依非韦伦原料有机残留溶剂方法验证(印度)

1. 目的

为依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法“AMV/F1010/RS-GC/00”分析方法提供验证数据支持。

2. 再验证关键指标

2.1. 测试步骤（见5.0节）

应检查标准溶液的拖尾因子、理论板数、容量因子（K 值），确保分析方法的有效性。 可接受标准：

拖尾因子不得过1.5；理论板数不得少于5000；容量因子不得小于1.0。

上述三个指标是除验证方案规定的系统适用性指标（分离度、RSD%）外要求的指标。 2.2. 线性范围（见8.5节）

标准浓度序列溶液的Y 截距不得过峰面积的10%。除检查验证方案所规定的相关系数外应检查此指标。 3. 再验证原因

基于客户最佳系统适用性建议实施检验方法变更。

依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法分析方法验证方案

方案编号：

AMV/F1010/RS-GC/00

批准

1. 目的：以气相顶空法验证依非韦伦中有机残留溶剂，确保分析方法符合预期要求。 2. 范围：本方案适用于×××公司QC 实验室依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法的验证。 3. 责任：按下述完成此项验证的责任： 3.1.QC ：执行验证。

3.2.QC ：验证数据汇总、出具验证报告书并复核。 3.3.QA ：验证数据的检查、验证报告的批准。 4. 依据：ICH 指南Q2（R1）。 5. 测试步骤：

应使用HPLC 级甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯作为对照品。以HPLC 级二

甲亚砜（DMSO ）为稀释剂。 色谱条件：

色谱柱：DB-624，30m ×0.53mm （内径），3μ毛细管色谱柱。 载气（氮气）流速：3.0ml/min。

程序升温：先于40℃维持2分钟，再以10℃/分钟升至108℃，维持8分钟，再以10℃/分钟升至220℃，维持2分钟。 进样室温度：140℃。 检测器温度：260℃。 分流比：1：5。

运行时间：30分钟。 顶空条件：

样品保温室温度：95℃。 样品平衡时间：40分钟。 进样管温度：105℃。 进样体积：1ml （气态）。 空白溶液的制备：

精密吸取二甲亚砜5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。 标准储备溶液的制备：

取50ml 二甲亚砜，置于100ml 量瓶中，分别精密加入0.30g 甲醇，0.50g 异丙醇，0.50g 甲基叔丁基醚（MTBE ），0.50g 正庚烷，0.089g 甲苯，以二甲亚砜溶解并稀释至刻度。 标准溶液的制备：

精密吸取10ml 标准储备液，置于100ml 量瓶中，以二甲亚砜稀释至刻度。精密吸取此溶液5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。 供试品溶液的制备：

精密称取依非韦伦供试品0.50g ，置于顶空瓶中，加5ml 二甲亚砜，以丁基橡胶塞铝盖密封。 测试步骤：

先注入空白溶液一针，再注入标准溶液6针，按下述检查系统适用性：

1. 标准溶液6次进样甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的峰面积RSD%不得过15.0%。

2. 上述各溶剂峰的分离度不得低于3.0。

如通过系统适用性检测，再进供试品溶液一次，按下式计算残留溶剂含量（ppm ）： 公式：

AT WS 10 5

残留溶剂%=———×——×——×——×106 AS 100 100 WT 式中：

AT —供试品溶液溶剂峰峰面积； AS —标准溶液溶剂峰峰面积；

WS —用于标准品的溶剂加入量，g ； WT —供试品称样量，g 。

6. 预研究要求：所有验证实验均应按验证方案规定在合格的、经校验的气相、顶空色谱系统中完成。 7. 原材料：

应使用依非韦伦成品批用于验证并在验证报告中注明批号。

8. 验证参数 8.1. 专属性

8.2. 系统精密度和方法精密度 8.3. 中间精密度 8.4. 检测限和定量限 8.5. 线性和范围 8.6. 准确度 8.7. 耐用性 8.1. 专属性

方法学：分别进样DMSO 及规定浓度的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯、未加5个标准溶液的供试液、加5个标准溶液的供试液，连续进样6次，检查： 8.1.1. 所有溶剂峰的保留时间。 8.1.2. 所有溶剂峰的分离度。

