蛋鸡输卵管积液的诊断初报

蛋鸡输卵管积液的诊断初报

张 秀 美1,2 胡北侠1,2 黄艳艳1,2 李士娟31

（1. 山东省农科院畜牧兽医研究所，2. 山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室， 3.

济南市农业开发办公室，山东济南，250100）

2006年11月，山东某肉种鸡场爆发了以产蛋下降，外观腹部膨大，走路如企鹅样，输卵管管壁变薄，管内积有大量澄清、透明的液体为特征的疾病，经综合诊断，确定为新城疫病毒感染。 1. 发病情况

该场为新建种鸡厂，2006年4月20日和4月27日分两批引进罗斯父母代肉种鸡各3500套。第一批28周龄，第二批27周龄，在鸡群刚进入产蛋率80%时开始发病。29周龄死淘数量明显增多，发病率3-5%，产蛋率稍有下降，绝大部分病鸡外观发育良好，鸡冠红润，羽毛整洁光亮，精神、采食、饮水，粪便均正常。腹部日渐增大，站立行走呈“企鹅”姿势，腹部胀满，触摸有波动感。个别鸡精神沉郁，拉白色或黄绿色稀粪，采食下降，抗生素治疗无效。

病鸡解剖后，病变基本一致。病鸡腹腔内被巨大的输卵管水性囊肿所侵占，输卵管壁菲薄透明如蝉衣，毛细血管清晰可见，刺破囊肿的输卵管取出来，放出700-1000毫升液体，透明清亮无味，病鸡卵巢发育正常，消化道、呼吸道及其它内脏器官均未见异常。 2. 实验室诊断

2.1抗体检测：发病鸡翅静脉采血分离血清，共采集20份。

2.1.1衣原体抗体检测：使用衣原体间接血凝试剂盒（购自兰州兽医研究所，批号：060901），同时设正常鸡群作为对照。

2.1.2传染性支气管炎（IB ）抗体检测：使用进口IBV ELISA抗体检测试剂盒（IDEXX ）。 2.1.3禽流感(H5、H9) 和新城疫抗体检测：禽流感、新城疫血凝抗原购自青岛动检所诊断液中心，血凝和血凝抑制试验（HA and HI test）按照规程进行。

2.2衣原体病原检测：使用进口的乳胶标记衣原体免疫层析试纸条（Unipath 有限公司，批号：S20040026）, 检测材料为输卵管上皮和积液。

支原体检测：使用支原体鉴定、计数和药敏试剂盒（珠海丽珠试剂有限公司，批号：20050017），检测材料为输卵管上皮和积液。

2.3细菌分离：无菌取病鸡肝、脾和输卵管积液，分别涂布5%血清琼脂板、普通琼脂板和麦康凯平板，37℃温箱内培养24h 。

2.4病毒分离：分别取肝脏、脾脏（编号：A 组）、输卵管（编号：B 组）和输卵管积液（编号：C 组）加无菌生理盐水匀浆处理后，-20℃反复冻融三次。8000rpm 离心10分钟，取上清。无菌检验后接种9～11日龄SPF 鸡胚。37℃温箱内孵至120h ，其间每天照胚两次，弃去24 h 内死亡鸡胚。收集24～120h 死亡、存活鸡胚尿囊液，测定HA 效价。第一代无HA 效价的尿囊液，无1．作者简介：张秀美（1956-），女，江苏徐州人，硕士，研究员。E-mail ：[email protected].研究方向：禽病诊断与防治。基金项目：山东省十五科技攻关（项目编号：022020103）；国家十一五科技支撑计划（项目编号： 2006BAD06A16-2）。

菌处理后继续接种9～11日龄SPF 鸡胚传代，如此反复传至第四代。最后一代孵鸡胚至18日龄，观察鸡胚病变。

2.5病毒鉴定：首先用禽流感（H5、H9）、新城疫阳性血清做HI 试验。确定为新城疫病毒后，用鉴别NDV 强弱毒株的RT-PCR 方法进行初步鉴定，具体方法参考文献[1]。 3. 诊断结果

3.1衣原体抗体检测结果： 衣原体抗体阳性率10%，不高于正常鸡群的抗体阳性率。 3.2 IBV抗体检测结果见表1。

3.3禽流感(H5、H9) 和新城疫抗体检测结果见表1.

3.4衣原体检测结果：输卵管上皮和积液衣原体抗原检测均为阴性。 3.5支原体检测结果：输卵管上皮和积液支原体抗原检测均为阴性. 3.6细菌分离结果： 病鸡肝、脾和输卵管积液细菌分离均为阴性。

3.7病毒分离结果：A 组（肝脏、脾脏）、B 组（输卵管组织）经鸡胚盲传至第四代，尿囊液无HA 效价，第四代鸡胚孵至18日龄无发育迟缓、卷缩等明显病变。B 组（输卵管组织）、C 组（输卵管积液）经鸡胚盲传至第1～2代，尿囊液无HA 效价。经鸡胚盲传至第3代，尿囊液HA 效价为7～9log2。

表1 血清样品IBV 、禽流感（H5、H9）和NDV 抗体检测结果

样品编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

IBV 抗体滴度（ELISA ）

7577 3481 8845 11507 7814 7008 12879 9165 6930 5305 9606 5286 5516 2389 3610 6970 7479 12879 8447 6871

H5 9 10 8 9 8 8 8 7 9 7 5 9 8 9 9 9 9 7 11 9

HI 抗体水平（log2）

H9 10 9 10 9 9 12 9 10 8 11 10 11 10 9 11 10 10 7 10 11

ND 10 12 12 14 13 14 9 12 12 11 12 10 11 9 12 11 13 15 11 11

3.8病毒鉴定结果：用禽流感（H5、H9）、新城疫阳性血清做HI 试验，结果仅与NDV 阳性血清反应阳性，与禽流感（H5、H9）阳性血清反应阴性，初步确定为NDV 。RT-PCR 鉴定结果为既

有NDV 强毒也有弱毒。 4. 分析与讨论：

4.1国内自90年代开始有类似蛋鸡输卵管积液临床病例的报道，由于一直未能分离到病原，有的学者便根据个人的临床经验，加上简单的染色、镜检和血清学调查，认为是衣原体感染[2,3,4,5]。通过本研究，我们从病原学和血清学两方面进行诊断，认为衣原体感染不是该病的直接因素。 4.2病毒分离结果表明病鸡输卵管组织和积液内存在新城疫病毒，但是肝脏、肾脏内均未分离到病毒，说明感染的NDV 仅在病鸡体内有限的部位（输卵管内）复制，而且病毒滴度很低。这也许是长期以来未能分离的病原的原因之一。

4.3抗体检测结果表明，鸡群体内NDV 抗体水平较高。但是，已有的研究结果表明，高抗体水平下的免疫鸡群仍然能够感染NDV 强毒，并且感染鸡群能够向外排毒，造成NDV 强毒在鸡群中循环传播[6,7,8]。本研究结果再次证明了这一点。

4.4通过本研究，我们还不能十分确定NDV 是造成蛋鸡输卵管积液的唯一病原，还需要更多类似病例的确诊和建立动物模型（复制病例），以及对本次分离的NDV 进行全面、系统的鉴定。（原载《家禽科学》2007，4：26-27. ） 参考文献：略。