ImageJ实用技巧之免疫组化与特殊染色
众所周知，对于科研狗来说，实验并不是拍出那么几张靓丽图片就能万事大吉，不拿出对应的统计图来说明问题，定会被老板骂的体无完肤。今天为大家带来小弟平时分析数据用的最多最常用，堪称神器的软件ImageJ。
这是一张肝脏的天狼猩红染色图，其中红色代表的是I与III型胶原阳性染色，统计这张图中红色部分占整张图片的面积百分比。
1.在电脑上打开这个神器ImageJ，会出现如图显示的工具栏
2. 将需要统计的图片在imageJ中打开
3.在图3显示的工具栏中选择image按钮，然后选择Type，再选择RGBStack按钮。
4.此时再将图片下方的调节滑轮拉到中间或是最右边，以获得最佳的对比度。
5.再选择image按钮，然后点击Adjust，再Threshold按钮
6.出现threshold窗口
7.此时只需调节上下两个滑轮即可对图片阳性染色面积进行标记（一般免疫组化或特殊染色只需调节下面这个滑轮，免疫荧光则相反）
8.此时的红色部分就是你的阳性染色部分，然后进入统计阶段，先点击Analyze按钮，然后Set Measurements按钮，出现弹窗后再点击Area fraction按钮（一般这一步第一次设置后，以后都不用设置了）
9.计算出阳性染色面积的百分比，点击Analyze按钮，然后点measure按钮即可， 图中6.164即为阳性染色面积百分比
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这是一张免疫荧光图，我需要统计其中红色部分的阳性染色面积
说完了免疫组化与特殊染色的部分，其实免疫荧光的统计和上面一样，只是在threshold这一步有点差别
1．1---6步骤都是一样，按照处理变成了下图
2.按图下方的滑轮保持在左边不变，然后在threshold窗口将下方滑轮滑到最右边，上方滑轮左右调节
3.计算出阳性染色面积的百分比，点击Analyze按钮，然后点measure按钮即可
总结：今天主要是给大家演示了imageJ最常用的两个功能，不过这种统计也有局限性，如果碰见Ki67这种需要计算增殖细胞个数的免疫组化，则推荐大家用IPP进行统计。
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