胰岛-内皮细胞复合体对IBMIR的作用
・中文论著摘要・
胰岛一内皮细胞复合体对IBMIR的影响
目的
胰岛移植虽然发展前景良好,但仍面临着需要供胰量大,存活率较低,自身免疫性疾病复发所致移植物失功等问题。在临床经门静脉胰岛移植中,移植后大量胰岛丢失是主要的问题之一。在移植过程中,注入门静脉的胰岛与血液接触,发生一种凝血/炎症反应过程,我们称之为立即经血液介导的炎症反应(IBMIR)。IBMIR以凝血和补体系统的快速激活,胰岛内白细胞的募集和渗入,血小板的快速粘合和激活为特征。组织因子是IBMIR的主要启动因子。本实验旨在观察经胰岛一内皮细胞复合体的方法预处理的胰岛对IBMIR的影响,为临床胰岛移植胰岛预处理提供一种有效的新方法。
材料与方法
l、实验动物及分组
本实验采用雄性Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供),体重250"-"3009。实验分为三组:一组将分离、纯化的胰岛和大鼠主动脉内皮细胞混合培养,形成胰岛一内皮细胞复合体,称为实验组;一组将分离、纯化的胰岛直接置于CMRLl066培养液中培养,称为对照组;一组为PBS液,称为阴性对照组。
2、胰岛、内皮细胞的获取,胰岛一内皮细胞复合体的制备,胰岛功能的测定和模拟体内循环模型的建立
大鼠胰腺原位灌注消化液、不连续密度梯度离心法获得纯化胰岛。胶原酶消化贴片法获取大鼠主动脉内皮细胞,并传代培养。胰岛、内皮细胞混合培养5天,获得内皮细胞包被的胰岛,即胰岛一内皮细胞复合体。培养过程中进行葡萄糖刺激试验以测定胰岛素释放指数。实验组、对照组及PBS阴性对照组分别置于模拟体内循环模型的3个管中反应,分别于灌注前,5分钟、15分钟、30分钟、60分钟留取血浆进行分析。
3、观察指标
对不同时间阴性对照组、对照组和实验组血浆中的TAT、C3a、血小板的数量进行测量和统计。通过HE染色和免疫组化染色进行形态学观察。
4、统计学分析
将所得数据用均值士标准差表示,采取t检验和方差分析,P<0.05认为有统计学意义,所有数据用SPSSl1.5软件处理。
结果
实验组和对照组血浆中的吖汀、C3a、血小板的数量在灌注后60分钟有明显差别(p,o.05)。免疫组化染色提示胰岛一内皮细胞复合体组较未包被组中性粒细胞侵润明显减少。
结论
1、胰岛一内皮细胞复合体并不影响胰岛的功能。
2、胰岛一内皮细胞复合体能够显著减少胰岛移植初期的凝血激活、补体激活、血小板消耗和炎细胞浸润,从而显著减轻IBMIR的反应。
3、胰岛一内皮细胞复合体的方法有可能成为临床胰岛移植中胰岛预处理的一种新方法。
关键词
大鼠;胰岛;内皮细胞;立即经血液介导的炎症反应2
・英文论著摘要・
Effectofcompositeislet--endothelialcellgraftstoinstantbloodmediatedinflammatoryreactioninislet
transplantation
Prefaceontherat
Althoughislettransplantationaregoodprospectsfordevelopment,itisstillfaced丽mtheneedforpancreaticmass,alowersurvivalrate,recurrenceofautoimmune
SOdiseasescausedbygraftfailureandon.Inclinicalislettransplantationthroughportal
onevein,thesubstantialisletlossaftertransplantationisofthemainproblem.At
occurrencetransplantation,the
aportalveininjectionofinsulinandbloodcontact,theofcoagulation|inflammatoryresponseprocess,wecalltheinstantbloodmediatedinflammatoryreaction.(IBMIR)mMⅡtarecharacterized、析tIlcoagulationandcomplementsystemactivation,thecollectionandinfiltrationofleukocytesandplateletsadhesionandactivation.TissuefactoristhemaininitiationfactorIBMIR.Thisexperimentistoobserveeffectofcompositeislet・endothelialcellgraftstoinstantblood
rat.mediatedinflammatoryreactioninislettransplantationin
Materials
Animal:SDratandMethodsasofeithersex、析thweighrangingfrom250-3009thedonor,
obtainby
gradientprovidedbyanimalcenterofChinamedicaluniversity.Purifiedisletsperfusionofratalepancreaticdigestivejuiceinsituanddiscontinuousdensity
centrifugation.Theendothelialcellsareobtainedbycollagenasedigestionmethodfrompatchrataortic,andculturedrandomlydividedinto8groupsIsletandendothelialcells
cells,thatis,compositeCO-cultured5days,accessingtoisletcoatedendothelial
islet-endothelialcellgrafts.Intheprocessofcultivate,weobtaininsulinreleaseindex埘n1glucose—stimulatedtest.Coatedgroup,uncoatedgroupandPBScontrolgroupwereplacedinsimulatedbloodcirculationsysteminthereactiontube3,respectively,beforereperfusion,5minutes,15minutes,30minutes,60minutesofcollectingplasmaforanalysis.TAT,C3aandplateletaremeasured.ThroughHEstainingand3
immunohistochemicalstainingwehaveamorphologicalobservation.Statisticalanalysis:allthedataexpressedin
evaluatedbyftestormeanlSD.ThesignificantofdifferencewasANOVA.P<0.05Wasconsideredhavingstatisticalsignificance.
