培养基配方及配置
培养基配方及配置
根据其作用不同，培养基分为： 诱导培养基 增殖培养基 生根培养基
根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。
基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS 、White 、 N6、B5 、改良MS 、Heller 、Nitsh 、SH 、 Miller 等。
完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。 N6培养基特点：
• 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计 • 成分简单
• KNO3 和 (NH4)2SO4含量高
• 广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等 White 培养基特点：
• 1943年由Ｗhite 为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作Ｗhite 改良培养基 。 • 特点：无机盐含量较低 • 适用：生根培养。 B5培养基特点： • 含较低的铵
• 双子叶植物 尤其木本植物组培可选择 MS 培养基特点：
无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高。 MS 培养基是目前应用最多最普遍的培养基。无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养。并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡
培养基配方明细表：
培养基成分：
一、无 机 盐 ：
氮 枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛 。 磷 缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。
钾 促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。
钴 缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。
二、有机物
碳水化合物：选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等
• 蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15% • 大生产时可用白糖 糖在培养基的作用：
1）为细胞提供合成新物质的碳骨架 2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3）维持渗透压
维生素
种类： VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、 VB3（烟酸）、Vc （抗坏血酸
浓度：0.1－1.0mg/L
作用：VB1 促愈伤组织产生，提高活力
VB6 促根生长 Vc 防组织褐变
VB3 与植物代谢和胚的发育有关系
氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、 天冬酰胺、丙氨
酸等等。因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。
肌醇：又称环己六醇，在糖类的转化中起作用
椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10－20%，使用注意茎尖大小 香蕉泥：用量150－ 200ml/L ，应用在兰花组培 马铃薯汁液：用量150－200g/L，使苗壮
水解酪蛋白：浓度100－200mg/L，应用在微茎尖培养
三、激素
自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、生长、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动。
在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。
通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大的变化，这主要取决于植物的内源激素水平。
组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA ）等，有的是合成的，如二氯苯氧乙酸（2，4－D ）
（一）、激素的种类： 1、生长素类：
在自然界中，生长素影响茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根等现象
在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织） 组织培养中常用的生长素：
1 二氯苯氧乙酸（2，4－D ） 2 萘乙酸（NAA ） 3 吲哚乙酸（IAA ） 4 吲哚－－3－丁酸（IBA ）
NAA 、IAA 、IBA 被广泛用于生根，2，4－D 有利于愈伤组织的诱导和
生长。
IAA 容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。 溶解方法：1M NaOH或95％酒精，以前者为好保存：配成一定浓度后，
冰箱冷藏保存
2、细胞分裂素
自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等
组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不
定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。 常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA ）
激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT ） 玉米素（ZT ）
噻二唑苯基脲（ thidiazuron 、 TDZ ） 溶解方法：1MHCL
保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
3、赤霉素
由日本人黑泽1926年发现。自然界中，赤霉素能够打破休眠、促进果实成长等效果。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的。虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育成正常小植株的报道，但在使用中仍需慎重，不可轻易添加。 赤霉素有20多种，其中在组织培养中最常用的是GA3。在组织培养中与生长素和细胞分裂素相比，赤霉素不太常用，据报道赤霉素能刺激不定胚正常发育成小植株 溶解方法：95％酒精
保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解 灭菌：高温易分解，要过滤灭菌 4、脱落酸
在自然界中，脱落酸能阻碍发育、促进老化、形成休眠芽等作用。 经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽。
材料的试管保存，加上脱落酸能抑制生长，使继代培养时间延长。 溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。 保存：具有热稳定性，但容易发生光解。 配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
四、培养体支持材料 • 1. 琼脂
• 用量7－10g/L（0.7%-1%）
注意：1 若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。
2 当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼
脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg 和微量元素。 • 3. 其它
卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等
五、辅助性物质
• 1）. 抗生素：1. 常用种类：青霉素 链霉素 庆大霉素等 • 2. 用量：5%－20%
• 3. 作用：防止由外植体内生菌造成的污染。 • 4 过滤灭菌
• 2. ）抗氧化物：常用抗氧化剂及使用：
• 半胱氨酸VC （50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。
• 3）活性炭：
• 1. 作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓 度 0.1 －0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）。利于胚胎培养。
• 2. 常用浓度：0.5－10g/L • 3. 活性炭的作用
• ①对生长的抑制：其吸附了植物激素
• ②对生长的刺激：其吸附了有抑制作用的物质 •
培养基配制
(二) 母液配制要求：
• 1. 母液浓缩倍数：10-100 ，大量元素10；微量元素、铁盐100；有机物50；
• 2. 选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 • 3. 防止沉淀
• 4. 激素母液浓度：1mg/ml,1次配成50或100 ml
• 5. 激素溶解： IAA 、IBA 、GA 、ZT 先溶95%酒精再定容； • NAA 先溶于热水或95%酒精再加水； • 2，4-D 先溶于1M NaOH再加水； • KT 、BA 先溶于1M HCl再加水。
MS 培养基母液的配制
培养基熬制：
1. 将定容好的培养液取1/3倒入铝锅中，同时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。
2. 用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。
3. 将容量瓶中剩余的液体一并倒入铝锅中，摇晃使均匀。
调PH 值：
• 用0.1MNaOH 或HCl 调PH 值为6.0。
分装：
趁热分装，100ml 的三角瓶约装入30－40ml 。
扎口与灭菌:
• 要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。
• 培养基应及时灭菌，防止变质。
灭菌后，应尽快地转移培养瓶使其冷却，一般应将灭菌后的培养基储藏于30℃以下的室内名，最好储藏在4－10℃的条件下。
应当注意的是，某些生长调节物质如IAA 、ZT 、ABA 等以及某些维生素是不稳定的，不能和其他的培养基一起高压灭菌，而要进行过滤灭菌。