8.1.3. 空白稀释剂对溶剂峰保留时间的影响。 可接受标准：

标准溶液连续进样6次的溶剂峰峰面积的RSD%均不得过15.0%；依非韦伦加标溶液的各溶剂峰应分离良好，分离度不得低于3.0%；空白稀释剂对溶剂峰保留时间的影响不得过0.5%。 8.2. 系统精密度和方法精密度 系统精密度：

按上述测试步骤制备标准溶液，以气相顶空法连续进样6次，计算标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%。 方法精密度：

分别制备6个依非韦伦供试液，每个供试液均加入25%的标准溶液，分别以顶空法进样1次，另取未加标依非韦伦供试液进样，计算供试液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%。 可接受标准：

所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。

系统精密度：标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

方法精密度：供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%不得过15.0%。 8.3. 中间精密度：

方法学：以不同的检验员、不同检测日期重复方法精密度测试步骤。分别制备6个依非韦伦供试液，每个供试液均加入25%的标准溶液，分别以顶空法进样1次，另取未加标依非韦伦供试液进样，计算供试液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%。求得每个溶剂6次测试方法精密度和中间精密度的累积RSD%。 可接受标准：

加样标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。

依非韦伦供试品6次测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次中间精密度）测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

8.4. 检测限和定量限

方法学：通过连续3次注射不同浓度的标准溶液（如实际检测浓度的10%、5%、2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%）分别测定甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰的检测限和定量限。计算不同浓度所有溶剂峰峰面积的RSD%，计算3次进样的标准偏差，平均标准偏差和斜率。按下式计算LOD 和LOQ ： 关于LOD ：DL=3×σ/S 关于LOQ ：QL=10×σ/S 式中σ为标准偏差；

S 为斜率； DL 为检测限； QL 为定量限。

按上述公式以实际检测浓度的150%～LOQ 级浓度计算线性度，通过连续进样6次LOQ 级溶液（气相顶空法）计算LOQ 级精密度，建立LOQ 级预测曲线。 可接受标准：

标准溶液连续进样6次的各溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 LOQ 级精密度不得过15.0%。 8.5. 线性和范围 方法学：

完成甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的线性研究。制备7种不同浓度的标准溶液（从LOQ 级浓度～实际检测浓度的150%），分别进样2次（气相顶空法），取2次峰面积的平均值，以溶剂浓度VS 平均峰面积作图，求得相关系数。 以Y=截距+斜率×X 做回归方程 可接受标准：

标准溶液连续进样6次的各溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 相关系数不得小于0.995。 8.6. 准确度 方法学：

以回收率完成准确度研究。

制备3×3个加标依非韦伦供试液（加入标准溶液浓度分别为实际检测浓度的50%、100%、150%），共计9个供试液，分别进样（气相顶空法），分别计算甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯回收率百分比（%）。 可接受标准：

标准溶液连续进样6次的各溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 回收率百分比应为90.0%～110.0%。 8.7. 耐用性 方法学：

通过任意改变如下分析方法（如改变载气流速、进样器温度、检测器温度、进样管温度、样品保温室温度），重复方法精密度研究，计算6次测得的依非韦伦供试品中甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯含量的RSD%。求得6次测得的每个溶剂含量方法精密度和6次耐用性研究的累积RSD%。 耐用性研究方法1#和方法2#： 改变载气流速为3.0±0.2ml/分钟。

耐用性研究方法3#和方法4#：

改变进样器温度为140±2℃，检测器温度为260±2℃。 耐用性研究方法5#和方法6#： 改变进样管温度为105±2℃。 耐用性研究方法7#和方法8#： 改变样品保温室温度为95±2℃。 可接受标准：

标准溶液连续进样6次的各溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。

依非韦伦供试品6次测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次耐用性）测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

9. 研究可接受标准：

如依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法分析方法验证的所有验证参数在测试可接受标准范围内，可认为研究设定参数值已经过验证，准予采用。

依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法分析方法验证报告

方案编号：AMV/F1010/RS-GC/00 报告编号：RAMV/F1010/RS-GC/01

批准

1.0 目的

汇总依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法分析方法验证结果，保证分析方法与设定指标相适应。 2.0 范围

此报告适用于×××公司QC 实验室依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法的验证。 3.0 责任

