13G2011外周血和脐带血内皮祖细胞分离液
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本品适用于科学研究，不能用于临床
各种动物或人外周各种动物或人外周血和脐带血外周血和脐带血内皮祖细胞分离液细胞分离液
货号：货号：VE2012HK
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KIT
操作说明和使用及保存中的注意事项：操作说明和使用及保存中的注意事项： 试剂盒内容
试剂：全血及组织匀浆稀释液 试剂：细胞洗涤液 试剂C： 试剂E： 说明书
100ml 100ml 100ml 50ml 1份
操作方法（操作全过程应在20-25度环境下进行）
使用方法 使用方法
1， 例：取 1ml肝素抗凝血与全血及组织匀浆稀释液（或胎牛血清或人
血清悬起匀浆的细胞 1X108/ml）1：1混合再与1ml混匀置 20度下自然沉降20-30分钟。吸取浑浊的上清部分，弃去底部红细胞 备用。
2，
（比例为1：1），20度400g/分钟，离心20分钟（水平转子），此时离 心管中由上至下细胞分四层。
第一层;为血浆或组织匀浆液层。
第二层；第二层；为环状乳白色含所需内皮祖为环状乳白色含所需内皮祖细胞内皮祖细胞。细胞。
第三层；为透明分离液层。
天津市灏洋生物制品科技有限责任公司◆TIAN JIN HAO YANG BIOLOGICAL MANUFACTURE CO.,LTD
236# Baidi Road Nankai District Tianjin ◆ 300192 P.R China
技术服务Tel: [1**********] [1**********] ◆ Fax: 86-22-87893403 87894017 ◆ QQ:387745440 2572212016
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（Cat#：2010X1118）4-5毫升的试管中，充分混匀后，以1500-2000转/分离心10-30分钟。沉淀经反复洗2次即得所需细胞。(此方法效 果较好，推荐使用) 分离图例：分离图例：
注意事项 注意事项
1. 启封后应置4℃保存避免微生物的污染。 2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待 溶液温度升至室温时，摇匀后使用。 3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃且在无菌环境 下，避免微生物的污染，否则会影响分离质量。
应 用
-从动物组织中分离所需细胞
特点
-密度变化率依照Ficoll 400，泛影酸和氢氧化钠. -最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签 -生理学参数 -在低粘度时高密度 -无菌-即用型-溶液
产品质控
溶液 注射用水 pH 7.0-7.5
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渗透压 280-340mOsmol/kg 内毒素
注 意
TBD实验室的细胞分离培养基是敏光型的。这种培养基在运输和贮藏过程中应避光保温。由于 各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以 调节离心转数，调节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。组织， 血液，细胞要求新鲜，避免冷冻和冷藏。
贮 藏
18-25℃避光保存。启封后置4℃保存。本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。
相关试剂 相关试剂
货号 TBD2012SCB TBD2012SCP TBD2012UCP TBD2012CP 2010C1119 2010X1118 TBD2012HSCI TBD2012MSCI
名称 干细胞重悬液 干细胞冻存液 脐带保存液 淋巴细胞保存液 全血及组织匀浆稀释液
细胞洗涤液 造血干细胞流式检测系统 间充质干细胞流式检测系统
各种细胞因子 细胞培养耗材
规格 100ml 100ml 100ml 100ml 200ml 200ml 50T 50T
详情请查询灏洋生物网站（www.tbdscience.com）vip库存系统。
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组织单细胞悬液的制备（全过程及所需试剂要求无菌环境）
剪碎法：剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量
PBS+10%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆
状，加入10 ml PBS+10%胎牛血清；用吸管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网过滤到试管 内；离心沉淀1500 rpm×3 min，再用PBS+10%胎牛血清洗3次，每次以500 rpm短时低速 离心除去细胞碎片，以200目不锈钢滤网过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为 （2～5）×107 /ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用胎牛血清悬起细胞浓度为1×107 /ml的单细胞悬液备用。
匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入匀浆器法70 ml组织研磨器内，加入2 ml PBS+10%胎 牛血清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用10 ml PBS+10%胎牛血清冲洗研器；收集细胞悬液， 经200目不锈钢滤网过滤；离心沉淀800 prm×2 min ，再用PBS洗3次，离心沉淀。以下 处理同剪碎法。 细胞计数方法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板） 进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于 对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。 计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻 片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对 于细胞团按单个细胞计数。 4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml ×稀释倍数 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：
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1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3
细胞计数要点：
1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬
浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。 如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数500个/10 mm2 时， 说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀， 以求计数准确；
4. 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞 压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
5. 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 初学者易犯的错误：
1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。 2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。
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