蝇蛆几丁糖的免疫调节作用研究

DOI :10. 13300/j . cn ki . hnlk xb . 1997. 03. 010第16卷第3期华　中　农　业　大　学　学　报1997年　6月Journal of Huazhong Agricultural University

Vol . 16　No . 3

June 　　1997

蝇蛆几丁糖的免疫调节作用研究

雷朝亮　钟昌珍　宗良炳　赖　凡　牛长缨

(华中农业大学植保系, 武汉430070)

＊

摘要　以化学方法制备的蝇蛆几丁糖, 按不同剂量喂饲实验动物小鼠, 检测其对小鼠免疫器官、细胞免疫、体液免疫、吞噬功能及N K 细胞活性的影响。结果表明:蝇蛆几丁糖0. 10、0. 20ml 10g 体重剂量组对小鼠胸腺 脏体比、脾脏 脏体比有显著增高作用, 能使细胞免疫(DT H ) 、体液免疫(HC 50) 、单核-巨噬细胞功能及N K 细胞活性增强。

关键词　蝇蛆; 几丁糖; 免疫调节中图法分类号　Q 955

几丁糖是世界上少见的天然带正电荷高分子电解质, 具有良好的生物相容性和生物降解性。从本世纪60年代开始, 人们对甲壳质或几丁糖的研究十分广泛, 其研究与应用涉及纺织、农业、印染、医药及食品等众多领域[1～4]。几丁糖作为功能食品添加剂, 可用于降低胆固醇、

双尾菌增殖因子、调节人体所必需微量元素的含量、降低食品的热量及免疫助剂等方面[2], 但几丁糖对动物免疫调节作用的研究还未见详细报道。本文报道了蝇蛆几丁糖对实验动物的免疫调节作用。

1　材料与方法

1. 1　材料

　　蝇蛆几丁糖的制备:采用化学法制备脱乙酰几丁糖, 并配成含几丁糖2%的水溶液。

供试动物:NK 细胞活性采用同龄BALB C 小鼠, 体重(18±2) g , 雄性; 其它试验均用同龄N IH 小鼠。

1. 2　试验设计　　为考察蝇蛆几丁糖的免疫调节作用, 共设置5种试验处理, 即3个剂量组(0. 05ml 10g , 0. 10ml 10g , 0. 20ml 10g ) 、阴性对照组(饮自来水) 及免疫抑制对照组(饮自来水另加免疫抑制剂环磷酰胺40mg kg 体重ip ) , 每组动物10只, 喂养4周后, 分别测定脏体比值、细胞免疫功能(迟发型变态反应) 、体液免疫功能(抗体生成细胞检测) 、单核-巨噬细胞功能(小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能) 及NK 细胞活性等。试验分组情况为:A 组, 阴性对照组(只饮自来水) ; B 组, 饮自来水+环磷酰胺40mg kg (ip ) ; C 组, 蝇蛆几丁糖溶液5ml kg 体重(灌胃) +环磷酰胺40mg kg (ip ) ; D 组, 蝇蛆几丁糖溶液10ml kg 体重(灌胃) +环磷酰胺40mg kg (ip ) ; E 组, 蝇蛆几丁糖溶液20ml kg 体重(灌胃) +环磷酰胺40mg kg (ip ) 。1. 3　测定方法

　　1) 迟发型变态反应。按前述试验分组方法, 在动物处死前5d , 头颈部皮肤去毛, 1%

收稿日期:1997-03-05

＊湖北省自然科学基金资助项目

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260　　华中农业大学学报第16卷　

DNCB (2, 4-二硝基氯苯) 10μl 致敏, 次日加强1次, 4d 后用DNCB 对小鼠右耳进行攻击双面, 每面10μl , 24h 后处死动物, 用8mm 钢冲取耳片, 以2耳重量之差作为肿胀指数, 以考察DNCB 诱导小鼠迟发型变态反应。

2) 体液免疫功能测定。应用血清溶血素(HC 50) 抗体生成试验, 动物分组方法同上, 喂养受试动物1周后, B 、C 、D 、E 组分别使用环磷酰胺(40mg kg 体重ip ) 2次(隔日1次) , 动物处死前5d , 每鼠腹腔注射1%羊血0. 2ml 。试验结束断头处死动物, 取血清用生理盐水稀释、混匀, 取稀释液加绵羊红细胞+补体进行溶血反应, 比色测定。

3) 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定。供试动物处死前0. 5h , 腹腔注射鸡红细胞悬液(阿氏液保存) 0. 5ml , 处死动物, 仰位固定, 剪开腹壁皮肤, 反复注射生理盐水2ml , 轻揉腹部, 用滴管吸出腹腔液1ml 滴于玻片上, 放入垫有湿纱布的搪瓷盒内、温浴、漂洗、固定, Giemsa 染色、晾干、油镜观察、计数, 观察巨噬细胞数, 每片200个, 计算吞噬率。

