厚朴酚在Hank_s平衡盐溶液的溶解性和稳定性_吴安国
厚朴酚在Hank' s 平衡盐溶液的溶解性和
稳定性
11，21111，2
吴安国，曾宝，王春玲，黄孟秋，陈建南，赖小平
（1．广州中医药大学新药开发研究中心，广东广州510006；2．广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东东莞523808）
摘要：目的考察厚朴酚在Hank's 平衡盐溶液（HBSS ）中的溶解性和稳定性，为进行厚朴酚的体内吸收HPLC 法，与代谢研究奠定基础。方法采用RP-分别考察pH 值、温度、光照对厚朴酚溶解性和稳定性的影响。结果厚朴酚在甲醇中的标准曲线为Y =4374X －2207．7（r =0．9999），在8～200μmol /L范围内检测限为0．4μmol /L，精密度和稳定性均符合要求。厚朴酚在含有1%甲与峰面积呈良好的线性关系，
80的HBSS 中的溶解性较好，醇和0．1%吐温-在pH 7．4的HBSS 中的溶解性和稳定性较好，在37℃下24h 内较稳定，光照对厚朴酚的稳定性几乎没有影响。结论厚朴酚在pH 7．4的HBSS 中的溶解性和稳定性较理想，可以进行其在体内吸收与代谢的研究。关键词：厚朴酚；Hank's 平衡盐溶液；高效液相色谱法中图分类号：R 94
文献标识码：A
doi ：10．3969/j．issn．1006－8783．2010．06．005
文章编号：1006－8783（2010）06－0568－04
Study on solubility and stability of magnolol in Hank's balanced salt solution
22WU An-guo 1，ZENG Bao 1，，WANG Chun-ling 1，HUANG Meng-qiu 1，CHEN Jian-nan 1，LAI Xiao-ping 1，
（1．Research Center of New Drug Development ，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine ，Guangzhou ，Guangdong 510006，China ；2．Research Institute of Mathematical Engineering ，Guangzhou University of Chinese Medicine ，Dongguan ，Guangdong 523808，China ）
Abstract ：Objective To investigate the solubility and stability of magnolol in Hank' s balanced salt solution （HBSS ），grounding for its absorption and metabolism．Methods The concentration of magnolol was determined by RP-HPLC．PH 、temperature and light were examined on the solubility and stability of magnolol．Results The linear calibration curve of magnolol in methanol was fitted to be Y =4374X －2207．7（r =0．9999）in the concentration range of 8－200μmol /Land the detection limit was 0．4μmol /Lwith required precision and stability．Magnolol dissolved well in HBSS containing 1%methanol and 0．1%tween-80，and its solubility and stability in pH7．4HBSS is good ，steady in 24h at 37℃，and invariable with light．Conclusion The solubility and stability of magnolol in pH7．4HBSS is rather ideal ，which is suitable for the absorption and metabolism experiments．
Key words ：magnolol ；Hank's balanced salt solution ；RP-HPLC
收稿日期：2010－10－19
基金项目：国家科技支撑计划项目（2006BAI11B00）
Email ：wag1114@foxmail．com ；通讯作者：赖小平，作者简介：吴安国（1985－），男，硕士研究生，男，研究
Email ：lxp88@gztcm．edu ，cn．员，博士生导师，主要从事中药新药研究，
厚朴来源于木兰科植物厚朴Magnolia officinalis