Results
TheplasmaTAT,C3aandthenumberofplateletsinuncoatedgroupandthecompositeislet—endothelialcellgraftsgroupat60minutesafterreperfusionhaveasignificantdifference(尸<0.05).Theneutrophilfiltrationdecreasedsignificantlyinuncoatedgroupthanincompositeislet—endothelialcellgraftsgroupfromimmunohistochemicalstainingofpancreaticislettips.
Conclusions
1.Thecompositeislet-endothelialcellgraftsdoesnoteffectthefunctionofislet.2.Thecompositeislet-endothelialcellgraftsCansignificantlyreducetheinitialislettransplantationactivationofcoagulation,complementactivation,platelet
reducedconsumption
3.Theandinflammatorycellinfiltration,whichsignificantlytherespomeIBMIR.wayofcompositeislet-endothelialcellgraftsprovidesanewmethodforclinicalpancreatictransplantation.
Kevword
Rat;islets;endothelialcells;IBM瓜4
・英文缩略语・5
中国医科大学研究生学位论文独创性声明
本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
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论文作者签名:塑
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论文作者签名:慈i【如一jI.二
指导教师签名:
日
・论文・
胰岛一内皮细胞复合体对IBMIR的影响
・_●_---●一刖吾
糖尿病是常见病、多发病,其患病率正随着人民生活水平的提高,人口老化,生活方式的改变而迅速增加。据估计,到2030年,糖尿病患者的数量将由2000年的1.7亿增加到3.6亿【11。糖尿病久病可引起多系统损害,导致眼、肾、神经、心脏、血管等组织的慢性进行性病变,引起功能缺陷或衰竭。胰岛素的不足是糖尿病引起的代谢紊乱的主要原因;而其引起的高血糖症是糖尿病相关并发症的主要原因[21。长期以来,医学界重视控制高血糖,1993年以来,以循证医学为原则的DCCT和UKPDS分别对大样本的1型和2型糖尿病患者进行了为期平均达lO年的长期随访,结果表明,应用强化治疗使血糖接近正常化可减少微血管病变的发生【3】。但是,这种接近完美的办法比现行的常规治疗方法需要更多的关注和医疗服务【4】,给病人增加了负担,难以向更多的病人推广,同时也增加了并发严重低血糖的风险【5】这促使许多临床医师和病人寻求能够使血糖持久正常的方法。目前,达到并维持正常血糖,同时避免低血糖危险的唯一途径,就是胰岛替代治疗:胰腺移植或者胰岛移植。胰腺移植在临床上的地位已经确立,但只能在较大的移植中心实施,而且对病人的创伤大,并发症也多。胰岛移植属于细胞移植范畴,虽然胰岛移植后对外源性胰岛素依赖性的解除不如胰腺移植后高,但与胰腺移植相比具有安全、简便、利于体外移植物修饰、不良反应较低和可重复性等优点。