四逆汤的药动学研究
第24卷 第10期Chinese T raditio nal Patent M edicine V ol . 24 No . 10
四逆汤的药动学研究
李 锐, 晏亦林, 周莉玲, 周玖瑶
(1. 广州中医药大学, 广东广州510405; 2. 广州汉方现代中药研究开发有限公司, 广东广州510240)
关键词:四逆汤; 药代动力学; 乌头类生物碱; 一氧化氮
摘要:目的:探讨四逆汤(附子, 干姜, 炙甘草, 等) 精制物药代动力学与药效动力学的相关性, 揭示四逆汤的配伍规律。方法:应用同一来源含药血清, 分别以乌头类生物碱和一氧化氮(NO ) 为指标, 同步进行血药浓度测定和药理效应测定。结果:二者在犬体内均呈一级速度消除, 具有开放一房室模型的特征, 药动学参数K 血与K 效、T I /2血与T I /2效接近, 均具有药效产生快、作用维持时间较长的特点, 反映出四逆汤“走而不守, 守而不走”的特性。结论:四逆汤的药代动力学与药效动力学参数相关性好。
中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2002) 10-0777-04
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Pharmacokinetical study on Sini Decoction
LI Rui 1, YAN Yi -lin 2, ZHOU Li -ling 1, ZHOU Jiu -yao 1
(1Guangz hou U niversity of TCM ; 2Gua ngz hou Hanfang Modern Natura l Medicine Res earch and Developmen t Co . Ltd . Guangz hou , 510240, China )
Key words :Sini Decoction ; pharmacokinetics ; aconite alkaloid ; nitric ox ide A bstract :Objective :To study the co rrelation of pharmacokinetics (PK ) and pharmacodynamics (PD ) of Sini De -coction (SND ) (Radix Aconiti Praeparata , Rhizoma Zingiberis , Radix Gly cyrrhizae , etc . ) and reveal the com -patibility of SND . Methods :Using the drug serums from the same source , we determined the plasma concentra -tion in vivo in dog and the pharmacological effects at the same time inspected by the contents of aconitine -type alkaloids and nitric oxide (NO ) . Results :The data of PK and PD can be both described by one compartment open model w ith first o rder absorption in vivo in dog and the parameters of tw o methods are similar . The results show that the effective fraction of SND gives a prompt and lasting effect in accordance w ith characteristic func -tion of SND . Conclusion :A good correlation exists in SND of the parameters between pharmacokinetics and pharmacody namics .
四逆汤由附子、干姜、炙甘草组成, 是中医回阳救逆的经典名方, 具有强心、抗休克作用。金若敏等[1]以抗实验性心率减慢进行了药效动力学研究, 陈长勋等以LD 50补量法研究了四逆汤的药效衰减规律, 但两种方法所测得的药动学参数并不完全相同。本文报导应用中医方药血药PK (Pharm a -cokinetics ) —PD (Pharmacodynamics ) 模型, 即利用同一来源的含药血清同步进行药物代谢动力学与药理效应动力学研究, 探讨二者的相关性。1 实验材料
1. 1 药品与试剂 四逆汤供试品, 本研究室自[4]
制; 一氧化氮(NO ) 测试盒(酶法) , 南京建成生物
收稿日期:2002-03-30
基金项目:广东省自然科学基金项目(No . 980639)
作者简介:李 锐(1937~) , 男, 福建省建瓯市人, 广州中医药大学首席教授, 博士生导师, 电话:(020) 86591233-2223。
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工程研究所。
1. 2 仪器 岛津LC -10A 高效液相色谱仪, 日本; TGL -16型高速台式离心机, 上海医疗器械六厂。1. 3 动物 家犬, 雄性, 体重14~15kg , 广州中医
药大学实验动物中心。2 方法与结果
2. 1 血药浓度测定方法的建立2. 1. 1 提取次数的考察:取犬空白血清1. 0m L 4份, 分别精密加入0. 09mg ·mL -1乌头碱对照品溶液100μL , 用氨试液调pH 为10, 加入乙醚2m L , 旋涡混合30sec , 离心5min (4000r ·min ) 后取乙醚层, 分别萃取1, 2, 3, 4次, 合并乙醚层, 水浴挥干, 残余
