紫叶酢浆草DNA的提取方法比较
():黑龙江农业科学2014718~20
HeilonianAriculturalSciences gjgg
紫叶酢浆草DNA的提取方法比较
汤浩茹2,张 勇2,陈 清2,吉 丽2侯艳霞1,
(山西林业职业技术学院园艺系,四川农业大学园艺学院,山西太原0四川雅安1.30009;2.
)250146
以紫叶酢浆草茎段及叶片为材料,为了提取高质量的紫叶酢浆草D比较了5种方法对其D摘要:NA,NA提取的影响。结果表明:用S改良CDS法、TAB法和核DNA法提取出的酢浆草DNA质量和得率都优于高盐低从酢浆草叶片中提取的D以紫TAB区室法,NA质量和得率优于从茎段中提取的。综合分析可知,H法和Cp
叶酢浆草叶片为材料,采用核DNA法提取效果最佳。关键词:酢浆草;DNA提取方法;NA质量检测D
()中图分类号:2000688.4 文献标识码:002767201470183SA 文章编号:1---
,又称红叶Otxalisrianularis) 紫叶酢浆草( g
1]
,为多年生宿根草本花酢浆草、三角紫叶酢浆草[
卉。由于其植株姿态俊美,叶形奇特,且叶色和花色的色彩对比感强,成为深受人们喜爱的室内盆养植物,也是城市园林应用中一种优异的彩叶绿化植物。此外,紫叶酢浆草中丰富的天然色素极
]32-
,因而目前人们具开发前景,而且全草可入药[对该植物的需求量日益增多,关于酢浆草的研究
也逐渐展开。
利用分子生物学方法开展紫叶酢浆草多样性研究,可为进一步选育优良种质资源提供依据。但基因组DNA的分离及其提取质量是进行基因组多样性分析的关键。由于紫叶酢浆草植物组织细胞内含有较多的多糖、色素、蛋白质及未知的次生代谢产物,而且这些物质在酢浆草不同部位的含量也有差异,以至于难以获得高质量的DNA。该研究采用5种方法提取了紫叶酢浆草叶片和茎
旨在寻找适合紫叶酢浆草基因组段中的DNA,为该植物DNA高质量高效率的提取方法,NAD
分子标记和遗传多样性研究奠定基础。
2 方法1.
)参考高盐低p2.1 DNA提取方法 (1H法:1.
4]
的方法,邵鹏柱[略有改进,将提取液中加入了VP和2%βDS法:2)S3%可溶性P-巯基乙醇。(
5]
的方法,参考董晓莉[略有改进,将提取液中
改良S1%Na%β3)0.-巯基乙醇代替。(22O5用2
6]
的方法,参考甘玲[略有改进,将βTAB法:C-巯
基乙醇浓度由1%提高到2%。(核DNA法:4)
7]
)的方法。(参考李丹[参考丁晓TAB区室法:5C8]
的方法,略有改进,将提取液中2%N丹[Sa22O5
用2%β可溶性PVP用量由10%-巯基乙醇代替,
减少到3%。
)紫外吸收检测D11.2.2 DNA质量检测 (NA的纯度。将D在核酸蛋白NA粗提液适当稀释,质分析仪上检测波长260和280nm处的吸收/,计算O值(得OD值)DDNA的浓度、O226080和D
琼脂糖凝胶检测率,判断DNA的纯度。(2)NA的完整性。采用1%的琼脂糖凝胶电泳,BDE
染色,在凝胶成像系统在100V电压下电泳1h,下拍照检测DNA的降解程度和RNA消化情
)况。(NA的PCR扩增检测。利用RAPD扩3D增反应引物G进行PGTGCCTAACC)CR扩6(
增,体系为20μL。其反应程序为:4℃预变性9in,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延5m
,,伸2m共4in0个循环,2℃后延伸10min4℃保7存。PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测。
1 材料与方法
1.1 材料
供试材料为盆栽紫叶酢浆草的茎段和叶片。
收稿日期:01439201--基金项目:山西省基础研究“青年科技研究基金”资助项
);山西林业职业技术学院院级科研教改资目(22013021026-)助项目(013142
,第一作者简介:女,山西省交城县人,博士,侯艳霞(9811-)
:讲师,从事园艺专业教学与相关研究工作。E-mailx-y
。ou2007@163.comh
2 结果与分析
2.1 DNA纯度及质量
紫外吸收检测结果表明,NA提取方法5种D
均可有效去除紫叶酢浆草茎段中的色素,但叶片
18
7期紫叶酢浆草DNA的提取方法
比较 侯艳霞等:
中的色素则有不同程度的残留,NA抽提液及D
。就其见表1)NA的颜色都带有少量的紫色(D
质量而言,用高盐低pDS法提取的DNAH法、S
/的O说明DODD.8,NA中含有少量226080小于1蛋白质、氨基酸和酚类等小分子杂质;用改良
/OTAB法提取的DNA的ODD.8,C226080大于1说明存在不同程度的R而核DNA微量污染;NA
/法和COTAB区室法提取的DNA的ODD226080
为1.可见这两种方法得到的D80~1.95,NA纯
度较高。从表1还可看出,叶片的DNA浓度及改良C得率明显高于茎段,且用SDS法、TAB法和核DNA法提取的DNA的浓度及得率相对较高,但所有方法提取的DNA其浓度都在
1-
·以上,均达到了R50nLAPD反应的模板3gμ要求。
表1 5种方法提取酢浆草茎段和叶片中的DNA结果分析able1 TestresultsofDNAextractedfromleavesandstemsofT
Otbfxalisrianularisivedifferentmethods gy
部位artsP茎段temsS
方法ethodsM
高盐低pH法SDS法改良CTAB法核DNA法TAB区室法C
叶片eavesL
高盐低pH法SDS法改良CTAB法核DNA法TAB区室法C
/DODO608022
771. 1.75 1.96 1.92 951. 721. 1.64 1.97 1.89 931.