按下述完成此项验证的责任： 3.1.QC ：执行验证。

3.2.QC ：验证数据汇总、出具验证报告书并复核。 3.3.QA ：验证数据的检查、验证报告的批准。 4.0 依据：ICH 指南Q2（R1）。

5.0 验证过程中所使用的仪器、编号（批号）、溶剂标准、稀释剂列表。

5.5 测试步骤 5.5.1 色谱条件：

色谱柱：DB-624，30m ×0.53mm （内径），3μ毛细管色谱柱。 载气（氮气）流速：3.0ml/min。

程序升温：先于40℃维持2分钟，再以10℃/分钟升至108℃，维持8分钟，再以10℃/分钟升至220℃，维持2分钟。 进样室温度：140℃。 检测器温度：260℃。 分流比：1：5。

运行时间：30分钟。 顶空条件：

样品保温室温度：95℃。 样品平衡时间：40分钟。 进样管温度：105℃。 进样体积：1ml （气态）。 5.5.2 空白溶液的制备：

精密吸取二甲亚砜5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。 5.5.3 标准储备溶液的制备：

取50ml 二甲亚砜，置于100ml 量瓶中，分别精密加入0.30g 甲醇，0.50g 异丙醇，0.50g 甲基叔丁基醚（MTBE ），0.50g 正庚烷，0.089g 甲苯，以二甲亚砜溶解并稀释至刻度。 5.5.4 标准溶液的制备：

精密吸取10ml 标准储备液，置于100ml 量瓶中，以二甲亚砜稀释至刻度。精密吸取此溶液5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。 5.5.5 供试品溶液的制备：

精密称取依非韦伦供试品0.50g ，置于顶空瓶中，加5ml 二甲亚砜，以丁基橡胶塞铝盖密封。 5.5.6 测试步骤：

先注入空白溶液一针，再注入标准溶液6针，按下述检查系统适用性：

1. 标准溶液6次进样甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的峰面积RSD%不得过15.0%。

2. 上述各溶剂峰的分离度不得低于3.0。

如通过系统适用性检测，再进供试品溶液一次，按下式计算残留溶剂含量（ppm ）： 公式：

AT WS 10 5

残留溶剂%=———×——×——×——×106 AS 100 100 WT 式中：

AT —供试品溶液溶剂峰峰面积； AS —标准溶液溶剂峰峰面积；

WS —用于标准品的溶剂加入量，g ； WT —供试品称样量，g 。 6.0分析方法验证参数

依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法分析方法应验证下列参数： 6.1. 专属性

6.2. 系统精密度和方法精密度 6.3. 中间精密度 6.4. 检测限和定量限 6.5. 线性和范围 6.6. 准确度 6.7. 耐用性

6.1 专属性 6.1.1 方法学 6.1.2 可接受标准

6.1.3 标准品储备液的制备（5个溶剂实际对照品称样量） 6.1.4. 标准溶液的制备

6.1.5. 用于供试品加标的标准溶液（25%实际检测浓度）

取25ml 标准溶液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.1.6 供试品溶液的制备（未加25%标准溶液） 6.1.7. 加标供试品溶液的制备

精密称取依非韦伦供试品0.5002g ，置于顶空瓶中，加25%标准溶液5ml ，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.1.8 甲醇溶液的制备（同6.1.3，6.1.4） 6.1.9 异丙醇溶液的制备

6.1.10 甲基叔丁基醚溶液的制备 6.1.11正庚烷溶液的制备 6.1.12 甲苯溶液的制备

6.1.16 检验结论

6.1.16.1. 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为3.7%、4.0%、1.5%、1.4%、1.8%。

6.1.16.2 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰容量因子分别为2.1、3.6、4.3、6.7、9.2。

6.1.16.3 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.1.16.4 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为45596、41443、32737、88279、102084。 上述系统适用性指标均在规定范围内。

6.1.16.5. 依非韦伦加标供试品测得的所有溶剂峰均分离良好，甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的保留时间分别为3.5、5.2、5.9、8.7、11.5分钟，甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.3、6.7、22.5、21.5。 6.1.16.6 稀释剂对溶剂峰保留时间的影响均为0，因此专属性符合规定。 6.2 系统和方法精密度 6.2.1 方法学

6.2.1.1 系统精密度：

按上述测试步骤制备标准溶液，以气相顶空法连续进样6次，计算标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%。 6.2.1.2 方法精密度：