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物加入100μL 无水乙醇, 旋涡混合60sec 溶解, 高速离心5min (15000r ·min -1) , 取10μL 进样, 按拟定的HPLC 色谱条件测定, 比较不同萃取次数所得的峰
面积, 由于萃取3次与4次峰面积较接近, 确定提取次数为3次。
2. 1. 2 空白血清中乌头碱对照品标准曲线的制备:取空白血清1. 0m L 8份, 分别精密加入0. 01, 0. 03, 0. 06, 0. 09, 0. 12, 0. 15, 0. 18, 0. 2mg ·m L -1乌头碱对照品溶液100μL , 氨试液调pH , 乙醚萃取, 按拟定色谱条件测定。以血清中乌头碱的浓度为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标, 二者线性关系良好。回归方程为:Y =42667. 11982X -2817. 133, r =0. 9995, 线性范围为:1~20μg ·m L -1。
2. 1. 3 回收率测定和精密度考察2. 1. 3. 1 天内回收率:取空白血清1. 0m L 6份, 分别精密加入0. 09mg ·mL
-1
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——1μg ·m L -1:x ±s =93. 09±1. 96(R SD =2. 11%)
—□—9μg ·mL -1: x ±s =93. 99±1. 44(RSD =1. 54%) —△—20μg ·mL -1: x ±s =93. 30±2. 43(RSD =2. 60%)
图2 天间回收率测定结果
结果高、中、低3个浓度的乌头碱对照品溶液天
内、天间回收率均在94%左右, RSD 在4%以内, 精密度和准确度均能满足实验要求。2. 2 血样采集
取犬3只, 3%戊巴比妥钠麻醉后, 做股静脉、股动脉插管手术, 股动脉取空白血10m L , 后肢肌内注射0. 346mg ·kg -1的重酒石酸间羟胺注射液, 15min 后再次注射1. 66g ·kg 的四逆汤供试品, 分别于给药前, 给药后10, 20, 30min , 1, 2, 4, 6h 股动脉取血10mL , 静置, 离心(3000r ·min -1) , 分离血清, -20℃冰箱保存待测, 每次取血完毕后于股静脉补充适量的生理盐水。2. 3 血样处理及分析
取空白血清1. 0mL , 注射间羟胺后的血清1. 0m L 、空白血清1. 0mL +四逆汤供试品0. 3m L 及各时间点含药血清各1. 0m L , 分别用氨水调pH 值, 乙醚提取3次, 按拟定色谱条件测定乌头类生物碱血
-1
乌头碱对照品溶液
100μL , 在同一天内提取, 测定。同时取未经处理的0. 09mg ·m L 乌头碱对照品溶液直接进样测定, 计
算萃取回收率。同法再测得0. 01, 0. 2mg ·m L -1乌头碱对照品溶液天内回收率, 结果见图1。
——1μg ·mL -1:x ±s =94. 76±2. 31(RSD =2. 44%)
—□—9μg ·m L -1:x ±s =94. 56±2. 48(RS D =2. 62%) —△—20μg ·m L -1:x ±s =93. 60±3. 00(RS D =3. 20%)
药浓度, 结果见表1; 同时取不同时间犬血清0. 1mL 测定NO 含量, 结果见表2。
表1 不同时间犬血清中乌头类生物碱血药浓度变化
时间(h ) 0. 167
0. 3330. 5124血药浓度(μg ·mL -1) (1) (2) (3) 1. 27151. 33581. 79581. 80911. 87152. 16912. 22052. 16912. 67041. 84971. 89322. 07581. 50221. 43381. 58910. 99370. 80621. 0005x ±s 1. 4677±0. 2860
1. 9499±0. 19242. 3533±0. 27581. 9396±0. 12001. 5084±0. 07780. 9292±0. 1065图1 天内回收率测定结果
2. 1. 3. 2 天间回收率:取空白血清1. 0m L 9份, 置5mL 具塞离心管中, 分别精密加入0. 01, 0. 09, 0. 2
mg ·m L -1乌头碱对照品溶液100μL 各3份, 分别在3天内提取, 测定。同时取未经处理的相应浓度的乌头碱对照品溶液直接进样测定, 计算萃取回收率, 结果见图2。
表2
时间(h ) 造模前空白血清间羟胺造模后血清0. 1670. 3330. 5124测量值(μmol ·L -1) (1) 20. 5113. 0219. 7321. 8924. 9222. 5420. 2716. 21(2)
18. 7711. 7317. 9720. 5723. 0420. 9318. 5715. 03(3)
21. 5514. 5923. 6725. 7330. 0725. 5921. 9818. 01NO
净增值(μmol ·L -1) (1)
--7. 496. 718. 8711. 909. 527. 253. 19(2)
--7. 046. 248. 8411. 319. 206. 843. 30不同时间犬血清中N O 含量变化
净增百分率(%)
(1)
--36. 5251. 5468. 1391. 4073. 1255. 6824. 47(2)
--37. 5153. 1975. 3896. 4178. 4558. 3228. 13(3)
--32. 3062. 2376. 36106. 1375. 3950. 6423. 47 x ±s
--35. 44±2. 2655. 65±5. 7673. 29±4. 5097. 98±7. 4975. 65±2. 6754. 88±3. 9025. 36±2. 45(3)
