金银花不同提取方法的绿原酸比较研究
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天然产物研究与开发
NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEV ELOPMEN T
2003 Vo1. 15 No. 2
金银花不同提取方法的绿原酸比较研究
林 丹 赵国玲 刘佳佳
(中南大学化学化工学院 湖南长沙 410083)
摘 要 本文采用了水提法、水提醇沉法、酶解法、醇提法对金银花进行提取, 并用紫外分光光度法来测定提取物中绿原酸的含量, 依此来比较各种方法的优劣。由实验结果可得:以绿原酸作为指标来考察各种方法的优劣, 尤以醇提法较好, 绿原酸的含量可达到15128%; 以提取物的得率作为指标来考察, 以酶解法为最好, 提取物的得率可达到37191%。关键词 金银花; 绿原酸; 酶解; 提取工艺
金银花为忍冬科(Caprifoliaceae ) 忍冬属
(L onicera ) 忍冬L onicera japonica Thunb. 植物的干燥花蕾[1], 为中医常用药, 具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。其主要活性成分为绿原酸, 别的药性成分还有黄酮类、挥发油等。几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花果。
[1]法、, 本文对这几种方法进行了研究[3,4]来测定提取产物中绿原酸的含量, 依此来比较各种方法的优劣。
水提醇沉法:取适量干燥并粉碎的金银花粉末在80℃的水浴下加热3次, 每次1h , 将提取液浓缩至1∶1后, 80%, 大部分的, 过滤后, 5ml 左右, 浓缩, 24h 后, 在60℃下回流3次, 每1h 。将提取液在60℃下减压浓缩至5ml 左右, 浓缩液稀释, 测其紫外吸收。
酶解法:取适量干燥并粉碎的金银花粉末, 加入不同量纤维素酶(含量为015%) 处理后, 再用60%的乙醇回流, 将提取液在60℃下减压浓缩至5ml 左右, 浓缩液稀释, 测其紫外吸收。
1 实验部分
111 实验仪器 紫外分光光度计(756型) 、恒温水
浴锅(上海申生科技公司) 、分析天平、旋转蒸发仪R 2201(上海申生科技公司) 、SHB 23型循环水真空泵(郑州杜甫仪器厂) 。
112 实验试剂 金银花为隆回县小沙江产, 绿原酸
2 实验结果与讨论
211 标准曲线的绘制[3]
利用高精度电子天平称取绿原酸标准品010044g , 溶于25ml 蒸馏水中, 然后利用该母液配
成各种标准浓度, 用756CR T 型紫外可见分光光度计在325nm 下测定不同浓度绿原酸的吸光度, 所得结果见表1。
表1 绿原酸标准品的测定
Table 1 The mensuration of chlorogenic acid standard 序号
1
2345标准品为中国药品生物制品检测所提供, 纤维素酶为上海丽珠东风生物有限公司生产。其他所用试剂均为分析纯。113 实验方法[1,2,5]
水提法:取适量干燥并粉碎的金银花粉末在80℃的水浴下加热3次, 每次1h , 将提取液在60℃下减压浓缩至5ml 左右, 浓缩液稀释, 测其紫外吸收。
理论浓度(ug/ml )
[1**********]实际浓度(ug/ml )
98. 5680. 9659. 8438. 7221. 12吸光度
1. 9951. 9061. 5431. 0430. 588Sequence Theoretic concentration Practical concentration Absorption
收稿日期:2002209215 修回日期:2002211222
根据表中数据可绘得如下图形:
2003 Vo1. 15 No. 2林 丹等:金银花不同提取方法的绿原酸比较研究 125
依据此标准曲线可得回归方程:
Y =A +BX
A =0112833 B =0102272 X 为绿原酸浓度Y 为吸光度。
212 实验结果与讨论[1,4]
用蒸馏水做参比, 将稀释的浓缩液在756型的
紫外分光光度计, 于190～400nm 波长范围内进行
图1 绿原酸标准品的浓度曲线
Fig. 1 Concentration curve of CG A standard
扫描, 在325nm 处有一最大吸收峰, 测定在325nm 下的紫外吸光度。光谱特征数据见表2。
表2 不同提取方法提取液的紫外光谱数据(金银花的量都为61441g )
Table 2 The UV of different extraction (all the sample are 61441g )
方法名称
Methods
最大吸收波长(nm )
Maximal wavelength
[***********]325吸光度
Absorption 0. 6310. 5260. 6440. 7990. 7470. 742绿原酸得率(%)
Content CGA
11. 459. 0611. 7515. 14. 8310. 95
黄酮得率(%)
Content of flavone
0. 820. 800. 850. 0. 1. 011. 191. 08
提取物得率(%)
Content of ext.
