短串联重复基因座突变率的分析研究

中国法医学杂志２０００年第１５卷增刊

短串联重复基因座突变率的分析研究

李建金伍祥林

吕德坚伍新尧

５１００８９）

区敬华

中山医科大学法医学系（广州

摘要分析亲子鉴定案例进行中的ＳＴＲ基因座的突变率。采用ｃｈｅｌｅｘ１００快速抽提ＤＮＡ，ＤＮＡ扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色法，参照标准品进行ＤＮＡ分型。在３００例已确定亲生关系的案例中，有１１例出现ＳＴＲ基因座变异，其中０１１Ｓ５５４基因座６例，Ｄ１９Ｓ２５３基因座２例，ＳＥ３３、Ｄ１２Ｓ３９１、Ｄ１３Ｓ６３１基因座各１例。结果提示；用ＳＴＲ基因座进行亲子鉴定，必须考虑ＳＴＲ基因座突变因素。

关键词

短串联重复序列

变异亲子鉴定

Ａｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍ

ｒｅｐｅａｔ／ＬＩＪｉａｎｊｉｎ，ＷＵＸｉａｎｇｌｉｎ，ＬＵＤｅｊｉａｎ，ｅｔ

ａ１．／

ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｏｒｅｎｓｉｃＢｉｏｌｏｇｙ，ＳｕｎＹａｔ－ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８９

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ｂｙａｎａｌｙｓｉｎｇ

ｔｈｅ３００

ｒａｔｅｓ

ｃａｓｅｓ

ｏｆｐａｔｅｒｎｉｔｙ

ａｒｅ

ｔｅｓｔ

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ｌａｂｉｎｔｈｅｒｅｃｅｎｔｙｅａｒ，ｗｅ

ｈａｖｅ

ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｍｕｔａｔｉｏｎｉｎＳＴＲ１０ｃｉ

ｖｅｒｙ

ｈｉｇｈ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｅｐｓｉｎｃｌｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ

ＤＮＡｂｙｃｈｅｌｅｘ１００，ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡ，ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇ，ＤＮＡｔｙｐｉｎｇｂｙｓｔａｎｄａｒｄｆｏｕｎｄ，ｉｎｄｕｄｉｎｇ

ｓａｍｐｌｅｓ．ＴｈｅＳＴＲｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎ１１

ｃａｓｅｓ，Ｄ１９Ｓ２５３ｌｏｃｕｓ２

ｉｎｄｉｃａｔｅｄ

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ｔｅｓｔｃａｓｅｓ

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ＤｌｌＳ５５４ｌｏｃｕｓ６

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ｒａｔｅｓ

ｌｏｃｕｓｌ

ｃａｓｅ．Ｄ１３Ｓ６３１１０ｃｕｓｌｃａｓｅ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｗｈｅｎＳＴＲｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ

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ａｒｅ

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ｉｎＳＴＲ１０Ｃｉｓｈｏｕｌｄｂｅ

ａｐｐｌｉｅｄｐａｔｅｒｎｉｔｙｔｅｓｔ．

Ｐａｔｅｒｎｉｔｙ

ｔｅｓｔ

Ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ

Ｍｕｔａｔｉｏｎ

近几年来，短串联重复（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍ

ｒｅｐｅａｔ，

ＳＴＲ）序列被广泛应用于亲子鉴定及个体识别。经对本室近来接受的亲子鉴定案例进行综合分析，发现在已确定亲生关系的３００例个案中，有１１例ＳＴＲ基因座的遗传存在变异，现报道如下。

２结果

选ＴＨ０１、ｖＷＡ、ＰＬＡ．ＤｌＩＳ５５４、ＳＥ３３、Ｄ１２Ｓ３９１．Ｄ１３Ｓ６３１、ＣＳＦＩＰＯ、Ｄ１９Ｓ２５３和Ｄ７Ｓ８０９等１０个ＳＴＲ基因座作为亲子鉴定常用的遗传标记。在３００例已经确定亲生关系的案例中，有１１例出现ＳＴＲ基因座变异（表１）。每例皆为１个ＳＴＲ基因座不符合孟德尔遗传规律，其它９个基因座均符合亲子遗传规律，然后加做其它基因座，均符合亲子遗传规律。３００个案例的亲权概率为０．９９７３一－０．９９９９。

表１．３００例确定亲生关系案的ＳＴＲ基因座遗传变异分布

Ｔａｂｌｅ１．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆ

ｌｏｃｉｔｅｓｔｅｄｉｎ３００ｐａｔｅｒｎｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇ

ｃａｓｅｓ

１材料与方法

１．１血标本

取本室进行亲子鉴定者静脉血ｌｍｌ，柠檬酸钠抗凝。１．２主要仪器

ＰＣＲ仪（ＭＪ，ＰＴＣ—１００）｝离心机（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；电泳装置（Ｂｉｏ—Ｒａｄ）；超纯水器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。１．３主要试剂

Ｃｈｅｌｅｘ

１００（Ｂｉｏ—Ｒａｄ）；Ｔａｑ

１０ＳＴＲ

ＤＮＡ聚合酶；

ｄＮＴＰ；引物（上海生工合成）；丙烯酰胶（Ｐｒｏｍｅｇａ）；亚甲基双丙烯酰胺（Ｐｒｏｍｅｇａ）。

１．４

ＤＮＡ抽提

Ｃｈｅｌｅｘ１００进行快速提取［１１。

１．５

ＤＮＡ扩增、电泳、分型

参照Ｅｄｗａｒｄｓ等［２３的方法，稍作改进。

＊

中山医科大学２１１基金资助课题

１０

中国法医学杂志２０００年第１５卷增刊

３讨论

ＳＴＲ基因座一般是由２～６个核苷酸作为核心序列串联重复形成，广泛分布于人类基因组中。检测ＳＴＲ基因座所需的仪器设备及操作步骤较简单。ＳＴＲ基因座等位基因片段较短，ＰＣＲ扩增的成功率和灵敏度均较高，同时检测多个ＳＴＲ基因座可达到类似ＤＮＡ指纹的同一性认定水平。基于以上特点，近几年来ＳＴＲ基因座被广泛应用于亲子鉴定。在本室检测时，常用１０个ＳＴＲ基因座，其累积平均非父排除率达０．９９９９以上。