--6. 969. 0811. 1415. 4811. 007. 393. 42
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表4
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犬肌内注射供试品后乌头类生物碱血药浓度-时间曲线及NO 净增率-时间曲线见图3
。
药理效应法所测药动学参数药动学参数
(1) 3. 66677
(2) 3. 860430. 417140. 179511. 66130
0. 64621
(3) 4. 958670. 435430. 139761. 59153
0. 53779
x ±s
4. 16196±0. 696740. 43185±0. 013290. 16942±0. 026121. 60573±0. 05001
0. 61320±0. 06548
药动学参数K a (hrs )
K (hrs -1) 0. 44299
T 1/2Ka (hrs ) 0. 18899T 1/2K (hrs ) 1. 56436T p (hrs )
0. 65560
度) , r =0. 9939。
回归分析表明:在0~6h 之间, 乌头类生物碱血药浓度与NO 净增率之间存在良好的相关性。3 讨论
本实验血药浓度法药动学参数, 是以四逆汤有效部位中乌头类生物碱, 包括双酯型生物碱乌头碱(aconitine ) 、新乌头碱(mesaconitine ) 、次乌头碱(hy -paconitine ) 及其水解产物等为指标测得。结果表明:乌头类生物碱在犬体内呈一级动力学消除, 具有
图3 血药浓度-时间曲线及N O 净增率-时间曲线图
开放一房室模型的特征; 肌注给药吸收快(K a =4. 94052hrs -1) , 起效快(T p =0. 59622hrs ) ; 消除慢(K =0. 32852hrs
-1
2. 4 药动学参数的计算
在586兼容机上用MCPKP 自动化药物动力学程序软件对血药浓度-时间和NO 净增率-时间数据进行处理, 按肌注给药方式用非线性最小二乘法拟合曲线。比较各处理结果, 选择其中相关系数最佳及AIC 值最小者。结果表明乌头类生物碱和NO 净增率在犬体内均呈一级动力学消除, 具有开放一房室模型的特征。所得各项药动学参数见表3及表4。
2. 5 相关性研究
为研究四逆汤回阳救逆有效部位的血药浓度法与药理效应法两种药动学方法之间的相关性, 即乌头类生物碱血药浓度与血清中NO 含量的关系, 将0~6h 的乌头类生物碱血药浓度与NO 净增率进行相关性分析, 其回归方程Y =0. 4478X -0. 1123(式中Y 为NO 净增率, X 为乌头类生物碱血药浓
表3
血药浓度法所测药动学参数药动学参数
(1) 0. 0806762. 642340. 030534. 159390. 333470. 166612. 078120. 65960)
2. 120620. 01018
(2) 0. 0806762. 606030. 030964. 547010. 340670. 152412. 034240. 616052. 112687. 64980. 01055
(3) 0. 0806762. 842010. 028396. 115160. 311410. 113322. 225330. 513012. 422389. 12610. 00884
2. 69679±0. 127070. 02996±0. 001384. 94052±1. 035570. 32852±0. 015250. 14411±0. 027602. 11256±0. 100090. 59622±0. 075282. 21856±0. 176568. 2332±0. 785310. 00986±0. 00090
x ±s
药动学参数D *(mg ·kg -1) C 0(μg ·ml -1) V (L ·kg -1) K a (hrs
-1
) , 作用时间持久(T 1/2K =
2. 11256hrs ) 。药理效应法实验表明, 犬在注射间羟胺后, 血清NO 含量下降, 注射四逆汤后, 血清NO 含量升高。测得的药动学参数反映了四逆汤有效部位对间羟胺处理犬血清中NO 含量的影响, 推测与文献报道[5, 6]附子中的乌头类生物碱具有扩张血管的作用有关。而NO 作为血管舒张因子, 具有扩张血管的作用。最新研究结果表明[7]新乌头碱通过增加内皮细胞Ca 2+内流, 活化大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合成酶而起到松弛血管的作用。因此, 实验中选择NO 作为药效学指标, 在一定程度上反映了四逆汤回阳救逆的药效动态变化。结果表明:NO 的净增率在犬体内呈一级动力学消除, 具有开放一房室模型的特征。药效产生快(K a =4. 16196hrs -1, T p =0. 61320hrs ) , 作用维持时间较长(K =0. 44299hrs
-1
, T 1/2K =1. 60573hrs ) 。上述研究结果与四逆
汤“走而不守, 守而不走”的特性相吻合。
比较两组药动学参数, K a 血与K a 效, K 血与K 效, T 1/2Ka 血与T 1/2Ka 效均很接近, 药效半衰期T 1/2K 效为1. 60573hrs , 血浆半衰期T 1/2K 血为2. 11256hrs , 可近似地认为相近, 说明乌头类生物碱与四逆汤升高NO 含量的体内过程一致。
血药浓度法与药理效应法回归分析结果表明:在0~6h 之间, 乌头类生物碱血药浓度与NO 净增率存在良好的相关性。说明虽然乌头类生物碱只是四逆汤众多化学成分中的部分, 但是它在整个复方
)
K (hrs -1) T 1/2Ka (hrs ) T 1/2K (hrs ) T p (hrs ) C max (μg ·mL
-1
9237AUC (mg . hrs ·L -1) 7.
