e7微生物在全自动血培养仪中的生长曲线及其意义

・论著・

不同种类微生物在全自动血培养仪中的生长曲线及其意义

陈日荣，李惠冰，周美容

（江门市五邑中医院，广东江门５２９０３１）

【摘要】目的探讨不同种类微生物在全自动血培养仪中的生长曲线、阳性报警时间及其意义。方法无菌采

肠杆菌

集血液或体液５ｒｎＬ，注入相应培养瓶，经仪器扫描识别后，直接放进培养仪，培养仪自动进行检测。结果

科、葡萄球菌属、非发酵菌、链球菌属、肠球菌属和酵母样真菌各有不同生长曲线线型，以肠杆菌科生长曲线线型最特别（角度大，阳性报警时看不到稳定期曲线）。肠杆菌科的阳性报警时间出现最早，与其他类型微生物差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论通过仪器对微生物生长曲线表达的线型、阳性报警时间。结合微生物生长生化特点，可初步判断微生物的生长和类型。

［关键词】全自动血培养仪；微生物；生长曲线【中图分类号］Ｒ４４６

［文献标识码】Ａ

［文章编号】１６７１—９６３８（２００６）０３—０２０６—０４

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［Ｃ轴ｎＪｃｏｎｔｍｌ，２００６，５（３）：２０６—２０８，２１３］

不同类型微生物有其不同生长代谢方式，微生物在新陈代谢过程或分解糖类时产生二氧化碳（ＣＱ）。产生的ＣＱ越多，反射光越强，计算机接受此信息后，以加速度、起始值和速率３种方式判断是否为阳性，及时发出阳性警报，并显示当时生长曲线线型。根据这些原理，结合微生物相对特有的生长特点，以碳水化合物的分解能力，可初步推断微生物

的生长和类型…。

１对象与方法

１．１标本来源本院２００３年３月一２００４年１２月间门诊或住院患者的血液、体液在全自动血培养仪出现阳性警报的１２８份标本及无阳性警报的７９９份标本。

１．２仪器与试剂Ｂａｃｔ／Ａ１ｅｒｔ３Ｄ全自动血液培养仪及配套的培养瓶，包括成人需氧瓶、厌氧瓶、中和抗生素需氧瓶、中和抗生素厌氧瓶、儿童专用瓶；阁喝半自动微生物鉴定系统及各种配套鉴定试条；ＡＰＩ鉴定系

［收稿日期］２００６一０１—２０

［作者简介］陈日荣（１９４７一），男（汉族），广东省开平县人，副

主任检验师，主要从事临床微生物检验研究。

统及试条，均为法国生物梅里埃公司产品。

１．３实验方法无菌采集血液或体液５ｍＬ，注入

相应培养瓶，经仪器扫描识别后，直接放进培养仪，培养仪自动进行检测。随时观察生长曲线并记录阳性报警时间。培养仪培养４ｄ后仍为阴性时，取瓶进行盲目转种，需氧瓶转种培养２４ｈ，厌氧瓶转种培

养４８ｈ后，仍未见细菌（包括真菌，下同）生长，第５

性警报，但涂片和盲目转种有细菌生长为假阴性。

１．５统计方法将葡萄球菌属、非发酵菌、链球菌

属、肠球菌属、酵母样真菌分别与肠杆菌科细菌的显示阳性时间进行￡检验，经方差分析，肠杆菌与各菌的方差不等，选￡７检验。

２结果

ｄ（厌氧瓶转种培养第６ｄ）发出未见细菌生长报告。培养瓶继续保留在培养仪中，直至第７ｄ再观察生长曲线，并取培养瓶肉眼观察，如培养液未见混浊，瓶底无黄色显示，无细菌生长怀疑后弃瓶。

１．４假阳性、假阴性判断仪器显示阳性警报，而涂片未见细菌，转种平板无菌生长为假阳性。仪器无阳

表１

报警时间（ｈ）

肠杆菌科

（ｔｚ＝３９）

拇他

１０●

２．１

１２８份标本细菌分布与报警时间见表１。肠

杆菌科细菌阳性报警所需培养时间较其他种类微生

物短。’

１２８份标本细菌分布与报警时间（株）

非发酵菌（佗＝２０）

４Ｕ１０ｌ２１

葡萄球菌属（’罩＝３７）

９

链球菌属（，ｚ＝１４）

３ｍ１ＯＯ０Ｏ

肠球菌属（ｎ＝６）

真菌（ｎ＝１２）

＂

９２ＯＯ０

‘√ｒ／／／么心Ｍ够记％均

＞１２０

ＯＯ

Ｏ０

非发酵菌以铜绿假单胞菌为主，占非发酵菌的８０％（１６／２０），都在４８ｈ内出现阳性报警，表中非发酵菌只以铜绿假单胞菌出现阳性时间作统计；另外检出嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、鲍曼不动杆菌和少动氨醇单胞菌各１株，阳性报警所需培养时间分别为８２．８。１１５，１１７和