为提高胰岛移植的成功率,尚有许多需要解决的问题。目前,有三大成果使胰岛移植得到进一步推动,有望成为治疗糖尿病的有效手段。首先,人类胰岛移植在控制糖尿病病情方面取得了巨大的成功;第二,胰腺保存技术的改进,使胰岛获得率提高,以及先进的免疫抑制和抗炎治疗,使胰岛移植在逆转糖尿病方面达到了同胰腺移植相近的效果【6】;第三,有重要的的证据表明,干细胞分化的胰岛细胞能够在实验中逆转糖尿病,这预示着胰岛移植有潜在无限的组织来源【78】。这些成果将引发大量进一步更深入的研究。1999年加拿大艾伯塔(Alberta)大学埃德蒙
(Edmonton)方案的提出,标志着糖尿病治疗进入了现代胰岛移植的全新阶段【9J。
胰岛移植虽然发展前景良好,但仍面临着需要供胰量大、存活率较低,自身免疫性疾病复发所致移植物失功等问题。在临床经门静脉胰岛移植中,移植后大量胰岛丢失是主要的问题之一。目前胰岛分离和纯化技术已经得到提高,分离率和纯化率得到大幅度提高,一次可从成人胰腺中获得近20万IEQ胰岛,但一般仍需要2个以上的成人新鲜胰腺【101。在移植过程中,注入门静脉的胰岛与血液接触,发生一种凝血/炎症反应过程,我们称之为立即经血液介导的炎症反应(IBMIR)
【1ll。IBMIR以凝血和补体系统的快速激活,胰岛内白细胞的募集和渗入,血小板的快速粘合和激活为特征。血栓在胰岛内形成,使胰岛在形态学和完整性上遭到破坏。这就可能解释临床胰岛移植过程中胰岛的大量丢失【12】,以及移植后门静脉内血栓形成。如果能够有效地控制IBMIR,胰岛的存活比例将获得很大的提高,从而减少供体的需要量,甚至达到1:1的理想比例。经大量研究发现,组织因子是IBMIR的主要启动因子‘13】[141。组织因子是一种分子量为47kDa的跨膜糖蛋白。在生理情况下,血管内皮细胞不表达组织因子【151。分离后的胰岛合成和分泌凝血激酶(组织因子),这是一些细胞因子受体超家族1型,移植时表达在胰岛表面成为IBMIR的主要触发机制【161。糖尿病病人的胰岛素需求,维持正常的血糖和糖基化血红蛋白水平【11】,即只需要不到10万IEQ胰岛,这与胰岛移植量之间有很大的差异。供胰需求量大、存活率低,这在供体日益缺乏的今天是阻碍胰岛移植发展的重要“瓶颈”。但随着技术的进步,相信胰岛移植会发展成为理想的根治糖尿病的方法,使更多的患者受益。使临床胰岛移植成为一种更为有效的治疗糖尿病的方法【12】。
预防IBMIR包括:受者的系统治疗;预处理分离的胰岛;在异种移植中,对移植器官进行基因修饰【13】。到目前,已经找到了很多方法,并能够有效地抑制IBMIR。经过临床研究发现:经过胰岛表面肝素化的预处理后,能够有效地抑制IBMIR[14】;硫酸低分子葡聚糖(LMW—DS;MM5000)能够抑制血液凝固和补体激活
【15】;经过anti—TF预处理能够限制IBMIR,从而提高胰岛的存活率【16】;尼克酰胺
and能够减少胰岛表达TFMCP.1,从而抑制IBMIR[171;凝血酶抑制剂如美加拉群
能够减少IBMIR[18】。上面所述方法的不利之处是受体破坏凝血稳态后的全身副
作用。在临床经肝置入导管时这一点尤为重要,因为这些方法很明显增加了出血的危险性。组织因子是IBMIR的主要启动因子【13】【141。组织因子的多少与凝血反应呈正相关。临床研究发现,TFPI可以有效地抑制凝血反应,并且明显呈剂量相关‘191。所以,如果在移植前,将内皮细胞包被胰岛细胞,即胰岛一内皮细胞复合体,将有可能有效抑制IBMIR。
材料和方法
一、实验材料
1、实验动物及分组
本实验采用雄-|生Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供),体重250~"3009。实验分为三组:一组将分离、纯化的胰岛和大鼠主动脉内皮细胞混合培养,形成胰岛一内皮细胞复合体,称为实验组;一组将分离、纯化的胰岛直接置于CMRLl066培养液中培养,称为对照组;一组为PBS液,称为阴性对照组。
