PBS液完全培养基配制
PBS 液完全培养基配制：
一、取一定量的干粉剂，在无菌箱中操作，器皿洗刷消毒、按一定顺序置于超净台上，紫外线30-50min ；实验员自身准备；
二、去离子水------三蒸水
三、15--30℃温水少量，将干粉溶解其中；
四、加附加物：FBS---10%、NaHCO3、DMEM/F12、抗生素--青霉素 100U/mL等；
五、补加水至终量；
六、滤菌器滤过；
七、测PH ，调节使用NaOH 、HCL 调节；
种植液的配置：DMEM/F12 + 10％FBS + 1％青霉素-链霉素，4 °C 保存备用；
无血清培养液的配置：Neurobasal + 2％B27 + 1％青霉素-链霉素，4 °C 保存备用。
细胞原代培养
一、取新生SD 大鼠2只，用酒精浸泡1 min、碘伏消毒，滤纸铺
垫；新生鼠头腹曲，用无菌眼科剪把皮肤和颅骨剪开，向前翻；暴露出全部大脑，在其中后1/3处对称的轻轻剥离出像月牙状
透明海马组织。放入盛有无菌PBS 的培养皿内，剥离脑膜、清洗组织，干净后放入无菌干燥培养皿内；
取鼠胚：引颈法杀死动物，一手捏鼠尾将小鼠整个浸入75%
酒精烧杯中---2~3秒---置于无菌滤纸---止血钳向头尾拉伸暴露腹部---剖腹取鼠胚---置于无菌PBS 的培养皿中；
二、用眼科剪剪碎成稀糊状；
左手固定头部，新生鼠头腹曲，用无菌眼科剪把皮肤和颅骨剪开，向前翻；暴露出全部大脑，在其中后1/3处对称的轻轻剥离出像月牙状透明海马组织。放入盛有无菌PBS 的培养皿内，剥离脑膜、清洗组织，干净后放入无菌干燥培养皿内，用眼科剪剪碎成稀糊状，吸入装有组织体积4倍的DMEM/F12培养液的离心管，用吸管吹打50次左右，静置5 min后，吸取上清液，剩下的沉淀再按照相同的比例加入DMEM/F12，接着加入等体积的0.25％的胰酶，在常温下，边吹打边观察，液体变得均匀混浊后加入等体积的FBS 终止消化。最后配平，1100 r/min离心，收集细胞沉淀(以上都要在冰上操作) 。收集的细胞加入体积3倍的种植液，吹打混匀，用2%台盼蓝和白细胞计数板粗略检测活细胞浓度，接种在50 ml的玻璃培养瓶中。1 ~ 2 d后，收集上清液、1100 r/min离心、收集细胞。同样加入体积3倍的种植液，吹打混匀，用2%台盼蓝和白细胞计数板粗略检测活细胞浓度，1×104 ~ 1×105个/L接种300 µl 的细胞悬液在多聚赖氨酸包被好的24孔培养板上。培养 1 d 后，全量更换种植液为无血清培养液，此后每3 d半量换液；每天观察细胞的生长情况。
八、