１３７．６２ｈ

２．２各种微生物在培养仪生长曲线线型生长曲线线型大致走势，详见图１。

根据各警时尚看不到稳定期曲线。反光参数单位大多在

４

种细菌在阳性报警时表现的形态，归纳描绘，可见其０００以上出现阳性报警。

２．２．２葡萄球菌属生长曲线可见迟缓期、对数生长期及稳定期３个阶段，生长期曲线角度较大。２．２．３非发酵菌迟缓期曲线较平坦，生长期曲线短，角度小，稳定期曲线平坦。

２．２．４链球菌属迟缓期生长曲线较平坦，生长期角度小，稳定期曲线比较平直。２．２．５肠球菌属

生长曲线与链球菌属相似。

２．２．６酵母样真菌整条生长曲线较为圆滑，生长期曲线呈一定斜度缓和向上。

Ａ肠杆菌科Ｂ葡萄球菌属Ｃ非发酵菌

Ｄ链球菌属、肠球菌属Ｅ酵母样真菌

图１微生物在培养仪上生长曲线线型示意图

３讨论

２．２．１肠杆菌科生长曲线迟缓期很短，生长期曲

・２０８・

主垦蹙鎏整剑盘查２ＱＱ§生２旦筮§鲞筮≥塑垦生ｉ望』！旦￡鲤鱼堕翌！№！§垒垫３』！１２ＱＱ§

季节。室温过高（＞３５℃）仪器常会发出（假）阳性警报，与室温不稳定有关【２０；也有报道，血液病患者血培养假阳性率也较高∞Ｊ。假阴性１例，引起假阴性可有多种因素：培养前使用抗菌药物影响最大；取材后培养瓶未及时放进培养仪，而放置室温时间过长；抽血量与培养基比例也会影响阳性率，血标本与培养液在１：１０的比例时，则抗菌药物对细菌生长无

明显影响【４，５｜。有报道，阴性报告时间可由原来传

统方法的７ｄ缩短至全自动血培养仪方法的５

ｄ１６・７｜。在１２８份培养阳性的标本中，有１份最长为

１３７

ｈ（５．７ｄ）才显示阳性警报，所以不宜过早弃瓶，

培养瓶仍须继续保留在培养仪中，直至第７ｄ再观察生长曲线、培养瓶，确认没有细菌生长怀疑才可

弃瓶。

各种类型微生物生长曲线线型及阳性报警所需培养时间，主要取决于细菌代谢中产生Ｃ０２量以及增加的变化速度。细菌在新陈代谢过程或分解糖类时有Ｃ０２产生，尤其对葡萄糖的分解产酸产气（Ｃ０２）者，其生长曲线线型的变化快而明显，阳性报警所需培养时间短。而产碱型细菌不分解葡萄

糖引，故所需培养时间较长。

肠杆菌科细菌一般为兼性厌氧，在普通培养基上生长良好，对培养的条件要求不高，发酵葡萄糖产酸产气，生长期明显迅速，细菌增殖快，数量多，ＣＱ的产生快且量多，所以在培养仪显示生长曲线延缓期短，线型短，角度大，阳性报警时尚看不到稳定期曲线，是最特别的一条曲线，与其他种类微生物的生长期曲线线型有明显的区别。其阳性报警所需培养时间比其他菌属快，最早出现阳性报警的是大肠埃希菌，其中１株培养时间仅为１．９２ｈ，与国内报道［９］接近。３９株肠杆菌科细菌，１２ｈ内出现阳性报警１９株，占肠杆菌科阳性的４８．７２％；２４ｈ内出现阳性报警３７株，占肠杆菌科阳性的９４．８７％，比国内报道的阳性率高【７ｏ；培养时间最长的是１株副伤寒甲沙门

菌，３９ｈ才显示出阳性警报。

葡萄球菌属为需氧或兼性厌氧菌，虽然葡萄球

菌对营养要求不高，在肉汤中生长迅速，但对碳水化合物的发酵反应不规则，分解葡萄糖后产酸［１０］，所以ＣＱ的产生量和增加速度都不如肠杆菌科细菌。其生长曲线可见迟缓期、对数生长期及稳定期３个阶段；平均显示出阳性报警时间需要２０ｈ，明显比肠杆菌科细菌长（Ｐ＜０．０１）。

