脐带间充质干细胞的采集及储存

脐带间充质干细胞的采集及储存

张绪芹

中图分类号：R714.56

（淄博市妇幼保健院，山东255029）

文章编号：1006－9534（2011）01－0055－02

业人员逐一编号统一保存。

讨

论

文献标识码：B

脐带间充质干细胞是干细胞的一种。因能分化成间质组织而得名，具有亚全能分化潜能，在特定的体内外环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞。从而给人类多种疾病的

［1，3］

。其临床应用前景非常好。我院自治疗提供了原材料

2009年7月始开展此项业务，积累了一定的经验，先报道如

下。

1．脐带通常在胎儿、胎盘娩出后被废弃。而脐带中含有大量的间充质干细胞，通过保存脐带，可以变废为宝方法简单、易操作，对孕妇和胎儿无不良影响。

［4］

。且

资料与方法

1．一般资料2009年7月～2010年2月，在我院分娩并采集脐带留取间充质肝细胞的产妇60例，其中，剖宫产者46例，经阴分娩者14例。产妇年龄22～38岁，孕周37～42周，新生儿Apgar评分7～10分，体重2500～5600g，所有采集脐带的产妇和新生儿均无异常。采集的脐带放置在特制的保存液中，集中保存。2．方法

（1）在产科门诊设立脐带间充质干细胞知识宣传栏，让前来做孕期检查的孕妇极其家属，了解脐带间充质干细胞的有关知识和保存脐带的好处。告知采集脐带是在

胎儿、

胎盘娩出后采集，不会对产妇和新生儿造成损害。（2）对有意保存脐带的孕产妇，由脐带保存机构的专业人员，向她们及其家属详细介绍脐带的采集方法和保存过程，讲解脐带间充质干细胞的特性及临床应用，回答他们的问题，解除其疑虑，告知保存脐带所需要的费用和年限。（3）签订协议。以双方自愿的原则，与脐带保存机构签订保存协议，明确双方的权利和责任。缴纳所需的费用。（4）准备用物。产妇入院后，要向值班医生和助产士说明要保存脐带，以便准备采

集用物，

详细询问并记录产妇及其丈夫的家族史、遗传病史、孕期检查情况。（5）产妇入院护理。按产妇住院护理常规。

护士要帮助产妇进行血液、尿液检查，心电图检查、胎心监护、彩超、胎儿、胎盘功能检查等，做好产妇和家属的心里护理，消除他们的恐惧疑惑心里。（6）留取过程。手术室、产房内严格消毒，所用物品均为一次性无菌材料。胎儿娩出后，常规结扎处理好脐带，胎盘娩出后，先结扎脐带的断端，在距断端20～40cm处用0．5%碘伏棉球消毒后剪断，轻轻挤净脐血管内的血液，注意一定要把血液挤干净，再用无菌丝线结

扎，

然后将用生理盐水把脐带冲洗干净，最后把脐带放入盛有特制保存液的容器中密封．。在容器外贴上标签，注明产

妇姓名、

留取单位、住院号、新生儿出生时间、性别、体重。另采集产妇静脉血5ml于试管内。详细填写产妇和新生儿的

有关信息和分娩情况表格。让产妇和家属确认并签字。将脐带、试管和信息表格，一起放入4℃的冰箱中。（7）通知脐带保存机构的专业技术人员来取。时间不能超过48h。

结

果

此60例产妇均系自愿保留脐带提取间充质干细胞，并

积极配合。所留取的脐带均符合保存条件，被脐带保存库专

2．保留脐带间充质干细胞的适应症

（1）产妇要求：年

龄在38岁以下，

发育、营养正常，无恶性肿瘤及传染病，无家族遗传病史，无血液病、代谢性疾病，羊水检查未发现染色体

异常。（2）胎儿要求：活胎、无畸形。3．间充质干细胞的特性

（1）具有强大的增殖能力和多

向分化潜能，

在适宜的体内或体外环境下，不仅可分化为造血细胞，还具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、

基质细胞等多种细胞的能力。（2）具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增值及其

免疫反应，

从而发挥免疫重建的功能。（3）具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，

不存在免疫排斥的特性。4．间充质干细胞临床应用的常见问题

（1）免疫排斥反应，同种异体干细胞移植最大的限制就是免疫排斥反应，引起细胞间移植排斥的是一类称作主要组织相容性抗原的蛋白质分子。间充质干细胞最大的特性就是几乎不表达HLA－II类分子，这就意味着不同个体间应用间充质干细胞不会引起排斥反应，为间充质干细胞的广泛应用奠定了基础。（2）致瘤性，已有研究表明，人间充质干细胞在体外培养扩增25代以上仍可保持基因稳定，不会形成恶性克隆，同时动物体内实验也未见肿瘤形成，这就为间充质干细胞的临床应用提供了有力的保障。（3）质控体系为保证临床用间充