分别制备6个依非韦伦供试液，每个供试液均加入25%的标准溶液，分别以顶空法进样1次，另取未加标依非韦伦供试液进样，计算供试液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%。 6.2.2 可接受标准：

6.2.2.1 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.2.2.2 容量因子不得小于1.0。 6.2.2.3 拖尾因子不得过1.5。 6.2.2.4 理论板数不得少于5000。

6.2.2.5 系统精密度：标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.2.2.6 方法精密度：依非韦伦供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

6.2.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.2.4 标准溶液的制备：见验证方案。

6.2.5. 用于供试品加标的标准溶液（25%实际检测浓度）

取25ml 标准溶液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。

6.2.6 供试品溶液的制备（未加25%标准溶液） 6.2.7. 加标供试品溶液的制备

按下表精密称取依非韦伦供试品，置于顶空瓶中，加25%标准溶液5ml ，以丁基橡胶塞铝盖密封。

样品1：

22377×0.3022×10×5×106

甲醇=——————————————=873ppm 77379×100×100×0.5003 6.2.13 结论 6.2.13.1甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.9、6.8、22.5、21.4。

6.2.13.2标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.6、4.3、6.7、9.2。

6.2.13.3标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.2.13.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为45519、40253、32494、87452、101815。 6.2.13.5 系统精密度：

标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为2.0%、1.5%、0.8%、1.4%、1.3%。

均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。 6.2.13.6 方法精密度：

依非韦伦供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%分别为0.9、2.7、2.4、2.8、2.4。

均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。 6.3 中间精密度 6.3.1 方法学

以不同检验员、不同检测时间对同批样品（已用于方法精密度研究）进样，重复方法精密度研究，制备6个不同的依非韦伦供试品，每个供试液均加入25%的标准溶液，分别以顶空法进样1次，另取未加标依非韦伦供试液进样，计算供试液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%。求得每个溶剂6次测试方法精密度和中间精密度的累积RSD%。

6.3.2 可接受标准：

6.3.2.1 加样标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.3.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.3.2.3容量因子不得小于1.0。 6.3.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.3.2.5 理论板数不得少于5000。

6.3.2.6 依非韦伦供试品6次测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。 6.3.2.7 依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次中间精密度）测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

6.3.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.3.4 标准溶液的制备：见验证方案。

6.3.5. 用于供试品加标的标准溶液（25%实际检测浓度）

取25ml 标准溶液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.3.6 供试品溶液的制备（未加25%标准溶液）（见验证方案） 6.3.7. 加标供试品溶液的制备

按下表精密称取依非韦伦供试品，置于顶空瓶中，加25%标准溶液5ml ，以丁基橡胶塞铝盖密封。

样品1：

23547×0.3022×10×5×106

甲醇=——————————————=835ppm 85212×100×100×0.5002 6.3.14 结论

6.3.14.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为0.8%、1.1%、1.3%、1.6%、1.0%。

6.3.14.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.7、6.7、22.3、21.4。

6.3.14.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.5、4.2、6.7、9.2。

6.3.14.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.3.14.5标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为45068、40323、32116、87354、102195。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.3.14.6依非韦伦供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%分别为2.4、1.8、0.8、0.8、1.7。

6.3.14.7依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次中间精密度）测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯含量的累积RSD%分别为2.5、3.0、2.0、4.2、3.4，均在规定的限度范围内。

6.4 检测限（LOD ）和定量限（LOQ ） 6.4.1方法学

通过连续3次注射不同浓度的标准溶液（为实际检测浓度的10%、5%、2.5%、1.25%、0.63%、0.32%、0.16%、0.08%）分别测定甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰的检测限和定量限。采用气相顶空法，分别计算不同浓度各溶剂峰峰面积的RSD%，计算3次进样的标准偏差，平均标准偏差和斜率。 6.4.2 可接受标准：

6.4.2.1 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.4.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.4.2.3容量因子不得小于1.0。 6.4.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.4.2.5 理论板数不得少于5000。 6.4.2.6 LOQ级精密度不得过15.0%。

6.4.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.4.4 标准溶液的制备：见验证方案。 6.4.5 LOD/LOQ溶液的制备

按下表规定取一定量标准溶液，置于50ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度，分别精密吸取各

6.4.8 1级标准溶液进样结果汇总表

6.4.10 3级标准溶液进样结果汇总表 6.4.11 4级标准溶液进样结果汇总表 6.4.12 5级标准溶液进样结果汇总表 6.4.13 6级标准溶液进样结果汇总表 6.4.14 7级标准溶液进样结果汇总表