非发酵菌一般为专性需氧菌，培养瓶由于加入

了血液等耗氧物质，影响了非发酵菌的生长环境，导较短，较快转入稳定期。非发酵菌不发酵糖类，虽能

氧化分解葡萄糖，但产酸不产气，所以∞２的产生

量和增加的速度不会有明显变化，迟缓期和稳定期曲线因此较平坦。其培养需要时间较长，平均

２３．５ｈ培养仪才显示出阳性。

链球菌属细菌为需氧或微需氧和厌氧菌，对营养的要求高，大多数菌株还需要多种生长因子；在普

通培养基不易生长，对糖的分解能力因菌株而异，对

葡萄糖分解后产酸不产气。这些因素都使链球菌属

细菌在培养过程中生长缓慢，ＣＯ：产生量少，所以培养仪显示生长曲线迟缓期较平坦，生长期曲线角度小，稳定期曲线比较平直。链球菌属细菌出现阳性

报警所需时间最长，平均为２４．４ｈ。肠球菌属与链球菌属生长曲线基本相同，出现阳性报警所需时间

平均为２４．２ｈ。

酵母样真菌（以白假丝酵母菌为主）整条生长曲线较为圆滑，生长期曲线呈一定角度缓和向上。培

养仪出现阳性报警时间比肠杆菌科、葡萄球菌属迟，但比非发酵菌、链球菌属和肠球菌属早。这与其繁

殖方式或与部分酵母样真菌在酵解糖类时能产生

Ｃ０２有一定关系。但毕竟酵母样真菌对营养条件也有其特殊要求，所以其生长还不如肠杆菌科那样，普

通细菌培养基（液）就能适应。

全自动血培养仪自动化程度高，对不同种类的

微生物有不同的生长曲线、阳性报警时间，结合微生物相对特有的生长特点，对碳水化合物的分解能力进行分析，可初步推断微生物的生长种类。但微生

物在培养过程中生长曲线线型受许多因素影响，如抗菌药物的使用、标本含菌量、取材时间、取材量等，

阳性报警时间的早晚同样受上述因素影响，因此，仍有待不断探讨研究。

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１１９—１２０．

主垦壁鎏墼趔盘查２塑§生２旦筮５鲞筮２翅鱼也Ｉ坠地壁坚望世３型』垒ｂ≥』堂２ＱＱ§

药物及有机磷农药中毒患者。根据出院时预后及转归情况分组，出院时自觉症状明显改善、肝功能明显好转或基本恢复正常的病例为预后好组，共１０５例；因病情加重自动出院或病死者为预后差组，共