质干细胞的质量，

在分离、培养、传代、冻存及检测的每一个过程均设置了多重质控，且均在GMP实验室内完成，制备的

间充质干细胞在所有检测完成并合格后投入临床应用。5．脐带间充质干细胞的优点

（1）脐带中的间充质干细

胞更原始，有更强的增值分化能力。（2）免疫细胞较为幼稚，功能活性低，不会触发免疫反应及引起移植物抗宿主病。（3）干细胞易于分离，纯度高，无肿瘤细胞污染。（4）扩增时培养体系统一，便于质控。（5）可制成种子细胞低温冻存，多次使用，复苏后细胞损失小。（6）潜伏性病毒和病原微生物的感染及传播几率比较低。（7）采集时对产妇和新生儿无任何危害及损伤。（8）采集方便，来源广泛，易于保存和运输，不受任何伦理和法理的控制，具有广阔的临床应用前景

［5，6］

。

参

考

文

献

1］黄鹏，马廉．人脐带间充质干细胞的应用和研究现状和进展［J］

．中国输血杂志，

2009，03．（下转第49页）

［

变即胎盘的过度增生，肥大，出现大胎盘。

根据本研究对GDM胎盘VEGF免疫组织化学染色光镜观察，发现VEGF在GDM血糖控制欠佳组胎盘中表达阳性率明显高于对照组（84．6%vs30．6%，P＜0.01）。缺氧缺血是引起VEGF高表达的重要介导因子，在糖尿病患者的许

糖基化终末产物、缺氧缺血等因素使一些多组织因高血糖、

［5，6］

。因此，VEGF的高表促血管生长的细胞因子表达增加

达可能与干绒毛小动脉管壁增粗、管腔狭窄有关。另外，糖

GDM胎盘中高表达与缺氧缺血、高血糖相关，故推测：GDM孕妇血糖控制欠佳时，胎盘存在缺氧状况，所分娩的新生儿，

神经行为评分欠理想，陈旧性颅内出血的发生率升高。Bjork等

对胎盘进行的研究表明，妊娠12～32周血糖变化与胎盘形态结构变化密切相关，而妊娠32周后，血糖变化与胎盘

［12］

形态结构变化无关，进一步表明妊娠早期血糖控制有重要临床意义。本研究只是仅仅做了新生儿的追踪，存在局限性，对于婴儿远期神经行为的影响有待进一步研究。总之，对GDM研究的目的是使GDM孕妇得到早预防、早诊断、早治疗，期望尽量减少对子代的影响。

参

考

文

献

尿病的高血糖状态能使有丝分裂原蛋白激酶（MAPK）成员

p42/p44以及蛋白激酶C（PKC）先后或同时活化，能介导

［7］

VEGF的升高。糖化血红蛋白（HbA1c）是葡萄糖与血红蛋血糖控制差的GDM患者HbA1c升白的β链N端结合产物，

高，而高HbA1c可使红细胞氧离曲线左移，引起细胞氧离能使血管向组织供氧减少，加之血糖升高致使血液粘力下降，稠度增加，微血管灌注不良，引起组织细胞缺氧缺血，损伤内

［8，9］

。因此推测，VEGF在GDM使其合成VEGF增加皮细胞，

胎盘中高表达与缺氧缺血、高血糖相关。本研究对GDM胎

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收稿日期：2010－04－29

盘VEGF免疫组织化学染色光镜观察，还发现VEGF在GDM血糖控制较好组胎盘中表达阳性率与对照组比较无统计学意义；VEGF在GDM血糖控制欠佳组胎盘中表达阳性率高于血糖控制较好组。这提示我们应严格控制孕妇血糖达理想

尽量避免胎盘结构和功能的改变，以求避免给胎儿生状态，

长发育异常和新生儿出生后患病率的增高埋下伏笔。本研究通过对研究对象新生儿的追踪，发现GDM组孕妇所分娩的新生儿头颅B超最常见的异常表现为：室管膜下脉络丛囊性改变。脉络丛见于第Ⅲ、Ⅳ脑室顶和囊性改变、

部分侧脑室壁。它是由富含血管的软膜与室管膜直接相贴并突入脑室而成的皱襞状结构，脉络丛的主要功能是产生脑脊液，脑脊液是由脉络丛上皮细胞分泌的，室管膜则成为有脉络分泌功能的脉络丛上皮。新生儿的室管膜下囊性改变、丛囊性改变，是形成于：宫内缺氧/感染引起的陈旧性出血或囊性改变是渗血或液经过两三个月形成血管发育异常，［10］［11］

（neonatalbehavioralneuro-的。新生儿行为神经测定

NBNA）可以了解新生儿行为能力，logicalassessment，并能早

期发现轻微脑损伤，以便早期干预。我国新生儿神经行为评适用于足月新生儿/早产儿孕周纠正至40周时，分共20项，

37评分总分为40分，以一周内新生儿获37分以上为正常，分以下尤在2周内≤37分者需长期随访。本研究发现

VEGF在胎盘呈高阳性表达率所分娩的新生儿行神经行为评分低于VEGF呈低表达率所分娩的新生儿；VEGF在胎盘呈高阳性表达率所分娩的新生儿头颅超声发现室管膜下囊性

脉络丛囊性改变等异常的机率升高。因为VEGF在改变、

（上接第55页）［2］郑志娟，庄文欣，付文玉．人脐带间充质干细胞的研究进J］．解剖科学进展，2008，01．展［［3］孙国栋，李志中．人脐带间充质干细胞在组织工程中的研J］．现代生物医学进展，2009，12．究进展［［4］薛美思，刘毅．脐带间充质干细胞在细胞治疗中的研究进

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櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀櫀

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42．

收稿日期：2010－05－05