-1CL (l ·(kg . hrs ) )
注:D *为以乌头类生物碱含量计算的给药量。
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制剂的药效发挥中起重要作用, 其动力学特征在一定程度上可以反映四逆汤回阳救逆药效的变化。血药浓度法作为经典的药动学研究方法, 能够
应用于临床治疗的药物监测, 为合理制定给药方案提供依据。药理效应法以药物效应为指标, 而药物效应代表着原形药及其具有相同药理活性的代谢产物所产生的药物作用以及多种成分相互作用的综合结果, 更符合中医药的整体观。两者结合起来组成PK -PD 模型同步进行药动学研究, 综合分析实验结果, 阐明两者间的相关性, 有利于对体内过程的客观分析和正确判断, 了解复方中各味药的主要有效成分及成分的化学群与药理效应的关系, 从而有助于探明中药作用的物质基础, 阐明作用原理。
参考文献:
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药效动力学研究[J ]. 中成药, 1992, 14(5) :29.
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复方麻黄胶囊的药理研究
钟恒亮, 卢素琳, 王化文, 何 樱, 杨 纯, 邹文江(贵阳医学院药理教研室, 贵州贵阳550004)
关键词:复方麻黄胶囊; 止咳作用; 平喘作用
摘要:目的:探讨复方麻黄胶囊(M CC ) (麻黄, 苦杏仁, 五味子等) 的药理作用。方法:以浓氨水诱发小鼠咳嗽及丙烯醛诱发豚鼠咳嗽为模型, 观察了M CC 的治疗作用, 还观察了M CC 对组胺和乙酰胆碱诱发豚鼠哮喘的影响及对离体豚鼠气管平滑肌的作用。结果:复方麻黄胶囊灌胃给药对浓氨水诱发的小鼠咳嗽及丙烯醛诱发的豚鼠咳嗽均有明显的镇咳作用, 并可预防组胺和乙酰胆碱诱发的豚鼠哮喘, 扩张离体豚鼠气管。结论:本品具有良好的止咳平喘作用。中图分类号:R285. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2002) 10-0780-02
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Study on the pharmacological action of Mahuang Compound Capsule
ZHONG Heng -lian , LU Su -lin , WANG Hua -wen , HE Ying , YANG Chun , ZOU Wen -jang
(Depar tment of Pharmacol ogy , Guiyang Medical College , Guiyang 550004, China )
Key words :Mahuang Compound Capsule ; antitussive effect ; anti -asthma effect A bstract :Objective :To study the pharmacological action of Mahuang Com pound Capsule (M CC )(Herba Ephedrae , Semen Armeniacae Am arum , Fructus Schisandrae , etc . ) . Methods :The study was carried out throug h the observation of ammonia -induced cough model in mice and acrolein -induced cough model in guinea -pig s treated w ith MCC , its effects on asthma model of g uinea -pigs induced by histamine and acetylcholine mix -ture and on isolated tracheas smooth muscle of guinea -pigs were also studied . Results :MCC administrated orally
收稿日期:2001-02-03
作者简介:钟恒亮(1948~) , 男, 广西贺县人, 副教授, 主要从事呼吸系统药理研究, 电话:0851-6785530. *贵阳医学院药学系91级毕业生。