第五章 沉淀法
第五章 沉淀法
一. 填空
1. 固相析出法主要包括 ， ， ， 及其它多种沉淀方法等。
2. 按照一般的习惯，析出物为晶体时称为 ，析出物为无定形固体则称为 。
3. 影响盐析的因素有： 、 、 、 、 。
4. 结晶包括三个过程：(1) ；(2) ；(3) 。
5. 影晶体大小的主要因素，归纳起来与 、 、 、 等直接有关。
6. 晶体的质量主要是指 、 和 等3个方面
二．选择
1、 在一定的pH 和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作 ( )
A ．K S 盐析法 B ．β盐析法 C ．重复盐析法 D ．分部盐析法
2、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ ）
A ．增大 B. 减小 C. 先增大，后减小 D. 先减小，后增大
3、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是 （ ）
A. 分辨率高 B. 变性作用小 C. 杂质易除 D. 沉淀易分离
4、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ ）
A ．增大 B. 减小 C. 先增大，后减小 D. 先减小，后增大
5、盐析常数Ks 是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。 （ ）
A ．盐浓度 B. 盐种类 C. 溶质浓度 D 介质pH
6、 将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为 （ ）
A ．亲和沉淀 B ．聚合物沉淀 C ．金属离子沉淀 D ．盐析沉淀
7、 将四环素粗品溶于pH2的水中，用氨水调pH4.5—4.6，28－30℃保温，即有四环素沉淀结晶析出 。此沉淀方法称为 （ ）
A ．有机溶剂结晶法 B ．等电点法 C ．透析结晶法 D ．盐析结晶法
8、影响体大小的主要因素与下列哪些因素无关 ( )
A ．过饱和度 B ．温度 C ．搅拌速度 D ．饱和度
9、下列沉淀试剂不属于表面活性剂的是 （ ）
A ．CTAB B ．CPC C ．SDS D ．PEG
三 名词解释：
1. 盐析法：
2. Ks盐析 。
3．β盐析：
4．亲和沉淀:
四 问答
1. 什么是盐析作用？盐析的原理是什么？
2. 如何选择盐析所用中性盐？
3. 有机溶剂沉淀的原理是什么？
4. 有机溶剂沉淀影响沉淀效果的因素有那些？
第五章 沉淀法（答案）
一. 填空
1. 固相析出法主要包括盐析法，有机溶剂沉淀法，等电点沉淀法，结晶法及其它多种沉淀方法等。
2. 按照一般的习惯，析出物为晶体时称为结晶法，析出物为无定形固体则称为沉淀法。
3. 影响盐析的因素有：无机盐的种类、溶质（蛋白质等）种类的影响、蛋白质浓度的影响、温度的影响、pH 的影响
4. 结晶包括三个过程：(1) 形成过饱和溶液；(2) 晶核形成 ；(3) 晶体生长。
5. 影晶体大小的主要因素，归纳起来与过饱和度、温度、搅拌速度、晶种等直接有关。
6. 晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度等3个方面
二．选择
1、 在一定的pH 和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作 ( A )
A ．K S 盐析法 B ．β盐析法 C ．重复盐析法 D ．分部盐析法
2、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ C ）
A ．增大 B. 减小 C. 先增大，后减小 D. 先减小，后增大
3、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是 （ B ）
A. 分辨率高 B. 变性作用小 C. 杂质易除 D. 沉淀易分离
4、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ C ）
A ．增大 B. 减小 C. 先增大，后减小 D. 先减小，后增大
5、盐析常数Ks 是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。 （ B ）
A ．盐浓度 B. 盐种类 C. 溶质浓度 D 介质pH
6、 将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为 （ A ）
A ．亲和沉淀 B ．聚合物沉淀 C ．金属离子沉淀 D ．盐析沉淀
7、 将四环素粗品溶于pH2的水中，用氨水调pH4.5—4.6，28－30℃保温，即有四环素沉淀结晶析出 。此沉淀方法称为 （B ）
A ．有机溶剂结晶法 B ．等电点法 C ．透析结晶法 D ．盐析结晶法
8、影响体大小的主要因素与下列哪些因素无关 ( D )
A ．过饱和度 B ．温度 C ．搅拌速度 D ．饱和度
9、下列沉淀试剂不属于表面活性剂的是 （ D ）
A ．CTAB B ．CPC C ．SDS D ．PEG
三 名词解释：
1. 盐析法：是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。
2. Ks 盐析：在一定的pH 和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作Ks 盐析法。Ks 盐析法多用于提取液的前期分离工作。
3．β盐析：在一定离子强度下仅改变pH 和温度进行盐析，称作β盐析法。在分离的后期阶段，为了求得较好的分辨率，或者为了达到结晶的目的，有时应用β盐析法。β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢且变化幅度小，沉淀分辨率比K S 盐析法好。
4．亲和沉淀: 利用亲和反应原理，将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物（亲和沉淀剂），该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来。
四 问答
1. 什么是盐析作用？盐析的原理是什么？
答：盐析作用：向蛋白质溶液中逐渐加入中性盐，在高盐浓度时，蛋白质溶解度随之减小，发生了盐析作用。产生盐析作用的一个原因是由于盐离子与蛋白质表面具相反电性的离子基团结合，形成离子对，因此盐离子部分中和了蛋白质的电性，使蛋白质分子之间电排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。盐析作用的另一个原因是由于中性盐的亲水性比蛋白质大，
盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。
2. 如何选择盐析所用中性盐？
（1）盐析作用要强。一般来说多价阴离子的盐析作用强，有时多价阳离子反而使盐析作用降低。
（2）盐析用盐要有足够大的溶解度，且溶解度受温度影响应尽可能小。这样便于获得高浓度盐溶液，有利于操作，尤其是在较低温度下的操作，不致造成盐结晶析出，影响盐析效果。
（3）盐析用盐在生物学上是惰性的，不致影响蛋白质等生物分子的活性，最好不引入给分离或测定带来麻烦的杂质。
（4）来源丰富、经济。
3. 有机溶剂沉淀的原理是什么？
答：亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，使溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀；水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。
4. 有机溶剂沉淀影响沉淀效果的因素有那些？
答： （1）有机溶剂种类及用量
（2）pH 的影响
（3）温度无机盐的含量
（4）某些金属离子的助沉淀作用
(5)样品浓度