4) NK 细胞活性测定。依照前述试验方法, 试验结束后, 将小鼠无菌取脾, 用Hanks 液制成单细胞悬液, 经200目筛网过滤, 用Hanks 液洗3次, 每次离心10min , 将细胞悬液浮于1ml 的完全培养液中, 经染色计数活细胞数(95%以上) , 最后用RPM1640完全培养液调整细胞浓度为5×10个 ml ; 通过37℃5%CO 2培养4h , 在培养板中每孔吸取上清液100μl , 同时加入LDH 基质液100μl 反应3min , 每孔加入1mol L HCl 30μl , 在酶标仪490nm 处测定OD 值。

6

2　结果与分析

2. 1　小鼠脏体比值

　　测定小鼠胸腺指数与脾脏指数, 并进行统计学检验(表1) , 结果表明:小鼠在灌胃2%蝇蛆几丁糖液后, 无论低、中、高剂量组其胸腺指数与对照组(B 组) 比较均极显著升高, 但脾脏指数仅中剂量组(2%蝇蛆几丁糖溶液10ml kg ) 显著升高。

表1　不同剂量几丁糖液对小鼠免疫器官的影响1) (x ±s )

Table 1　Effect of different chitin dos e on little mice immuno organ (x ±s )

试验分组Experimental group

A B C D E

动物数Amount of animal

1010101010

胸腺指数Thymus index 41. 70±7. 9026. 20±4. 0036. 90±8. 30＊＊40. 60±5. 50＊＊37. 60±6. 10＊＊

脾脏指数Spleen index 56. 7±8. 339. 3±7. 444. 2±7. 847. 1±6. 6＊44. 3±6. 4

　　1) 与B 组比较Compare with group B 　＊:P

2. 2　迟发型变态反应

　　从表2可以看出:2%蝇蛆几丁糖不同剂量组处理后, 小鼠2耳重量差值只有中剂量组(2%蝇蛆几丁糖溶液10ml kg ) 与对照组(B 组) 比较呈极显著升高。2. 3　体液免疫功能

　　从表2可以看出:2%蝇蛆几丁糖溶液高、中、低剂量组均可不同程度地升高因环磷酰胺所,

明受试动物能增强机体体液免疫功能。

表2　不同剂量几丁糖液对小鼠免疫功能的调节作用(x ±s )

Table 2　Regulation of different chitin dos e on little mice immuno function (x ±s )

试验分组Experimental

group A B C D E

动物数Amount of animal 1010101010

2耳重量差值 mg Weight difference of tw o ears 3. 49±0. 572. 71±0. 392. 88±0. 553. 64±0. 56＊＊3. 24±0. 59

273. 5±40. 00226. 1±32. 21240. 9±28. 52259. 2±20. 48＊258. 1±26. 91

HC 50

吞噬率 %Phagocytic rate 24. 0±4. 615. 6±4. 619. 3±4. 7＊25. 8±5. 2＊＊20. 1±2. 9＊

NK 细胞活性NK -cell activity 41. 66±6. 2229. 15±8. 6045. 14±5. 48＊＊48. 95±15. 26＊＊46. 87±10. 69＊＊

2. 4　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能

　　由表2可知, 2%蝇蛆几丁糖液不同剂量处理均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能, 尤其是中剂量组(10ml kg 体重) 与B 组比较, 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率有极显著的差异。

2. 5　N K 细胞活性

　　从表2还可以看出, 2%蝇蛆几丁糖液不同剂量组的小鼠NK 细胞活性都与B 组具有极显著的差异, 说明2%蝇蛆几丁糖液5～20ml kg 体重均有激活NK 细胞活性的功能。

3　小　结

　　经免疫调节5项试验表明, 2%蝇蛆几丁糖溶液具有多种免疫调节作用。它可使小鼠的胸腺 脏体比和脾脏 脏体比增高, 使细胞免疫(DTH ) 、体液免疫(HC 50) 、单核-巨噬细胞功能和NK 细胞活性增强, 其最佳有效剂量可能为10ml kg 体重。

参　考　文　献

1　于义松. 一种天然高分子材料———甲壳素及其衍生物. 化学与粘合. 1992, (1) :50～542　林伟忠. 甲壳素 壳聚糖及其在食品工业中的应用. 食品科学, 1986, (12) :11～15

3　张燕婉, 王光华. 壳聚糖对五种食物中毒菌生长的影响. 微生物通报, 1991, 18(6) :344～347

4　Ghaouth A E , Arul J , Grenier J , et al . Antifungai activity of chitos an on the postharvest pathogens of straw berry fruits . Phy -topathology , 1992, 82(4) :398～402

STUDY ON IMMUNO REGULATION OF FLY -MAGG OT CHITIN

Lei Zhaoliang 　Zhong Changzhen 　Zo ng Liangbing 　Lai Fan 　Niu Changying

(H uazhong Agricultural University , W uhan 430070)

ABSTRAC T 　Detecting the little mice ′s im muno organs , cellular immus , humo ral immus ,

phagocytosis and NK -cell activity after they were fed w ith 0. 10, 0. 20ml 10g b . w . of fly -mag -go t chitin made by chemical means shows that fly -maggot chitin can remarkably promote the little mice ′s thymus viscera and spleen viscera and it can also develop c ellular immus (DTH ) , humoral

imm us , mono -nuclear macrophage and NK -cell activity .

KEY WORDS 　fly -maggot , chitin , immuno regulation