2、主要仪器设备
高速离心机(TDL.5A);DHW.600三用电热恒温水浴箱;多功能振荡器;C02细胞培养箱;超净工作台;Olympus倒置显微镜;低温离心机与荧光法胰岛素测定试剂盒由美国Beckman公司生产。
3、主要试剂
胶原酶V型(C.9263)、双硫踪(Dithizone,DTZ)、Ficoll-400(F8363)、I型胶原酶、胰蛋白酶购自Sigma公司;小牛血清、DMEM培养液、CMRLl066培养液、Kreb’s.Hank’s液购自Gbico公司;TAT试剂盒、C3a试剂盒、抗大鼠CD34荧光素抗体购自武汉博士德公司;兔抗人CDllb抗体试剂盒购自迈新公司;DAB试剂盒购自北京中山公司。
二、实验方法
1、胰岛的切取、分离和纯化
取未禁食的SD大鼠,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,仰卧位,暴露胆管,寻找胆管穿过胰腺进入十二指肠处(大鼠无独立胰管,胆管穿过胰腺收集胰液,可称为胰胆管),3一O丝线缝合结扎,防止逆行灌注时消化液进入消化道。同时应注
意在十二指肠侧结扎,尽量避免过多损伤胰腺。将胃和脾脏向外牵拉,充分暴露胰尾,在胰腺周围放置冰屑保持胰腺低温。在肝门胆管分叉处逆行胆管插管,并缓慢(1mL/min)灌注含冷却的胶原酶(胶原酶V型,1.5mg/mL)的Hank’s缓冲液10—12mL,使胰腺完全膨胀。在灌注前应切断下腔静脉和腹主动脉放血以避免出血性胰腺炎,影响胰岛分离量。完整切取胰腺,并注意保持被膜完整性避免消化液外漏。而后将胰腺置入含相同浓度胶原酶的缓冲液的50mL硅化的离心管中冰浴,防止过度消化。
37℃水浴消化12—15分钟,期间震荡离心管。消化过程中严密观察胰腺消化情况,当胰腺呈现“融化",消化液变混浊,出现乳糜样时,即可迅速加入冷却的50mLHank’s缓冲液并冰浴,终止消化。消化的胰腺组织经震荡后低温离心(8℃,800rpmX2min),反复清洗2次。去除含有大脂肪颗粒的上清后加入25mLHank’s缓冲液再次震荡混匀,经80目不锈钢筛网过滤。如残留未完全消化的大块胰腺组织,可重复胶原酶消化。将过滤后的细胞悬液再次离心(8℃,1000rpmx3min),尽量去除上清液,沉淀物为胰岛细胞和外分泌腺的混合物。把沉淀物移入15ml离心管中离心,尽量去除沉淀以上的液体,用Hank’s液配制的25%的Ficoll4ml与其混匀,然后再分别加入23%,20.5%和11%的Ficoll,分别为3ml,2ml和2ml。加入时宜缓慢,保持分层清楚,然后2400r/min离心10min。离心后于23%和20.5%,20.5%和11%交界处吸取胰岛细胞混悬物,用CMRL.1066培养液清洗一次(1000
测。r/rain,4℃.8℃,3min),置于CMRL.1066培养液中培养并供检
2、大鼠主动脉内皮细胞的原代培养
采用胶原酶消化贴片法培养细胞。取Wistar大鼠,颈椎脱臼处死,开胸取4—6cm胸主动脉,去除周围结缔组织,PBS冲洗残血,内膜外翻置入含O.19/LI型胶原酶的Hank’s缓冲液中37℃孵育15min。取出胸主动脉剖开并剪成2X2mm小片,内膜向下贴附于24孔培养皿中,倒置2h后加入含20%d、牛血清的DMEM培养液,37。C,5%C02培养。观察细胞形态。原代细胞经0.25%胰酶消化,DMEM培养液传代培养,取2—5代细胞备用,荧光素FITC标记的CD34抗体标记。
3、胰岛一内皮细胞复合体的制备
内皮细胞与胰岛按30,000--,50,000:1000一-3000IEQ的比例在2501.tL的DMEM培养液中孵育l'一2h,再转移到15cm2共同培养2~7天,胰岛表面的覆盖程度由光学和英光显微镜评估。使胰岛为内皮细胞所覆盖,覆盖程度大概在50--.90%。