33. 7829. 3134. 3130. 4234. 8134. 9436. 6037. 7937. 91
水提法Solvent extraction
水提醇沉法Ethanol precipitation 40%醇提法Ethanol extraction (40%) 50%醇提法Ethanol extraction (50%) 60%醇提法Ethanol extraction (60%) 70%醇提法Ethanol extraction (70%) 酶解法(1ml ) Enzymic treatment (1ml ) 酶解法(2ml ) Enzymic treatment (2ml ) 酶解法(3ml ) Enzymic treatment (3)
从表2方法的优劣, 。绿原酸的得率可达到15128%; 其次就是酶解法的得率为12152%; 而且随着乙醇浓度的增加绿原酸的得率先增加后减少,50%的醇提法最好。以提取物的得率作为指标来考察, 以酶解法为最好, 提取物的得率可达到37191%, 而其他方法较低。这是因为纤维素酶是一
3 结论
本实验中对金银花的多种提取方法进行了研究, 作了绿原酸标准品的标准曲线, 从而根据金银花中绿原酸的得率来进行方法的考察, 尤以醇提法较好。绿原酸的得率可达到15128%; 其次就是酶解法的得率为12152%; 而且随着乙醇浓度的增加绿原酸的得率先增加后减少,50%的醇提法最好, 可达到15128%。
参考文献
1 林段嫦, 宋劲诗1金银花中绿原酸提取工艺探讨1中成
类将纤维素水解成水溶性糖的复合酶类, 植物的细胞壁主要由纤维素组成, 绿原酸是胞内物质, 金银花用纤维素酶处理后, 结构致密的细胞壁中的纤维素被水解成水溶性的糖类物质, 而细胞壁的水解有利于胞内物质的溶出, 酶用量的增加使反应速度加快。
综上所述, 用不同的指标来考察各种提取方法的优劣, 其所得的结果也不同。由于金银花中的主要抑菌成分为绿原酸, 而其他提取所得物的抑菌效果并不十分明显, 因此在本文中就依据绿原酸得率的高低来判断各种提取方法的好坏, 从而可知在水提法、水提醇沉法、酶解法、醇提法中以50%的醇提法最好,60%的醇提法次之, 而水提醇沉法效果较差。
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13(12) :14～15
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STU DY ON EXTRACTION PROCESS OF CH LOROGENIC
ACID IN FLOS LONICERAE
L IN Dan ,ZHAO Guo 2ling ,L IU Jia 2jia
(Depart ment of Chemist ry and Chemical Engineering of Cent ral South U niversity ,Changsha 410083,China )
Abstract Object To optimize the extraction process of chlorogenic acid in flos lonicerac. Methods The materials were extracted by water 、alcohol 、ethanol precipitation 、enzymic treatment ,the content of chlorogenic acid was measured by ultraviolet spectrophotomety ,then we could compare which method was the best. R esults According to the content of chlorogenic acid ,ethanol reflux was best ,and the content was 15128%;according to the extrac 2tion of flox lonicerae ,enzymic treatment was best ,and the percentage of extraction was 37191%.K ey w ords Flos lonicerae ;chlorogenic acid ;enzymic ;extraction technology
(上接第123页)
5 Guo Shoujun , Wang , A clerodane In 2dian J Chem 6Wang Liangming , Guo Shoujun , Cheng Dongliang. A new
neo 2clerodane diterpene rom Aster souliei. Chin Chem L ett , 1996,7(7) :619
STU DIES ON THE CHEMICAL CONSTITUENTS OF AS TER SOUL I EI
CU I Shu 2ya 1,2,HU Xiao 2li 2,CHEN G Dong 2liang 2,WAN G Han 2qing 13
(1. OSS O state key laboratory , L anz hou institute of chemical and physics ,
Chinese Academy of Science ,Lanzhou ,730000,China ;
2. College of chemist ry and chemical engineering , L anz hou U niversity ,Lanzhou 730000,China )
ββAbstract We isolated and identified six compounds from Aster souliei . They are β2sitosterol , 2sitosterol 22D 2α, 10ββglucoside , apigenin , hesperetin 2rutinoside , 18, 192dihydroxy 252neo 2cleroda 2dien 2butenolide , 182O 22D 2glu 2copyranosyl 2192hydroxy 2neo 2cleroda 2dien 2butenolide.
K ey w ords Aster souliei ;chemical constituents ;diterpene ;flavonoids