值得注意的是，ＳＴＲ基因座的突变率远远高于人类基因组的平均突变率［３］。人类基因组的平均突变率为１．４ｘ１０ｄｏ。从表１可见，在３００例已确定亲生关系的案例中出现ＳＴＲ基因座变异的共有１１例，每例均为１个基因座违反孟德尔遗传规律，其它９个基因座均符合这一遗传规律，加做其他基因座以后，未再发现有违反孟德尔规律的。因此，将违反孟德尔遗传规律的１个基因座考虑为遗传变异，此时可通过其它９个以上的基因座计算亲权概率，结果这些案例的父权概率均达到０．９９７３以上。这一结果提示，在用ＳＴＲ基因座进行亲子鉴定时，必须充分考虑ＳＴＲ基因座在

遗传过程中突变率较高这种现象。若只出现１个ＳＴＲ基因座违反亲子遗传规律，切勿就此轻易作出否定亲生关系的结论，必须检测更多的ＳＴＲ基因座，直至有３个以上的ＳＴＲ基因座违反亲子遗传规律，才能作出否定的结论，否则，可能导致结论错误。就本室的经验，在否定亲生关系的案件中，ＳＴＲ基因座一般都有３个以上违反孟德尔遗传规律。若检测的ＳＴＲ基因座足够多，且累积非父排除率足够高（本文选择１０个基因座，累积平均非父排除率达０．９９９９以上），仍然只有１个ＳＴＲ基因座违反亲生关系，则可暂将此基因座视为变异，通过其它基因座计算亲权概率。若概率能达到０．９９９９以上，则可确定亲生关系。

参考文献

１

Ｗａｌｓｈ

ＤＮＡ

ＰＳ．Ｃｈｅｌｅｘ１００ｆｏｒ

ａｓａ

ｍｅｄｉｕｍｆｏｒｓｉｍｐｌｅｅｓｔｒａｃｔｉｏｎｏｆ

ＰＣＲ－ｂａｓｅｄ

ｔｙｐｉｎｇ

ｆｒｏｍｆｏｒｅｎｓｉｃｍａｔｅｒｉａｌ。

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９１，１０：５０６２

ＥｄｗａｒｄｓＡ，ＨａｍｍｏｎｄＨＡ，ＣｈａｋｒａｂｏｒｔｙＲ，ｅｔａ１．ＤＮＡｔｙｐｉｎｇ

ａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｐｉｎｇｗｉｔｈ

ｔｒｉｍｅｒｉｃ

ａｎｄｔｅｔｒａｍｅｒｉｃ

ｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ．ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ，１９９１，４９：７４６

３肖仰哲，王保捷．短串联重复ＤＮＡ多态性及其法医学应用．

法律与医学杂志，１９９７，４：１２２

（１９９９一ｉｉ收稿）

案例报道

幼儿被闷死亡１例

竟花兰

李朝晖

郭晓然

刘于武

潘昭良

中山医科大学法医系（广州５１００８９）

１案情摘要

据死者母亲介绍：某日下班回家，见２岁儿子睡于床上身盖毛巾被，以为孩子正在熟睡，未加注意。但经过一段时间仍未醒，遂上前细看时，发现口唇发紫，已无呼吸、心跳，即报案。因丈夫一直在家，疑夫所为。２尸体检查

死者为２岁９个月男童。发育正常，营养较差，较为消瘦。尸长８７ｃｍ，尸斑于项背部，呈暗紫红色，指压稍腿色，角膜中度混浊。左右瞳孔等圆等大。眼结膜见针尖大散在出血点。颜面部见针尖大小的出血点。颈部肌肉无出血，舌骨、甲状软骨无量折，其附着的软组织无出血。胸腺包膜下广泛散在出血点。心内膜下、双肺肺膜下及肝、脾、肾、胰等脏器包膜下均无明显出血斑点。脑组织淤血。心、肝、脾、肺、肾、胰、脑等淤血及轻度水肿外，未见明显的病理改变。３讨论

从尸体解剖及镜下检查，均未见有明显病变，可排除疾病致死的可能性。取血液、内脏、尿液进行毒物分析未检见常见的毒物成分。故不支持中毒致死。虽然胸腺包膜有出血点，但其余脏器均未见浆膜下或包膜下出血。死者指、趾甲明显紫绀，眼睑结膜及颜面有细小出血点，这些改变说明死者生前机体有明显缺氧，提示有窒息死亡的尸体改变。

本案在解剖时观察到有缺氧的改变，考虑为机械性窒息死亡，但尸解未见有引起缺氧的器质性改变。口、鼻、胸部亦未见有损伤。眼睑、颜面虽有出血点，但出血不明显。经毒物分析排除中毒致死后，认为是因窒息死亡。后经司法机关查实为死者父亲所为，其父亲怀疑儿子非自己亲生。乘妻上班之际，将儿子装入一圆形带釜的大塑料桶内（桶口直径为２７ｃｍ）。然后扭紧盖子，使幼儿因缺氧致死。对这种用特殊手段致幼儿窒息死亡的案例，值得法医工作者引起注意和借鉴。

（１９９９—１１收稿）

】１