4、体外胰岛功能试验
对照组与实验组分别于培养的第1、5天计数10IEQ的胰岛,用含低浓度葡萄糖(2.8retool/L)的Kreb’s.Hank's液(含有lOmmol/LHEPES和0.25%牛血清白蛋白)孵育2h,然后用含有高浓度葡萄糖(16.7mmol/L葡萄糖)的心eb’S.Hank’S液孵育1h,收集第2h和第3h的培养液,采用化学发光免疫方法检测培养液中胰岛素含量,计算胰岛素释放指数(SI):SI=第3h(高糖环境)的胰岛素含量/第2h(低糖环境)的胰岛素含量;第1h孵育主要的目的是使胰岛细胞稳定。
5、模拟体内循环模型的建立
模拟体内循环模型为经过肝素化处理过内表面的管形系统,该系统置于37"C的保温箱中通过不断的摇动来模拟血液流动(见图1)。阴性对照组、对照组和实验组的标本分别加入模拟体内循环模型中。第1个管内加入2"-'5lal的PBS液;第2个管内加入2~5ul未包被的胰岛;第3个管内加入2~51.tl的内皮细胞包被的胰岛。反应过程共60min,分别于灌注前,5,15,30,60min时抽取lml血清留待结果分析。收集沉淀于管形系统底部血凝块进行免疫组化分析。10
图1,模拟体内循环模型
6、观察指标
(1)胰岛活性检测即胰岛索释放实验:计数101EQ胰岛.用含低浓度葡萄糖(2.Smmol/L)的Kreb。s-Hank’s液(含有10mmol/LHEPES和O25%牛血清白蛋白)孵育2h,然后用含有高浓度葡萄糖(167mmol/L葡萄糖)的Kreb’s-Hank's液孵育lh,收集第2h和第3h的培养液,采用化学发光免疫方法检测培养液中胰岛素含量,计算胰岛素释放指数(sI):sI=第3h(高糖环境)的胰岛素含量/第2h(低糖环境)的胰岛素含量:第1h孵育主要的目的是使胰岛细胞稳定。
(2)血液中血小板的数量经过血常规测定,
(3)血浆中的TAT、C3a的含量用ELISA试剂盒处理后,分光光度计进行分析。
(4)通过HE染色和免疫组化染色进行形态学观察。
三、统计学处理
将所得数据用均值士标准差表不。用SPSSI1.5统计软件进行t检验,P<005认为有统计学意义。
结果
1、胰岛的形态和鉴定
倒置显微镜下可见大量表面光滑、不透光的暗黄色胰岛细胞团,而外分泌腺ll
碎片几乎见不到(罔I)。DTZ特异地与胰岛B细胞内胰岛素颗粒中锌螯合使其着色。经DTZ染色10rain后,90%以上细胞团呈猩红色或红色(图2)。每只供鼠可分离300--400当量胰岛。纯度町达到85%一90%。
rr1
L
一隆譬
图3.大鼠胰岛DTZ染色(×100)图2,分离纯化的大鼠胰岛(×100)
2、胰岛素释放试验
对照组和实验组的胰岛在培养的第5天与第1天比较,胰岛素释放指数明显降低(n-5,P<005);而在培养的第1天与第5灭,对照维和实验组间的胰岛素释放指数无显著性差异(.D>o05)(见表1)
表1,各组胰岛培养第l、5天的胰岛素释放指数
3、胰岛一内皮细胞复合体的形态学观察和鉴定(见图2、3、4)光镜F可见胰岛一内皮细胞复合体结构完整,外周较为模糊,不光滑(见图2);荧光显微镜下可见同+胰岛外周为经荧光素标记CD34抗体荧光染色的内皮细胞均匀覆盖(见图3);光镜下见经HE染色的胰岛结构紧凑,周围被扁平内皮细胞所覆盖(见图4)。
口
图4,胰岛一内皮细胞复
所见(×200)r-
..C
图6胰岛一内皮细胞复合体HE染色光镜下所见(×400)接
4、凝血激活的变化情况
各组反映凝m激活情况的血浆中TAT的含量在实验的I小时内均呈卜升趋势;阴性对照组变化缓慢;对照组和实验组增高迅速。但实验组较对照组增高缓慢,于30rain、60rain均存在显著性差异(n-5,P<005)。(见袁2,图7)表2,各组血清中TAT含量的变化情况
7
|
|\
一.一.一/∥..
