肠黏膜雌孕激素受体表达在肠易激综合征发病机制中的作用研究
第11卷 第4期2002年 12月
胃肠病学和肝病学杂志
CHINESE J OURNA L OF GASTROENTERO LOGY A ND HEPA TO LOGY
Vol. 11 No. 4December 2002
基础研究
肠黏膜雌孕激素受体表达在肠易激综合征
发病机制中的作用研究
韩 炜 李学会 李延青 陈 建 郭成浩 李君曼
[摘要] 目的 探讨雌、孕激素受体在肠易激综合征(IBS) 患者肠道内的分布、变化及其临床意义, 并对在消化道的作用靶点和可能的细胞学机制做出合理解释和推断。方法 经结肠镜钳取24名正常人和59例肠易激综合征患者的回肠末端、盲肠和降结肠黏膜, 分别采用抗人雌、孕激素受体抗体标识肠黏膜上雌、孕激素受体, 并应用免疫组化方法检测了雌、孕激素受体阳性细胞数目改变。结果 1、IBS 患者回肠末端和盲肠黏膜雌激素受体阳性细胞数目增多(P
[关键词] 结肠疾病 功能性 雌激素受体 孕激素受体
The functional research of expression of estrogen receptors and progestogen receptors
of intestinal mucosa in the irritable bowel syndrome pathogenesis
Han wei, Li Xuehui, Li Yanqing, et al.
Department o f Gastroenterology , Qilu Hos pital, Shandong University , Jinan 250012
=Abstract > Aim To investigate the intestinal distribution, intestinal change and clinical significances of estrogen re -ceptors (ER) and progestogen receptors (PR) in patiens with irritable bowel syndrome (IBS) and interpret and infer reason -ably their targets and their possible cytology mechanism. Methods Biopsies from 59patients with IB S and 24control persons were acquired by colonic scope and checked for the number of the positive cells for estrogen receptors(E R) and progestogen re -ceptors(PR) in terminal ileum, caecum and decendign colon(DC) with immunohistochemical methods, which were used with mouse monoclonal antibodies against human estrogen receptors(ER) and progestogen receptors(PR). Results The number of the positive cells for E R in ter minal ileum and caecum was significantly elevated in the IBS patients (P
=Key words > Colonic disease Functional Estrogen receptors Progestogen receptors 肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS) 是以腹痛/腹部不适伴排便习惯改变为主要特征的一种功能性肠病(functional bowel disease, FB D) 。IBS 病因和发病机制复杂, 迄今尚无定论, 国内外学者在神经内分泌、
作者单位:韩炜 李学会 李延青 陈建 李君曼 山东大学齐鲁医院消化内科, 济南250012 郭成浩 山东大学医学院病理科
免疫、消化道动力改变、心理、肠道敏感性改变等领域
[1]
做出了许多积极的探索。流行病学相关研究表明:IB S 患病多见于青壮年, 其中女性为主, 而孕期女性
[3]
IB S 发病率下降。女性FB D 患者焦虑、抑郁及恶心、腹部痉挛、背痛等发生率明显高于正常妇女, 特别是在月经期, 无论与正常组还是与患者自身比较, 症状均显著加重[3]。Prior 研究发现在卵巢激素水平明显降低
[2]
第4期肠黏膜雌孕激素受体表达在肠易激综合征发病机制中的作用研究#333#
的经期, 患者更易出现稀便[4]。上述有关IBS 症状与月经周期关系的研究结果提示:卵巢激素(雌激素和孕激素) 的周期性改变在IBS 的发病机制中有重要作用。但有研究发现, 月经期和应激状态下性激素水平是降低的, 性激素水平在FB D 患者和非FB D 者并无显著性差异[3], 它又是通过什么机制反而加重了IBS 症状? 众所周知, 激素通过特异性受体作用于靶器官, 但性激素通过什么机制来诱发和加重以肠道症状为主的IBS 症状? 本研究旨在探讨肠易激综合征患者肠黏膜上性激素受体是否不同于正常人, 以便从新的角度来阐述IB S 发病机制。
PBS 液洗涤; 采用新鲜配置的DAB 液显色; 蒸馏水充分洗涤后, 滴加苏木素轻度复染1分钟; 酒精逐级脱水, 二甲苯透明, 中性树脂树片, 显微镜下观察。
