聚明胶肽注射液鲎试剂法检测细菌内毒素的研究
应用科技
聚明胶肽注射液鲎试剂法检测细菌内毒素的研究
王海雄
(浙江康乐药业股份有限公司。浙江温州325000)
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≯脯耍】目的：建立快速的聚明胶肽注射液细茵内毒素检查法，从而取代t熟原检壹法。方法：按中国药典2005年版二部附录所栽的细菌‘I
f内毒素检查法进行实验。结果：将聚明胶肽注射液稀释16倍可消除千扰作用，用标示是敏度为O．03EunzL-I的检测细菌内毒素有效，结果准，，
：确可靠。结论：利用细菌内毒素检查法代替聚明胶肽注射液热原检查是可行的。
筑
f。侈≤键词】聚明胶肽注射液；细葛内毒素；鲎试制
，，
聚明胶肽注射液为明胶多肽溶液，平均分子量(MW)应为27500—39500，其渗透压与血浆相等，可保持血管内液与组织间液的
平衡，不弓I起组织脱水及臃水肿，具有维持血容量和提升血压作用。其国家药品标准目前为家兔法检查热原，未见有细菌内毒素检查报告。现
考察用鲎试剂检测聚明胶肽注射液中细菌内毒素的可行性。
1试验材料
1)XW一80A型旋涡混合器。(上海医科大学仪器厂)：HH一6型
恒温水浴箱【金坛市江南仪器厂)；细菌内毒素国家标准品(批号：150601—200860中国药品生物制品检验所)：鲎试剂1(批号：
090211规格：九=o．5Eu，mL^o．1mU支；批号：090414规格：丸=0．03Eu，mL、0．1mU支均为广西北海)：鲎试剂2(批号：09102301规格：A=o．5Eu／mL、0．1mL／支；批号：09102202规格：A=0．03ELl，mkQ1mL／支均为福州新北生产)：细菌内毒素检查
用水(批号：100106，规格：5mL，支，广西北海生产)：细菌内毒素检
查用水(批号：091
02205规格：5mtd瓶，福州新北生舟。
2)供试品。聚明胶肽注射液(批号：1
[1**********]
100203
浙江康乐药!止股份有限公司)
2方法及结果
21细菌内毒素限制∞的确定
细菌内毒素限值(L)的确定根据L=I
反应值(K)为5Eu，kg，本品热原检查的兔剂量(M)为lOmL／kg，
故L=K／M=5／10=0．5
22最大有效稀释倍教∞ⅣD)的确定
数MVD本品用灵敏度为=L／入=蝴03．—03E16u，倍
111I鲎试剂来检测，本品最大有效稀释倍23供斌品的干拔顽试验与结果
231稀释供试品
取05Eu，mL为计算岗式品稀释倍数的基准灵敏度(记为A0同，计
算出对应九0．5的稀释倍数MVD0．5：MVD0．5=L／入0．5=0．5／0．5=l(ap原液)，类似可计算出本品需稀释的5个浓度：MVD0．5稀释1倍，
MVD025稀释2倍，MVD0．125稀释4倍，MVD0．06稀释8倍，
MVDOD3稀释16倍，用内毒素检查用水把本品稀释成E述系列浓度
备用。
232阴性及阳性对照
供试品阴性对照(NPC)系列：取广西北海批号的TAL(九=Q5
Eu，mL)及湛江产批号的TAL(九=05Eu，mL)各10支，分别各加
0．1
mL上述稀释好的供试品，再各加o．1mL内毒素检查用水，每—供
试品浓度重复两反应管。供试品阳性对照(PPCJ系列：取上述两批TAL各10支，分别各加o．1mL上述稀释好的供试品，每种浓度两份，
再各加0．1mL己稀释好的2A浓度(即1．0Eu／mL)的内毒素，按药
典内毒素检查法的规定进行反应观察结果，反应结果见表1：
，，
矗
表1干扰顶嘲燃
雀试剂批
0钧211
∞10230l号l00201
100202
稀径10。003
100201
100∞2100a03
供试
供试
供试
供试
供试
倍数
口PPc
口
PPc
口
眦
僻试
口
PPC
口
PK
口
PPc
q日
口口
口口
■日
口口
口口
l
248
加
结果表明，供试品稀释倍数为1(原液)、2、4、8时，供试品阴性
对照(NPC)均有出现阳性结果，表明E述样品对两厂家的鲎试剂均有干扰，其干扰性质为增强作用，反应的结果属假阳性。当稀释倍数为
1
6时，供试品阴性对照(NPC)系列结果均为阴性，供试品阳性对照
妒PQ系列结果均为阳性，表明本品至少需稀释16倍，使用灵敏度
A(003Eu／mL或相应于各稀释倍数的更高灵敏度的鲎试剂作检查才
能消除干扰。
24供试品的干莸斌验与结果
按药典方法f乍供试品干扰试验。选用3批经热原检查合格的本品，用内毒素检查用水将其作16倍稀释(称为S16)。用S16和内毒素检查用水分别制成含细菌内毒素工作标准品0．06、0．03、0．015、
Q0075Eu，mL的4种浓度的内毒素溶液。按药典方法n】进行供试品干扰试验。结果见表2：
表2干扰魂嗽
鲎{劫删号：090414规I苦：x=003Eu／mL,0．1mL／支
内毒蠹内蠹素{农度(Eu／t，
她号
0．06
O．03
0．015
0．ooT5
实测灵敏震
巨／E．术0．03(EJ
，
l∞∞l
口．03‘厶I
l10。202
0．03‘t)
ll∞2030．03(2‘)
l
鲎试稿眦号：09102202规皓：x=003Eu／mL0．1mL／支
I懵
内t蠢内蠢蠢髓(11u／11)
，
饥06
0．00
O．015
0．0075
实稠灵敏度
h，E．
术
0．03(E．)
／1002010．03(L)
11002。20．03暇)
1100203
0．03(L)
1
实验结果显示3批本品的Et／Es值均在0．5．2_0之间，表明本品经16倍稀释后，使用灵敏度为0．03Eu，mL的鲎试剂检查细菌内毒素即
可消除干扰。
3讨论
试验采用两个厂家的黉试剂对不同批号的聚明睃肽注射液分别进行干扰试验，结果表明聚明胶肽注射液在稀释16倍砺肖除干扰作用，采
用细菌内毒素检查法是可行的。
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