O5153060
时间(min)
图7,各组血清中代表凝血激活的TAT含量变化比较
5、补体激活的变化情况
各组反映补体激活情况的血浆中C3a的含量在实验的1小时内均呈上升趋势;阴性对照组和实验组变化缓慢,两组之间无显著差异(n=5,P>O.05);对照组增高迅速,于30min、60rain与实验组之间存在显著性差异(n_5,P<O.05)。表3,图8)(见
表3,各组血清中C3a含量变化情况14
1200——
1000尸
,一、
≤800|
bo
5600}
c-∞e3400上声o
200/钐
-一一—‘/一’_-
OII-III
O5153060
时间(min)
图8,各组血清中代表补体激活的C3a含量变化比较
6、血小板消耗的情况
各组血液中血小板的含量在实验的l小时内均呈下降趋势;在实验的30rain内,各组之间无显著差异(n=5,P>O.05);60min各组之间存在显著性差异(n_5,P<O.05),且实验组的血小板消耗明显少于对照组。(见表4,图9)
表4,各组血清中血小板消耗的情况比较
Omin5min15min30min60rain
对照组(×109/L)287.8--+6.5251.8-+6.2213.0-+5.5172.2-+3.99.6-+6.2实验组(×109/L)287.8-+6.5271.6-+8.5201.2-+3.7179.0-+5.4109.4-+3.1
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幽7,各组血清中血小板消耗的情况比较
7、炎性细胞侵润的形态学观察(见图9、10)
免疫组化染色(CDllb,S-P法,BAD显色)示,实验组的胰岛结构完整周围中性粒细胞侵润较少;对照组的胰岛周围巾性j盥细胞浸润明显增多。图8,实验组胰岛内皮细胞复合体圈9,对照组胰岛一内皮细胞复合体
CDIlb免疫组化染色光镜所见(×400)CDllb免疫组化染色光镜所见(×400)
讨论
在临床经门静脉胰岛移植中,移植后大量胰岛丢失是主要的问题之一。这也使得要达到患者无外源性胰岛素依赖,需要多个供体。IBMIR是临床胰岛移植过程中胰岛的大量丢失的主要原因。所以,减少组织因子与血液的接触,可以抑制
凝血反应,进而抑制IBMIR,可能是一种有效的方法。这就需要制造一种生物活性表面,能够达到上诉目的,但又使胰岛完整有功能。在生理情况下,血管内皮细胞不表达组织因子【201,目前,内皮细胞是可耐受与血直接接触的唯一类型的细胞;并且内皮细胞具有贴壁生长的特点。试验中我们可以看到,内皮细胞正是因具有提笔生长的特性而能够成功的包被在胰岛周围,形成了一层生物活性膜。
因为组织因子是IBMIR的主要触发机制,且反应的程度与胰岛表面组织因子的表达量呈正相关。所以,胰岛一内皮细胞复合体能够通过减少胰岛表面组织因子与血液的直接接触而减少了凝血激活,补体激活,血小板消耗和炎症反应。通过本实验可以看出,对比胰岛置入模拟门脉流动的血液中60min后,胰岛一内皮细胞复合体组的血浆中n盯的含量明显减少,提示凝血激活减少;血浆中C3a的含量明显减少,提示补体激活减少;血小板的数量明显增多,提示血小板的消耗减少;血凝块中的中性粒细胞减少,提示炎症反应减轻。从而减轻了IBMIR的反应。
虽然胰岛一内皮细胞复合体能够显著减轻IBMIR的反应,但若因内皮细胞包被胰岛而影响了胰岛的功能,则也达不到临床应用的目的。所以我们对胰岛一内皮细胞复合体培养过程进行了胰岛功能的检测,并未发现胰岛功能有显著性差异。考虑因为内皮细胞未完全包被,且细胞之间连接易于胰岛与血液之间进行营养物质和氧的交换所致。
尽管大鼠与人具有显而易见的种间差异,但大鼠与人胰岛在很多方面具有相似性。我们也通过建立模拟体内血液流动模型来创造尽量接近临床实际的物理、生化环境。我们的研究结果提示,胰岛一内皮细胞复合体能够显著减轻IBMIR的反应,从而为临床胰岛移植中胰岛的预处理提供了一种新方法。
结宝口论◆匕
1、胰岛一内皮细胞复合体并不影响胰岛的功能。
2、胰岛一内皮细胞复合体能够显著减少胰岛移植初期的凝血激活、补体激活、血小板消耗和炎细胞浸润,从而显著减轻IBMIR的反应。
3、胰岛一内皮细胞复合体的方法有可能成为临床胰岛移植中胰岛预处理的一种新方法。17
・本研究创新性的自我评价・
临床胰岛移植中的一个重要问题是如何减少或避免IBMIR的发生。国内外学者研究了很多方法,但都有破坏血凝稳态的副作用。本实验在国内首次成功构建胰岛一内皮细胞复合体,同时证明胰岛一内皮细胞复合体的方法能够显著减轻IBMIR的反应,为临床胰岛移植中胰岛的预处理提供了一种新方法。18
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