美国BioTek ELX808）,Kodak2000凝胶成像系统（美国柯达公司）。1. 2实验方法
1.2.1兔L ECs 培养无菌条件下，取健康新鲜新西兰白兔眼晶状体前囊膜，用含0.01%EDTA和0.25%胰蛋白酶的混合消化液消化后，收集细胞，放入置于37℃、5%CO2、95%空气、100%湿度的CO 2培养箱中孵育培养，按1:2传代，取第3代细胞进行药物干预。
2结果
2. 1M TT 结果
空白对照组和药物干预组的吸光度值见表1，ANOVA 分析显示各组吸光度值的组间差异F=215.58,P
本研究受以下基金资助：1. 福建省中医药科研重点课题(基金编号：wzzb0606);2. 福建医科大学教授发展基金课题(基金编号：2006-js6033) ；
3. 福建省中医药科研重点课题(基金编号：wzzyb0905) 。
通信作者：徐国兴, [email protected]。
62010年第5期（总第41期）