实验10 DNA孚尔根染色
04-04
实验10孚尔根(Feulgen )反应
一、实验目的
掌握孚尔根(Feulgen )反应的原理和方法,观察了解DNA 在细胞内的分布。
二、实验用具
洋葱内表皮,显微镜、染色缸、剪刀、镊子、培养皿等; 1M HCl、希夫试剂、亚硫酸水溶液等。
三、原理
孚尔根反应是Feulgen 和Rosserbeck 于1924年发现的, 是鉴定细胞内DNA 特殊有效的方法。其原理一般认为:稀酸(1M HCl,60℃) 水解DNA ,打开DNA 分子上嘌呤碱和脱氧核糖连接的键,从而使脱氧核糖中的醛基释放出来,然后再与希夫试剂(Schiff 试剂,无色品红)反应,由于醛基的氧化作用,使之与无色品红结合成紫红色的化合物。细胞内凡有DNA 的地方都呈阳性反应。
四、操作过程
1、将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l的HCl 中,加热到60℃水解8-10分钟。
2、蒸馏水水洗3次。
3、入希夫试剂染色30分钟。
4、亚硫酸水溶液洗3次,每次1分钟。
5、水洗5分钟。
6、将鳞茎内表皮放在载玻片上,盖好盖玻片,用吸水纸吸去玻片上多余的溶液,置显微镜下检查,细胞内凡有DNA 的地方都呈阳性反应(玫瑰红色)。
五、实验结果
绘图示Feulgen 反应的结果即细胞内DNA 的分布。