6.4.19 结论

6.4.19.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为4.2%、6.9%、3.2%、3.0%、4.4%。

6.4.19.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为20.0、6.7、22.1、21.4。

6.4.19.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.6、4.3、6.7、9.2。

6.4.19.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.1、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.4.19.5标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为46105、40839、31844、88029、102424。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.4.19.6甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的检测限分别为4、5、2、2、1ppm 。 6.4.19.7甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的定量限分别为14、18、6、8、4ppm 。 ，均在规定的限度范围内。 6.4. 01 定量限精密度 6.4.01.1方法学

制备实际检测浓度的LOQ 级标准溶液，注入气相顶空系统，连续进样6次，计算标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%。 6.4.01.2 可接受标准

6.4.01.2.1 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.4.01.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.4.01.2.3容量因子不得小于1.0。 6.4.01.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.4.01.2.5 理论板数不得少于5000。

6.4.01.2.6 LOQ级标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.4.01.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.4.01.4 标准溶液的制备：见验证方案。 6.4.01.5 LOQ级标准溶液的制备 取50ml 二甲亚砜，置于100ml 量瓶中，分别精密加入0.0297g 甲醇，0.0450g 异丙醇，0.0141g 甲基叔丁基醚（MTBE ），0.0210g 正庚烷，0.0092g 甲苯，以二甲亚砜溶解并稀释至刻度。 精密吸取1ml 上述标准溶液，置于100ml 量瓶中，以二甲亚砜稀释至刻度。精密吸取此溶液5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.4.01.9 结论

6.4.01.9.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为2.6%、2.8%、1.7%、1.7%、1.9%。

6.4.01.9.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.9、6.9、22.3、21.5。

6.4.01.9.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.2、3.8、4.5、7.0、9.6。

6.4.01.9.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.1、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.4.01.9.5标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为44904、42455、33680、86477、104435。

系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.4.01.9.6 LOQ级标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为6.6%、7.0%、5.8%、6.0%、9.2%。 均在规定的限度范围内。 6.5 线性和范围 6.5.1方法学：

完成甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的线性研究。制备7种不同浓度的标准溶液（从LOQ 级浓度～实际检测浓度的150%），分别进样2次（气相顶空法），取2次峰面积的平均值，以溶剂浓度VS 平均峰面积作图，求得相关系数。 以Y=截距+斜率×X 做回归方程 6.5.2 可接受标准：

6.5.2.1 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.5.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.5.2.3 容量因子不得小于1.0。 6.5.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.5.2.5 理论板数不得少于5000。

6.5.2.6 标准浓度序列溶液的Y 截距不得过峰面积的10%。 6.5.2.7 相关系数不得小于0.995。

6.5.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.5.4 标准溶液的制备：见验证方案。 6.5.5 线性溶液的制备

按下表规定取一定量标准溶液，置于50ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度，分别精密吸取各溶液5.0ml ，置于各顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.5.5.1 LOQ级标准溶液的制备 取50ml 二甲亚砜，置于100ml 量瓶中，分别精密加入0.0140g 甲醇，0.0120g 异丙醇，0.0340g 甲基叔丁基醚（MTBE ），0.0240g 正庚烷，0.0540g 甲苯，以二甲亚砜溶解并稀释至刻度。 精密吸取1ml 上述标准溶液，置于100ml 量瓶中，以二甲亚砜稀释至刻度。精密吸取此溶液5.0ml ，置于顶空瓶中，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.5.9 作图

甲醇线性图（X 轴浓度，ppm ；Y 轴峰面积） 异丙醇线性图（X 轴浓度，ppm ；Y 轴峰面积）

甲基叔丁基醚线性图（X 轴浓度，ppm ；Y 轴峰面积） 正庚烷线性图（X 轴浓度，ppm ；Y 轴峰面积） 甲苯线性图（X 轴浓度，ppm ；Y 轴峰面积） 6.5.10 结论

6.5.10.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为2.4%、2.6%、1.1%、1.1%、1.8%。

