四色淋巴细胞亚群分析实验快速指南
四色淋巴细胞亚群分析实验快速指南
样本制备
要求：
1. EDTA 抗凝外周全血，室温存放（20-25℃），最好不超过8小时，无凝血，
无溶血。
2. 试剂盒BD MultiSET IMK Kit（340503）包括：
MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4
MultiTEST CD3/CD16+56/CD45/CD19
FACS Lysing Solution（红细胞裂解液）
去离子水、合适量程移液器、涡旋振荡器等。
样本制备：
1. 取两支上样管，分别标记样本编号及序号。
2. 在管1中加入20 μl CD3/CD8/CD45/CD4抗体。
3. 在管2中加入4. 充分混匀血液样本，在每管中分别加入
5. 避光，室温放置15-20 min。
6. 红细胞裂解液用去离子水107. 每管中加入450 μl
8. 避光室温放置12-15 min4℃冰箱避光保存。染色后24
使用MultiSET 1. 开机后，点击打开软件。
2. 在Sign In 击Accept 3. 进入,
（1） 在中选择“From Cytometer: Acquisition and Analysis”。
（2） 在中选择“Sample name”。
3中选择“Data File、Laboratory Report、Physician
可以选择保存路径。
（4） 在View Reports中选择“Until ‘Next ’Button Pressed”。
4. 单击Accept ，进入FACSComp 界面，根据需要选择Launch FACSComp，进
入FACSComp 进行仪器设置调整，或者Skip FACSComp跳过这一步。
5. 进入Test Prefs界面确定报告内容，
（1） 在Physicians Report Choices中，全选，其它默认选项。
（2） 在界面下方，进入Panel Tools，在Panels 中选择“4 Color TBNK”，
点击OK 。
（3） 在界面下方，进入Lot ID，在Reagents 中最后两项输入相应试剂批号，
点击Save 。关闭此窗口后，点击Accept 。
6. 进入Samples 界面，输入Sample name，根据需要，Sample ID（样本编号），
Case No（病历号）等选填，在Panel Name下拉菜单中选择“4 Color TBNK”。一次实验最多可以可以输入99个标本。
7. 点击菜单栏中的Cytometer ，
（1） 在下拉菜单中依次选择1、2、3、4。
（2） 在下拉菜单中选择Instrument Setting 项，调出机器设置条件，用
FACSComp 自动校准的条件存于BD Files/Instrument Setting
Files/Calib File.LNW，Open-Set-Done 。
8. 然后单击Run Tests，进入Acquisition 界面，将样本管1放在上样处，开始样
本获取。如果需要，可以打开Cytometer 菜单下的Detectors/Amps（主要是SSC ），Threshold 调整阈值（FL3）300从而扣除过多的碎片。
9. 将流速置于MED 或者HI ，点击Acquire 入Analysis ，检查自动设门情况，如果需要，点击进行调整。
10. 重新自动进入Acquisition 的步骤，获取
条件和第1管相同，保持不变。
11. 生成并打印各种报告。 注：在Multi-tube QC中，第一项95-105%范围内可以接受；第二项1-2%，但不能超过5%；Th/Ts的比值范围0.7~2.87。
12. 如果有多个样本，将回到界面重复，全部结束后，生成Summary
Report 。
13. 点击Quit 退出。
用MultiSET
1.
2.
3.
2步，第3步Set Up界面下，数据来源选择From Data Files. 进入5。 界面，点击Add Sample按键加入数据。 键进入获取界面，无需任何调整，自动进入Analysis 界面，同
5.