２７例。

１．２

・２１３・

３讨论

有学者［２］称Ｃ皿为假胆碱酯酶，它是由肝细胞

及其腺体生成的水解酶，存在于血清或血浆中，在肝功能受损严重时其活性降低。本资料１３２例慢性重

方法

采用酶速率法，以美国贝克曼库尔特

（ＢＥＣ、ＫＭＡＮ

００ＵＬ，陋Ｒ）Ｃ》【４

ＰＲ０型全自动生化

型肝炎患者血清ＣＩ也活性呈不同程度降低。文

分析仪及配套试剂盒测定１３２例慢性重型肝炎患者

献［３］报道，各型肝病患者血清Ｃ皿活性有不同程度

降低，以肝硬化、重型肝炎降低尤为显著，本文结果

与之一致。

血清Ｃ皿活性。以患者人院时第１次肝功能Ｃ般

作为治疗前的观察值，１月后复查值作为治疗后的观察值，因自动出院、病死而住院时间短者以住院期间最后一次肝功能为治疗后的观察值。分析血清

测定血清Ｃ胍活性可了解肝脏的合成和储备

功能，对估计和判断预后具有临床价值。本资料显

Ｃ皿活性与病情变化的关系。

１．３统计学处理全部实验数据均采用均数±标准差（互±ｓ）表示，并采用￡检验。

２结果

示，慢性重型肝炎患者预后较好者血清Ｃ皿活性比预后差者高（Ｐ＜Ｏ．０１），且治疗后血清Ｃ既活性

明显增高（Ｐ＜０．０１），提示肝脏合成和储备功能较

好；而预后差者治疗前血清Ｃ脏相对较低，且治疗

后升高不明显或继续减低，提示肝细胞受损越来越严重，肝脏的合成和储备功能越来越差。故我们认

预后好组与预后差组慢性重型肝炎患者治疗前

血清Ｃ胍活性均低于正常值（根据我院仪器及试剂

经过标定界定正常值为４

５００～１５０００

Ｕ／Ｌ）。治疗

为：患者血清Ｃｍ活性高，提示肝脏合成和储备功能较好，预后较好；血清Ｃｍ活性明显降低，则提示肝功能受损加重，预后差。血清Ｃｍ活性是反映肝

细胞损害的敏感指标，对估计肝脏的合成和储备功

能，了解病情变化及预后判定具有较好的临床价

前，两组患者血清Ｃ皿活性比较，差异有显著性（￡

＝１２．１９，Ｐ＜Ｏ．０１）；治疗后，两组患者血清Ｑ也

活性比较，差异亦有显著性（≠＝４１．４２，Ｐ＜０．０１）。预后好组患者治疗后血清Ｃ｝也活性逐渐回升，治疗前后比较，差异有显著性（￡＝２１．７６，Ｐ

值［４，５Ｊ。

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２３３．

＜０．０１）；预后差组患者治疗过程中血清Ｃ№活性

继续降低，治疗前后比较，差异亦有显著性（ｚ＝

４．０１，Ｐ＜０．０１）。详见表１。

表１两组慢性重型肝炎患者治疗前后Ｃ｝皿值比较（Ｕ几）

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不同种类微生物在全自动血培养仪中的生长曲线及其意义

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

陈日荣， 李惠冰， 周美容， CHEN Ri-rong， LI Hui-bing， ZHOU Mei-rong江门市五邑中医院,广东,江门,529031中国感染控制杂志

CHINESE JOURNAL OF INFECTION CONTROL2006，5(3)0次

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目的:为提高血培养的检出率,快速、准确地作出病原学诊断.方法:用BacT/Alert 120全自动血培养仪对1399例血标本进行检测,选用成人标准需氧瓶和儿童专用培养瓶,分离后的菌种由Vitek-32全自动微生物分析仪鉴定.结果:1399例中共检出细菌46种,总阳性率为12.9%,假阳性率为1.7%,未发现假阴性.最早出现阳性时间为2 h,24 h内检出率为61.7%,48 h内检出率为82.8%,72 h内检出率为97.2%.结论:用BacT/Alert120全自动血培养仪检出菌种分布广泛,提高了血培养阳性率,结果快速、准确.

8.期刊论文 王雁勇.高保成.孙茜 BacT/ALERT 3D全自动血培养仪血培养756例分析 -河北医药2005,27(7)

菌血症是临床医学急症,在患者的血液中及时检出微生物,对感染性疾病的诊断、治疗和预后有重要的临床意义.全自动血培养系统的引进和临床应用,为败血症及严重感染的诊断和治疗提供了快速正确的报告.我室采用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪对756例临床血液标本进行分析,现报告如下.

9.期刊论文 乔宁.喻华.QiAO ning.YU Hua BacT/Alert240全自动血培养仪临床应用评价 -实用医院临床杂志2009,6(1)

目的 评价BacT/Alert 240全自动血培养仪的临床应用情况.方法 回顾性分析应用BacT/Alert 240全自动血培养仪检测的1898份血标本,对检出阳性的时间、细菌种类和阳性率进行了评估分析.结果 1898份血标本分离出255株病原微生物,阳性率为13.4%.最快阳性检出时间为2 h,24 h内检出的阳性数占722%,48 h检出的阳性数占92.6%.假阳性率为3.1%,假阴性率为0.3%.结论 应用BacT/Alert240全自动血培养仪提高了血培养的阳性率.缩短了阳性检出时间,检出细菌种类多,而且操作简便,结果 快速、准确.

10.期刊论文 陈潇.徐修礼.樊新.孙怡群.刘家云.CHEN Xiao.XU Xiu-li.FAN Xin.SUN Yi-qun.LIU Jia-yun 10941份血培养标本中病原菌群分布及耐药性分析 -中国感染控制杂志2010,09(4)

目的 动态监测和分析某院感染患者血培养标本中的病原菌分布及其耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供实验室依据.方法 采用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪对10941份血液标本进行检测,药敏试验按照美国临床实验室标准化研究所标准,采用K-B纸片法进行;应用WHONET5.4软件分析血培养标本中所分离病原菌的分布和药敏结果 .结果 10 941份血液标本中,培养阳性673份,阳性率6.15%;共检出病原菌688株,其中肠杆菌科细菌占37.94%(261/688),非发酵菌30.67%(211/688),葡萄球菌属10.17%(70/688),肠球菌属8.58%(59/688),真菌5.23%(36/688),污染菌6.54%(45/688),布氏杆菌0.87%(6/688).大肠埃希菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、头孢呋辛、头孢他啶及环丙沙星的耐药率分别为48.27%、55.17%、82.76%、53.10%、6 8.97%;鲍曼不动杆菌对阿米卡星、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星的耐药率分别为35.06%、38.96%、32.47%、64.94%;金黄色葡萄球菌对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐药率分别为80.77%、46.15%、75.00%;屎肠球菌对青霉素、红霉素、利福平、左氧氟沙星的耐药率分别为94.74%、97.37%、97.36%、89.47%.结论血流感染病原菌种类分布较广,耐药性较强.临床应严格执行血培养标本的采送规范,避免污染和提高送检质量.

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