6.5.10.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为20.0、6.8、22.4、21.4。

6.5.10.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.3、3.9、4.7、7.4、10.0。

6.5.10.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.5.10.5标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为45330、41256、32572、87676、100799。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.5.10.6 甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯Y 轴截距分别为2.2%、0.8%、1.3%、1.7%、1.6%。

6.5.10.7 甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的相关系数分别为0.9992、0.9988、0.9981、0.9982、0.9986，均在规定的限度范围内。因此在LOQ 浓度～实际检测浓度的150%范围内呈线性关系。 6.6 准确度 6.6.1 方法学：

以回收率完成准确度研究。

制备3×3个加标依非韦伦供试液（加入标准溶液浓度分别为实际检测浓度的50%、100%、150%），共计9个供试液，分别进样（气相顶空法），分别计算甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯回收率百分比（%）。 6.6.2 可接受标准：

6.6.2.1 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面

积的RSD%不得过15.0%。

6.6.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.6.2.3 容量因子不得小于1.0。 6.6.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.6.2.5 理论板数不得少于5000。

6.6.2.6回收率百分比应为90.0%～110.0%。

6.6.3 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.6.4 标准溶液的制备：见验证方案。

6.6.5 加标标准溶液（实际浓度的150%）的制备

精密吸取15ml 标准储备液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.6.6 加标标准溶液（实际浓度的100%）的制备

精密吸取10ml 标准储备液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.6.7 加标标准溶液（实际浓度的50%）的制备

精密吸取5ml 标准储备液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.6.8 未加标供试品溶液的制备

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0mlDMSO ，以丁基橡胶塞铝盖

6.6.9加50%标准溶液的供试液制备

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0ml50%加标标准溶液，以丁基橡胶塞铝盖密封。

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0ml 100%加标标准溶液，以丁

6.6.11加150%标准溶液的供试液制备

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0ml 150%加标标准溶液，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.6.19 100%供试液2残留溶剂百分回收率汇总表 6.6.20 100%供试液3残留溶剂百分回收率汇总表 6.6.21 50%供试液1残留溶剂百分回收率汇总表 6.6.22 50%供试液2残留溶剂百分回收率汇总表 6.6.23 50%供试液3残留溶剂百分回收率汇总表

6.6.25 回收率计算举例

150%供试液1残留溶剂百分回收率

甲醇加入量=0.3022×15×5×106/（100×100）=2267PPM

甲醇回收量=116952×0.3022×10×5×106/（75311×100×100）=2346PPM 甲醇回收率%=2346×100/2267=103% 6.6.26 结论

6.6.26.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为4.1%、4.1%、2.1%、2.0%、2.7%。

6.6.26.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.9、6.7、22.2、21.3。

6.6.26.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.5、4.2、6.7、9.2。

6.6.26.4标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.6.26.5标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为45301、41104、33209、87059、101708。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.6.26.6 甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯的百分回收率分别为105%、105%、99%、100%、101%。 6.7 耐用性 6.7.1 方法学：

通过任意改变如下分析方法（如改变载气流速、进样器温度、检测器温度、进样管温度、样品保温室温度），重复方法精密度研究，计算6次测得的依非韦伦供试品中甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯含量的RSD%。求得6次测得的每个溶剂含量方法精密度和6次耐用性研究的累积RSD%。

6.7.1.1 耐用性研究方法1#和方法2#：改变载气流速±0.2ml/分钟。 6.7.1.2 耐用性研究方法3#和方法4#：改变进样器和检测器温度±2℃。 6.7.1.3 耐用性研究方法5#和方法6#：改变进样管温度±2℃。 6.7.1.4 耐用性研究方法7#和方法8#：改变样品保温室温度±2℃。 6.7.2 可接受标准：

6.7.2.1 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂峰峰面积的RSD%不得过15.0%。

6.7.2.2 所有溶剂峰间的分离度均不得小于3.0。 6.7.2.3 容量因子不得小于1.0。 6.7.2.4 拖尾因子不得过1.5。 6.7.2.5 理论板数不得少于5000。

6.7.2.6 依非韦伦供试品6次测得的各溶剂含量的RSD%不得过15.0%。

6.7.2.7 依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次耐用性）测得的各溶剂含量的RSD%不

得过15.0%。

6.7.3 耐用性研究01（载气流速改为2.8ml/分钟）

6.7.3.1 标准储备溶液的制备（5个溶剂实际对照品称样量）：见验证方案。 6.7.3.2 标准溶液的制备：见验证方案。

6.7.3.3 加标标准溶液（实际浓度的25%）的制备

精密吸取25ml 标准溶液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.7.3.4 未加标供试品溶液的制备

