分子与细胞 相关实验注意事项
常见物质的鉴定
质壁分离及复原实验的应用
①证明原生质层是选择透过性膜。成熟的植物细胞处在一定浓度的溶液中构成了渗透系统。
②判断植物细胞的死活。只活细胞的原生质层才是选择透过性膜,才能发生质壁分离与复原。
③测定植物细胞液的浓度。将成熟的植物细胞放入系列浓度梯度的蔗糖溶液中,观察质壁分离的情况,即可测定出该细胞液的浓度范围。
④光镜下观察细胞膜的存在。正常情况下,植物细胞膜很薄,紧贴细胞壁,不易观察到。质壁分离后,原生质层最外面的界线即为细胞膜。
实验注意的几个问题
①实验成功的关键之一是实验材料的选择。要选取成熟的、带有一定颜色的植物组织进行实验。
②滴加蔗糖溶液或清水时,应在载物台上操作;观察时,用低倍物镜即可。
③选用的蔗糖溶液浓度要适宜。过低不足以引起质壁分离或质壁分离所需时间过长;过高,则造成植物细胞失水过多过快而死亡。原生质层的选择透过性是发生质壁分离和复原的内在前提,死亡的细胞既不会发生质壁分离,也不会发生质壁分离复原。
④发生质壁分离复原需要将植物再置于低浓度的溶液或清水中,但如果所用溶液为葡萄糖、KNO 3、NaCl 、尿素、乙二醇等,质壁分离后因细胞主动或被动吸收溶质微粒而使细胞液浓度增大,植物细胞会吸水引起质壁分离后的自动复原。
⑤质壁分离后,在原生质层和细胞壁之间,充斥的液体为外界溶液(如蔗糖溶液)。 ⑥质壁分离过程中,外界溶液浓度大于细胞液浓度;质壁分离复原过程中,外界溶液浓度小于细胞液浓度。
生物代谢实验条件的控制方法
(1)隔绝气体密封玻璃容器可用石蜡;隔绝液体和空气可用油膜;排气或充气可利用升温或冷却;增加水中氧气——泵入空气、通入氧、放绿色植物; 减少水中氧气——容器密封、油膜覆盖、用凉开水;除去容器中CO 2——NaOH 溶液;增加CO 2——碳酸氢钠。
(2)固体材料的研磨可用二氧化硅;叶绿体或其他细胞器要注意保护(叶绿体用碳酸钙);细胞破裂加清水,细胞失水加氯化钠盐溶液。
(3)光控制:遮光或光照,单色光棱镜色散或薄膜滤光。
(4)温度:恒温水浴保温,降温冷却,升温加热。
---(5)pH :缓冲溶液(HCO 3/H2CO 3 HPO 43/H2PO 42)。
(6)矿质元素、激素的作用探究:施加或除去,注意量的控制。
(7)组织或器官的作用探究:摘除法、移植法。
(8)微生物的分离:选择培养,注意营养物质变化。
(9)除去叶中的淀粉,饥饿处理;析出或溶解物质,水溶性的根据其溶解度,脂溶性的可用丙酮或酒精等。
(10)去叶中叶绿素——酒精隔水加热脱色。
(11)血液抗凝——加入柠檬酸钠。
(12)线粒体提取——细胞匀浆离心。