人睾丸支持细胞的分离培养及鉴定
湖南师范大学学报(医学版)
J Hunan Nor ma l Univ (M ed Sc i ) 2008, 5(1) 5
人睾丸支持细胞的分离培养及鉴定
陶 科1, 2, 孙 源1, 范立青13
(1. 中南大学生殖与干细胞工程研究所, 湖南长沙 410078;
21湖南师范大学医学院, 湖南长沙 410006) 3
[摘要] 目的:建立人胚胎睾丸支持细胞体外分离, 纯化及培养的方法, 并进行鉴定。方法:取胎龄13～28周的胚胎睾丸, 采用两步酶消化, 添加特定培养基, 培养过程中纯化睾丸支持细胞, 并用免疫荧光及R T 2PCR 技术对培养细胞进行鉴定。结果:通过检测阶段特异性标记物M IS 提示胚胎睾丸支持细胞占培养细胞总数的90%以上, 经RT 2PCR 及免疫荧光检测所培养细胞具有分泌产生S CF 的能力。结论:在本研究建立的培养体系下细胞可稳定传代, 经鉴定为高纯度的睾丸支持细胞, 并维持了其体内生物学活性。
[关键词] 睾丸支持细胞; 分离; 细胞培养; 鉴定
[中图分类号]R394 [文献标识码]A [文章编号]1673-016x (2008)01-0005-04
Isol a ti on, C ultur e and Iden tif i ca ti on of Hu m an Ser toli C ells
T AO Ke 1,2, S U N Yuan , F AN L i 2qing 113
(1. Resea rch Institute of Repro ductio n and ES Cells , Gentra l Souch U niv ersity, Changsha 410078, Chi na;
21M edicine School, H una n N or ma l U niv ersit y, Changsha 410006, Chi na)
[Abstra ct]O bject ive The a i m of our study was to establish a m ethod of is ola tion, purificati on culture and identification f or human feta l Sert oli cells in vitr o. M ethod s The testes were obta ined fr om fetuse sof 13～28week of ge stati on. Testis cellswere collec ted by t wo 2step enzy m atic digesti on and cultivated w ith a modified syste m. The Sertoli cells were purified in the culture system , and i mm unofluorescence staining and R T 2PCR assay were ca rried for the identificati on of the cultured ce lls . Re sult s The purity of the cultured cells reached more than 90%by de 2tecti on of M I S, a stage spec ific m arker of feta l Se rtoli ce lls . The ability of S CF pr oducti on of the cultured cellswas confir m ed by RT 2PCR and i mm unofluorescence a ssay . C onclusion The cultured cells could be passaged steadily in our defined culture system and identified as highly purified Sertoli ce lls, which maintains its inte r nal bi ological activity .
[Key words]sertoli cells; is olation; cell cultur e; identifica tion
睾丸支持细胞(Sertoli ce ll, SCs ) 及其结构是由
德国人Enrico Sert oli 在1865年首先描述。Sertoli
细胞是精曲小管的重要组成部分, 可分泌雄激素结
合蛋白(androgen binding p r otein , A B P ) 、抑制素
(inhibin ) 及雌激素等, 相邻Sert oli 细胞之间形成的
紧密连结(inte r Sertoli cell tight junctions ) 是构成血
-睾屏障的主要结构, 多年来Sertoli 细胞的功能被认为是生精细胞的支架, 为生精细胞提供必需的营养物质, 参与精子发生及其调控。因此, Sert oli 细胞体外培养是进行生殖细胞培养研究的基础[1-3]。本研究建立了体外分离人胚胎Sertoli 细胞的方法, 稳定传代并进行了标记物和功能的鉴定, 为Sertoli 细胞发生与功能研究, 及生殖细胞的体外培养打下基3收稿日期:2007-12-28
基金项目:国家自然科学基金资助(30470884)
作者简介:陶科(1978—) , 女, 汉族, 湖北宜昌人, 在读硕士研究生, 从事医学遗传学研究。E 2mail:coreg @sina . c om
3通讯作者:范立青, E 2mail:f anli q ings zzx@si na . com