精密称取依非韦伦供试品0.5002g ，置于顶空瓶中，精密加入5.0mlDMSO ，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.7.3.5 供试品加标溶液（实际浓度的25%）的制备

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0ml25%加标标准溶液，以丁基

6.7.3.11 残留溶剂计算举例 供试液1：

甲醇=21838×0.3013×10×5×106/（81674×100×100×0.5002）=805PPM 6.7.3.12 结论

6.7.3.12.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为1.2%、1.1%、1.6%、2.1%、1.3%。 6.7.3.12.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为20.2、6.9、22.1、21.3。

6.7.3.12.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.6、4.3、6.7、9.1。

6.7.3.12.4 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.1、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.7.3.12.5 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为47619、43877、34769、84115、103020。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.7.3.12.6依非韦伦供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%分别为5.1、4.7、0.7、1.0、3.3。

6.7.3.12.7依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次耐用性研究1）测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯含量的累积RSD%分别为3.8、3.6、5.6、5.7、2.8，均在规定的限度范围内。耐用性研究1符合规定。

6.7.4 耐用性研究02（载气流速改为3.2ml/分钟）

6.7.4.1 标准储备溶液的制备（5个溶剂对照品实际称样量0.3013，0.5008、0.5012、0.5006、0.0897）：同6.7.3.1 见验证方案。

6.7.4.2 标准溶液的制备：见验证方案。

6.7.4.3 加标标准溶液（实际浓度的25%）的制备

精密吸取25ml 标准溶液，置于100ml 量瓶中，加DMSO 稀释至刻度。 6.7.4.4 未加标供试品溶液的制备

精密称取依非韦伦供试品0.5002g ，置于顶空瓶中，精密加入5.0mlDMSO ，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.7.4.5 供试品加标溶液（实际浓度的25%）的制备

取依非韦伦供试品按下表称量，置于顶空瓶中，精密加入5.0ml25%加标标准溶液，以丁基橡胶塞铝盖密封。

6.7.4.11 残留溶剂计算举例 供试液1：

甲醇=22316×0.3013×10×5×106/（80421×100×100×0.5001）=836PPM 6.7.4.12 结论

6.7.4.12.1 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰峰面积的RSD%分别为1.6%、1.3%、0.8%、0.8%、1.8%。 6.7.4.12.2 标准溶液甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的分离度分别为19.5、6.7、22.3、20.8。

6.7.4.12.3 标准溶液连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰的容量因子分别为2.1、3.7、4.4、7.1、9.6。

6.7.4.12.4 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰拖尾因子分别为1.2、1.0、1.0、1.0、1.0。

6.7.4.12.5 标准溶液6针进样测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯色谱峰理论板数分别为42605、37897、29808、81153、100105。 系统适用性指标如RSD%、分离度、容量因子、拖尾因子、理论板数均在规定的限度范围内，系统适用性符合规定。

6.7.4.12.6依非韦伦供试品连续进样6次的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯溶剂含量的RSD%分别为4.5、6.7、0.6、0.3、6.6。

6.7.4.12.7依非韦伦供试品12次（6次方法精密度+6次耐用性研究2）测得的甲醇、异丙醇、甲基叔丁基醚、正庚烷、甲苯含量的累积RSD%分别为3.9、5.3、4.3、6.7、7.3，均在规定的限度范围内。耐用性研究2符合规定。

6.7.5 耐用性研究03（进样室温度改为138℃、检测器温度改为258℃）过程同上 6.7.6 耐用性研究04（进样室温度改为142℃、检测器温度改为262℃）过程同上 6.7.7 耐用性研究05（进样管温度改为103℃）过程同上 6.7.8 耐用性研究06（进样管温度改为107℃）过程同上 6.7.9 耐用性研究07（样品保温室温度改为93℃）过程同上 6.7.10 耐用性研究08（样品保温室温度改为97℃）过程同上 7.0 验证指标结果汇总表

8.0 验证结论

依非韦伦有机残留溶剂气相色谱顶空法验证数据汇总表表明：所有验证项目均在规定限度范围内，因此该验证涉及的检验方法符合要求，准予采用。