生化分离实验(双水相萃取.人参皂苷提取)
实验一： 双水相体系萃取甘草酸盐
实验目的：
学习双水相体系萃取的原理；掌握双水相体系萃取基本操作技术。 实验原理：
双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似, 都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同时, 物质进入双水相体系后, 由于表面性质、电荷作用和各种力(如疏水键、氢键和离子键等) 的存在和环境因素的影响, 使其在上、下相中的浓度不同。物质在双水相体系中分配系数K 可用下式表示：
K= C 上/ C 下
其中K 为分配系数，C 上和C 下分别为被分离物质在上、下相的浓度。
分配系数K 等于物质在两相的浓度比, 由于各种物质的K 值不同, 可利用双水相萃取体系对物质进行分离。其分配情况服从分配定律，即，“在一定温度一定压强下，如果一个物质溶解在两个同时存在的互不相溶的液体里，达到平衡后，该物质在两相中浓度比等于常数”，分离效果由分配系数来表征。
实验器材：
离心机、粉碎机、烧杯、分液漏斗、天平、烧杯、布氏漏斗、真空泵、吸管、量筒等。
试剂与材料：
甘草、氨水、无水乙醇、磷酸氢二钾、浓硫酸等。
操作步骤：
取甘草5 0g粉碎至粗粉（40目左右），加400ml2％氨水100℃
煎煮30min ，滤过，浓缩至1:2（约25ml ），称取磷酸氢二钾9g 溶于25ml 甘草提取浓缩液中，搅拌使其溶解，并与36ml 无水乙醇混合，倒入60ml 离心管中，以2000r/min离心3min ，形成二相，用分液漏斗将二相分开，分别向二相缓慢逐滴加入浓硫酸至pH ＝2，停止加酸，放冰浴冷却10min ，使沉淀完全析出，离心（4000r/min，3min ），沉淀用无水乙醇洗涤，称重。
结果与讨论：
上相结晶主要是甘草单铵盐，重量约在0.25g ，下相结晶主要是
磷酸盐，重约2.5g 。
实验二：心脉康片人参皀苷的提取
实验目的：
学习吸附色谱法，掌握其原理和操作方法。
实验原理：
吸附色谱利用固定相吸附中心对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离，吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程 。
实验器材：
恒温水浴锅、烧瓶、球形冷凝管、分液漏斗、 蒸发皿、层析柱（26×300）、烧杯、量筒、研钵等。
试剂与材料：
心脉康片、乙醚、甲醇、氧化铝（色谱纯、80目）、正丁醇、乙醇等
操作步骤：
取心脉康片30片，除去包衣，研细，置锥形瓶中，加乙醚100ml ，加热回流1小时，弃去乙醚液，药渣挥干溶剂，加入甲醇120ml ，加热回流1小时，放冷，滤过，蒸干，残渣加水20ml 溶解，用水饱和的正丁醇提取5次，每次30ml ，合并正丁醇提取液用水20ml 洗涤。正丁醇液蒸干，残渣加2ml 乙醇使溶解，加适量氧化铝拌匀，干燥。上氧化铝柱（80目，30g ），用70%乙醇200ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干即得。
结果与讨论：
将色谱柱用夹子固定在铁架台上，使其完全垂直放置，加流动相至柱子上部，使柱子充分润湿，打开色谱柱下部的旋塞，控制流速为成滴不成串，取规定固定相置于烧杯中，加入流动相调成糊状，用玻璃棒导流，转入层析柱。在添加固定相时，用两个吸耳球轻轻敲击色谱柱，体的下部，使固定相装填紧密。把层析柱装填好之后，剪一滤纸，使其比色谱柱内径略小，然后小心的放入平整的吸附层上部。（对光
检查柱是否均匀）。 . 将色谱柱中多余的流动相自下部放出，使溶剂液面恰好在滤纸上端1～2mm 处。将制得的样品小心的沿着层析柱壁加入，并且边加边用吸耳球两两相对地轻轻敲击色谱柱体的下部，当固体粉末加完后再用极流动相少量涮洗器壁并转移至色谱柱内，再用少量流动相将层析柱壁上的样品完全淋洗到吸附剂上端，待要分离的样品完全沉淀成一薄层后，打开下部活塞，当溶剂液面距离样品薄层1～2mm 时，再沿着器壁小心的加入已配好的流动相，尽量不要溅起样品薄层。 …层。 .
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