常见微生物培养基的制备
常见微生物培养基的制备
一、实验目的与内容 1. 实验目的：
2. 实验内容：
二、实验原理（简略） 培养基
高压蒸汽灭菌是利用高压蒸汽产生的高于100℃的高温、以及热蒸汽的穿透能力，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
本实验通过配制适用于一般细菌、放线菌和真菌的三种培养基来了解和掌握配制培养基的基本原理和方法。如高氏1号培养基中的磷酸盐和镁盐相互混合时易产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将2种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还需要补加微量元素，如高氏1号培养基中的FeSO 4.7H 2O 的用量只有0.001%，在配制培养基时需预先配成高浓度的FeSO 4.7H 2O 贮备液，然后再按需加入一定的量到培养基中。
三、实验器材 1. 溶液和试剂 2. 仪器和其他用品 四、实验步骤
1. 牛肉膏蛋白胨培养基(营养琼脂培养基)
灭菌：将上述培养基以121°C,高压蒸汽灭菌20min 。具体操作步骤如下：
①加水：往锅内加入适量的水，切勿加少了。 ②装料：把要灭菌的材料装入锅内。
③加盖：关严灭菌锅盖和其它阀门，勿使漏气。 ④加热。编灭菌的程序
⑤排放冷空气：当压力上升至0.05 MPa时，打开放气阀，将锅内的冷空气放走，待压力下降为“0”时，再关闭放气阀门。
⑥升压。
⑦保压：当压力上升至所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
⑧降压：达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到“O”后，打开放气阀，再开盖。
搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50°C左右(以防斜面上冷凝水太多) ，将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
无菌检查：将灭菌培养基放入37°C的温室中培养24~28 h ,以检查灭菌是否彻底。
2. 高氏1号培养基(培养放线菌用) 培养基的配方如下：
3. 马丁氏培养基(分离真菌用) 培养基的配方如下：
五、注意事项
六、实验结果分析
七、实验报告
1. 将培养基按成分来源和物理状态进行分类； 2. 判断培养基高压蒸汽灭菌是否彻底。 八、思考与探究
1. 试述高压蒸气灭菌的主要操作过程和注意事项。
2. 培养基配好后为什么要立即灭菌？如何检验灭菌后的培养基是否无菌？
3. 高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽? 灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物？
4. 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素?
5. 灭菌在微生物实验操作中有何重要意义?