五、结果分析及判定
将IB S 组和正常组回肠末端、盲肠及降结肠组织切片上雌、孕激素受体阳性细胞数目进行对比观察, 每张切片选择5个含有最多阳性细胞的高倍视野进行计数, 每份标本的阳性细胞数以平均阳性细胞数/高倍视野记录, 并用各参数均值及标准差表示。两者差别采用SPSS 软件, 通过t 检验对各项参数进行显著性检验, P
材料与方法
一、临床资料
1、病例组 我院就诊的59例肠易激综合征患者, 男23例, 女36例, 平均年龄37岁(21~59岁) , 纳入标准为罗马Ò标准。其中腹泻型患者31例, 便秘型患者28例。女性患者均处于非月经期。2、正常对照组 无任何胃肠道器质性疾患、经结肠镜检查正常的患者24例, 其中男10例, 女14例, 平均年龄35岁(20~53岁) 。
二、标本的选取
经结肠镜在59例肠易激综合征患者肠道内钳取回肠末端黏膜标本19例, 盲肠黏膜标本30例, 降结肠黏膜标本37例; 24名健康者中取得回肠末端黏膜标本者11例, 盲肠黏膜15例, 降结肠黏膜21例。每一部位钳取肠黏膜组织2块, 大小约3m m @3m m @2mm, 用10%的中性缓冲福尔马林液固定后, 石蜡包埋待用。
三、主要试剂
即用型SABC 试剂盒、APES 切片黏合剂(武汉博士德生物工程公司) ; 抗人雌激素单克隆抗体、抗人孕激素单克隆抗体(福建迈新公司) ; HE 染色试剂由山东大学医学院病理教研室提供。
四、免疫组化染色方法
将石蜡标本连续切片, 厚度4L m, 脱蜡水化, 并行灭活内源性过氧化物酶、011%胰酶K 水浴消化和非免疫性动物血清封闭; 每张切片滴加50L l, 室温下孵育20分钟, PBS 液冲洗; 每张切片滴加50L l 即用型抗雌激素受体抗体(或即用型抗孕激素受体抗体) , 室温下孵育60分钟或置于4e 冰箱过夜, PBS 液冲洗; 滴加50L l 生物素标记的二抗, 室温下孵育30分钟后, PBC 液洗涤; 滴加即用型SABC 液室温下孵育30分钟后,
研究结果
一、雌激素受体阳性细胞(E R+)
1、染色结果 光镜下示雌激素受体阳性细胞被染成浅棕黄色, 散在于黏膜腺体之间(见图A 、B)
。
图A IBS 患者肠黏膜雌激素受体阳性细胞染色(DAB @
400)
图B 正常组肠黏膜雌激素受体阳性细胞染色(DAB @400)
2、IB S 患者回肠末端和盲肠黏膜雌激素阳性细胞数目增多, 降结肠黏膜与正常组无显著差别(见表1所示) 。
二、孕激素受体
无论IBS 组还是正常组, 各段肠道黏膜未见孕激素受体表达。
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胃肠病学和肝病学杂志
表1 各段肠黏膜雌激素受体阳性细胞计数
回肠末端
IBS 组正常组t 值
例数1911
数目P 值11. 26? 2. 88
例数3015
盲肠数目7. 57? 1. 504. 40? 0. 837. 58
P 值
例数3721
降结肠数目4. 05? 0. 913. 52? 0. 591. 77
P 值0. 082
第11卷
注:t 值、P 值为IBS 各组与正常组比较所得。
讨 论
性甾体激素受体属于配体诱导的转录因子超家族成员, 以往研究证实, 女性激素可使哮喘、过敏反应、自身免疫疾病等疾患的症状恶化。
本研究采用免疫组化染色发现:IBS 患者肠道黏膜孕激素受体阳性细胞呈阴性, 其与正常组无显著差别。根据本实验结果, 推测孕激素作用于IBS 的靶点可能为肠道外途径, 或者孕激素受体的活性和数目改变对IBS 患者发病无显著性作用。雌激素受体是体内代谢非常活跃的大分子, 一方面处于不断合成与降解的动态平衡之中, 一方面又受各种生理和病理因素的影响而发生变化。ER 的调节不但表现为受体数量和亲和力的改变, 还包括受体后信息转导系统的改变。有关IBS 患者肠黏膜上雌激素受体改变, 尚无文献报道, 根据现有知识, IB S 患者ER 受体阳性细胞增多的原因做出如下解释:1、在基因水平存在ER DNA 的异常高表达, 而导致部分人群对IBS 的易感倾向; 2、IBS 的致病因素和慢性经过可导致雌激素受体的分子构型和调节机制失常, 如受体分子中化学键的修饰和受体的磷酸化可增强受体与相应配体的结合能力[5]; 3、应激事件导致细胞膜或胞浆性质改变而引起ER 表达的上调
[6]
[8]
素受体, 发现除肥大细胞外, 淋巴细胞和巨噬细胞均无
雌激素受体表达, 赵秀杰等[12]用免疫组化法也证实人鼻息肉肥大细胞而非CD4+、CD8+及CD68+细胞表达雌激素受体。组织中相应受体的存在是组织对该激素敏感的最好标志。这一结果提示广布于肠道黏膜和黏膜下层的肥大细胞很可能是雌激素参与IBS 发病重要环节, 但仍需进一步的研究证实。
参考文献
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其意义1中华耳鼻喉科杂志, 1999, 34(3) :135-7
收稿日期 2002 07 09
(本文编辑:孙嫣)
。
目前关于雌激素在消化道作用的靶点和可能的细
胞学机制仍未阐明。近年来研究发现因肠道感染、肠道过敏等因素导致的肥大细胞激活可能在IBS 患者肠道高反应性中起主导作用, 它作为肠道神经和肠道平滑肌细胞间的联系纽带, 可引起IBS 患者腹部不适和排便习惯改变等症状
[7]
, 这与肥大细胞的激活密不可
分。其可通过诱导生长因子受体的表达, 使肥大细胞数目增多[9], 并能增强肥大细胞释放组织胺的能力[10]。上述结果均提示性激素, 特别是雌激素的确可通过改变肥大细胞的功能来影响消化道平滑肌反应, 肥大细胞可能是连接雌激素和IB S 之间的重要纽带。King 等
[11]
最近用免疫组化法检测子宫黏膜内的雌激