微生物实验中常用细菌染色方法的改良1
医药生物技术
微生物实验中常用细菌染色方法的改良
王碧玉 刘雪梅 唐正宇
长沙卫生职业学院 湖南长沙 410100
【摘 要】细菌染色方法是微生物实验中观察细菌形态结构以及掌握细菌代谢、繁殖等情况的常用普及技术。微生物实验中常用的细菌染色法包括其革兰染色法、抗酸染色法等。为进一步提高实验中细菌形态的观测质量,本文就对两种常用细菌染色法进行了改良,据实验结果显示,其改进后方法操作更加简单,更有效起到细菌染色作用及观测作用。
【关键词】微生物实验;细菌;染色方法;改良
细菌属于一种呈单细胞形式生长的原核微生物,生长、代谢以及但由于细菌均为半透明繁殖都与其细菌自身结构有着重要的关系[1]。
且无色的微生物,若需清晰的观察其形态就必须进行染色观察。一经染色后的细菌细胞呈明显的特征,在显微镜下非常容易识别及观察。微生物实验中最常用细菌染色方法包括其革兰染色法、抗酸染色法为进一步提高等,但是传统的方法步骤中仍存在许多弊端及不足[2]。实验中观测细菌形态的质量,本文就对几种常用细菌染色法进行了改良,现报告如下。
液。
方法:取少许患者结核杆菌痰标本,涂抹于洁净载玻片,待自然干燥后通过火焰固定;将少许9%石炭酸复红染液滴于制作好的涂片上,行染色5min后水洗;将少许3%盐酸酒精滴于制作好的涂片上,行脱色30s后水洗;将少许吕氏美蓝液滴于制作好的涂片上,行复染1min后水洗;待涂片自然干燥后以作镜检。
2.2 结果与讨论
镜检结果结核杆菌呈红色,,且镜下背景清楚可见。传统的痰涂片染色法为染色液覆盖后加温。即采用酒精灯在玻片下加温,以保持染色液冒蒸汽5min后水洗涂片。此方法过程繁复,且加温中温度不易控制,常出现细菌烤焦现象。且加温中,染液会产生大量对人体有改良后的方法增加了初染液的浓度,害气体,严重影响检测人员[6]。简化了涂片方法及加热过程,并且能取得与传统方法相同的检验结果。
综上所述,微生物实验中常用的细菌染色法存在许多繁复的过程及弊端,经过改良后的染色方法,其在拥有传统染色方法一致的准确结果上,进一步简化了其操作过程,大量节约了实验所需的人力资源及时间,相对提高了细菌染色的质量。故此类改良方法在现今微生物实验教学上具有重要意义。
传统的痰涂片染色法为萋-纳抗核杆菌的检验需求量也日趋加重[5]。
酸染色法,但是此方法需耗费大量人力及时间,存在较多弊端。改良后的染色法,其采取更加简便的涂片方法及加热过程,能取得与传统抗酸染色法相同的结果。
2.1 材料与方法
材料:结核杆菌,9%石炭酸复红染液, 3%盐酸酒精, 吕氏美蓝
1 革兰染色法
革兰染色法(Gram stain)于1884年由丹麦医师Christain Gram创立,也是现今细菌学使用最为广泛的鉴别染色方法之一。其据大量传统的革兰染色法包括了初染、媒染、脱色、复染四个步骤[3]。研究资料表明,现将传统革兰染色法以改良的三步法取代,取得良好效果。
1.1 材料与方法
材料:表皮葡萄球菌,大肠杆菌,结晶紫染液,Grams碘液,0.4%复红酒精液。
方法: 取一张洁净载玻片,在载玻片上放置一滴生理盐水,将变形杆菌液体培养物或葡萄球菌培养物与生理盐水磨匀,涂成1cm×1cm大小的区域。待涂片自干后在酒精灯火焰上缓慢烘干,最后通过火焰5次,以使细菌固定在玻片之上;在制作好的细菌涂片上滴加少许结晶紫染色液,染色1min后行水洗;在制作好的细菌涂片上滴加少许Grams碘液,染色1min后行水洗;在制作好的细菌涂片上滴加少许0.4%复红酒精溶液,染色1min后行水洗,待自然干燥后以作镜检。
1.2 结果与讨论
镜检结果表皮葡萄球菌呈深紫色,大肠杆菌呈红色。革兰染色法是微生物实验中最经典及最常用的染色法之一,传统的染色法四步骤中脱色是影响染色结果的重要步骤,其脱色的时间能直接影响染色结果的准确性。改良后的三步法,其在原始复杂步骤中,采用0.4%复实验中应用从30s红酒精作为复染剂,能起到脱色和复染双重目的[4]。到5min不同的时间,其所得结果均呈良好,故说明改良后的方法能有效减少操作步骤,,起到缩短时间提高效果作用。
参考文献
[1]沈关心,微生物学与免疫学[M], 北京: 人民卫生出版社, 2005:121.
[2]李美玉,罗海华,刘长秀,张瑞林,王玲,郑文晖,胡黎平,汪华侨,常用细菌染色方法的改良[J],解剖学研究,2007,29,5:398-399
[3]Murray P, Jo Baron E, Jorgensen J, et al. Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington DC: American Society for Microbiology, 2003.
[4]Liu TZ. Bacteria, Gram stain modified two-step staining with the classic fourstep clinical evaluation. Int Med Health Guidance News,2010, 16(4):480-482.
[5]Jean Pieters.Mycobacterium tuberculosis and the Macrophage: Maintaining a Balance[J],Cell Host&Microbe,2008,3(6):399-407
[6]鲍桂乐, 李仁道,两种抗酸染色方法的比较[J],实验与检验医学, 2009, 27(5) : 570 .
2 抗酸染色法
抗酸染色法(fast staining method)是于1882年由F.Ehrlich首创并通过Ziehl改进而产生出的细菌染色方法,近年来此方法视为检验结核杆菌的首选染色方法。随着现今结核病人的日益增多,其结
作者简介
王碧玉(1982.06--),湖南长沙人,就职于长沙卫生职业学院,学士,助理实验师,研究方向:卫生微生物
生物技术世界 2012年第3期 23