1-·浓度/Lmgμ
1-·得率/ggμ
抽提液颜色
olourofleachinliuorC gq
无色无色无色无色无色浅紫紫色紫色无色浅绿色
DNA颜色olourofDNAC
白色白色白色白色白色白色浅紫浅紫白色白色
Concentration
85 325 205 285 105 455 1555 1085 955 170
Yield591.672775.001591.671316.67783.331641.675758.334233.333641.67800.00
2.2 DNA完整性
,叶片中琼脂糖凝胶电泳检测表明(见图1)
提取出的D基本无降解,而从茎段NA条带清晰,
说明中提取的DNA条带均有不同程度的拖尾,
有不同程度的降解,且有胶状物聚集于点样孔形成亮带,说明有多糖和蛋白质污染
。
2.3 RAPD扩增结果
以购自北京赛百胜公司的GGTGCCTA-6(为引物,对5种方法提取的酢浆草DACC)NA进行扩增,均能获得扩增带。但从茎段中提取的NA与叶片中的DNA相比,APD扩增条带不RD
图1 酢浆草DNA的电泳图谱
泳道1~5为酢浆草茎段,泳道6~10为酢浆草叶片;泳道1、泳道2、DS法,6利用高盐低pH法,7利用S泳道3、泳道4、TAB法,NA法,8利用改良C9利用核D泳道5、0利用CTAB区室法。下同。1
DOti.1 ElectrohoretoramofxalisrianularisNAF gpgg
lOtLane1~5werestemsofxalisrianularis,ane g
xalisrianularis;ane1and6Otl6~10wereleavesof g
slaltowH,lane2werethrouhthemethodofhih-- ggp,and7werethrouhthemethodofSDSlane3and8 gwerethrouhthemethodofmodifiedCTAB,lane4and g9werethrouhmethodofnuclearDNA,lane5and10 gwerethrouhthemethodofCTABsubarea.Thesame gbelow.
图2 酢浆草DNA扩增的PCR电泳图
NA MarkerM:D
xalisrianularisANDOtFi.2 PCRamlificationof gpg
19
黑 龙 江 农 业 科 学7期
完整,效果较差;而叶片中用核DNA法和CTAB区室法提取的D且条带数NA的扩增谱带清晰,较多,重复性好,说明所提DNA可用于RAPD研究。
/了用核DNA法提取的DNA质量较好,DO260
而且DOD.80~1.95,NA颜色为白色,280位于1
色素去除效果较好,是酢浆草DNA提取的首选方法。但用核DNA法提取的茎段中的DNA得率低于叶片,而用叶APD扩增条带也不完整,R片提取的D电泳条带清晰无拖尾,NA得率较高,
在紫叶酢浆草DAPD反应重复性好。因此,NAR
提取时,应选取新鲜嫩叶为提取材料,采用核
NA法提取效果最佳。D
参考文献:
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3 结论与讨论
从紫叶酢浆草中提取高质量的DNA是对其
进行分子生物学研究的必要前提,而DNA的质量则受提取方法的影响,应根据不同植物甚至同
9]
。种植物不同的组织选择适当的方法进行提取[同时还要综合考虑操作方便、提取成本等因素,筛
选出最适合的提取方法。
该试验结果表明,5种方法都能够提取出酢
但D浆草的D浓度和得率等有NA,NA的纯度、明显差异。采用高盐低pTAB区室法H法和C
所提取的D表明酢浆草组NA质量及得率较低,织中含有较多的多糖、生物碱和色素等物质,用这两种方法难以彻底去除;采用SDS法提取的
/而且从但OONA得率最高,DD.8,D226080低于1茎段中提取的DNA在电泳检测时发现点样孔有
亮带,说明有少量多糖的污染,从叶片中提取的色素去除效果较差,可能会影响NA呈浅紫色,D
后续试验,因而也不适合紫叶酢浆草DNA的提取;改良C但却TAB法能很好地去除糖类杂质,存在一定的R所提取叶片中DNA污染,NA颜色也略显紫色,对D核NA质量纯度有一定影响;
次生代谢产物NA法可先除去细胞质中的多糖、D
等干扰物质,避免和减少D试验也证实NA污染,
COtomarisononDNAExtractionMethodsofxalisrianularis gp
12222
,,HxrTZCJOUYaniaANGHaouHANGYonHENinILi-- g,Qg,
(,,,1.DeartmentofHorticultureShanxiForestrVocationalTechnicalColleeTaiuan pygy
,,,YaanSichuanShanxi030009;2.ColleeofHorticultureSichuanAriculturalUniversit ggy
)625014
:bstractInordertoextracthihualitDNAofxalisrianularis,ivedifferentmethodsofexctractinfAOt gqygg
OtwDNAfromleavesandstemsofxalisrianulariserecomared.Theresultsshowedthattheualitand pqyg ,ieldsofxalisrianularisNAextractedbthemethodsofSDSmodifiedCTABandnuclearDNA wereOtD yyg ,betterthanthemethodsofhihslaltowHandCTABsubarea.Atthesametimetheualitandieldsof -- gpqyy ,DNAextractedfromleaveswasbetterthanthatfromstems.Comrehensiveanalsisshowedthattakinleaf pyg asmaterialandusinnuclearDNA methodwasthebest. g
:;KewordsOtDxalisrianularis;NAextractionmethodDNAualittestin qyggy
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