Rehd．et Wils．的干皮、根皮及枝皮。厚朴酚是从中药厚朴中提取的一种含有酚羟基的生物活性物［1］质，具有扩张血管、抗炎、抗菌、抑制血小板聚集和抗心律失常等多种作用。厚朴酚属于难溶性化合物，很多学者在对其进行吸收与药动学的研究时，忽略了对其溶解性和稳定性的考察。本实验考察厚朴酚在不同溶剂中的溶解度，以及pH 值、温度、光照对厚朴酚在Hank's 平衡盐溶液（HBSS ）中的溶解性和稳定性的影响，为进一步研究厚朴酚及其复方的吸收与代谢特性提供依据。
［2］
μmol /L的对照品贮备液。精密量取贮备液适量，用
200、100、80、40、20、10、8甲醇稀释成浓度为400、
μmol /L的系列溶液，分别吸取10μL 进样，在上述
记录峰面积，以浓度（c ）为横坐色谱条件下测定，
标，峰面积（A ）为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线
表明厚朴酚的为A =4374c －2207．7（r =0．9999），
浓度在8～200μmol /L范围内与峰面积线性关系良好。检测限为0．4μmol /L。
2．1．3精密度试验分别取高、100、40中、低（200、μmol /L）3个不同浓度的对照品溶液，连续进样6次，每次进样10μL ，测定峰面积，计算RSD 。结果3个不同浓度溶液的峰面积值的RSD 值分别为1. 72%、0．20%、1．45%，表明仪器的精密度良好。
800600U /m V
1
1．1
材料与仪器
材料
厚朴酚对照品（批号110729－200310，中国药品生
HBSS 缓冲液（8g /LNaCl ，0．4g /L物制品检定所），
KCl ，1g /L葡萄糖，60mg /LKH 2PO 4，47．5mg /L
Na 2HPO 4，调pH 值至7．4），甲醇（色谱纯，德国默80（药用级），克），吐温-超纯水。不同pH 值HBSS 缓冲液的配制：将pH 7．4HBSS 缓冲液分别用氨水3、5、7．4、9、11．5。和盐酸调pH 值为1．2、
1．2仪器
20A 高效液相色谱仪，SPD-20A 紫外岛津LC-SIL-20A 自动进样器，Dionex．Sh585柱温检测器，
LC Solution Ver1．22．SPI 英文版分析软件；箱，
HN1006超声波清洗机（广州华南超声波设备有限DHG-9140A 电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣公司），
D2251十万分之一电子天平科学仪器有限公司），
（广州市正一科技有限公司），HHS 21．25型电热恒温水浴锅（上海跃进医用光学仪器厂）。
A
[1**********]
2
4
a
B
6
8
10
U /m V
4002000800
2
4
6
8
C 10
U /m V
[***********]0020000
2
4t /min
a 6
8
2
4
6
8
2
2．1
方法
分析方法
U /m V
10D
厚朴酚难溶于水，易溶于甲醇，本实验首先建立厚朴酚于甲醇中的含量测定方法，用建立的方法测定厚朴酚在HBSS 中的含量，考察其溶解性和稳定性情况。
5C 18（254色谱条件色谱柱：Kromasil 100-mm ×4．6mm ，5μm ），流动相：乙腈-水（体积比80∶
20），流速：1mL /min，柱温：25℃，检测波长：2942．1．1
nm ；进样体积：10μL 。厚朴酚的保留时间为5．2min ，HPLC 图见图1。2．1．2
标准曲线精密称取厚朴酚26．7mg ，置5mL 的棕色容量瓶中，加甲醇溶解制成浓度为20000
10
A．甲醇空白对照；B．厚朴酚于甲醇中（a 为厚朴酚）；C．含1%甲醇和0．1%吐温-80的HBSS 溶液；D．厚朴酚于含1%80的HBSS 中（a 为厚朴酚）甲醇和0．1%吐温-图1
厚朴酚的HPLC 图
High performance liquid chromatogram of magnolol
Figure 1
5702．1．4
稳定性试验
广东药学院学报第26卷
100、40取高、中、低（200、0．1mL 的母液，80置10mL 的容量瓶中，加入吐温-80在HBSS 中的终浓度为0．1%，适量，使吐温-用HBSS 溶液定容至刻度即得。2．3．2
厚朴酚在37℃、不同pH 值HBSS 中的溶解
“2．3．1”按项下的样品配置方
性和稳定性的变化
μmol /L）3个不同浓度的厚朴酚样品溶液，分别在0、1、2、4、6、8h 进样6次，每次进样10μL ，测定峰面积，计算RSD 。结果3个不同浓度溶液的峰面积0．10%、0．41%，的RSD 值分别为0．25%、表明样品溶液的稳定性良好。2．1．5
重复性试验
取厚朴酚贮备液，置10mL 的
80，容量瓶中，加入1mL 质量浓度1%的吐温-用空白HBSS 稀释定容至刻度（浓度为200μmol /L），重复平行6次，过滤，进样10μL ，测定峰面积，计算RSD 。结果峰面积的RSD 值为1．43%。2．1．6
加样回收率试验
取已知浓度的厚朴酚
HBSS 溶液适量，置10mL 容量瓶中，平行3份，每份1、2mL 的对照品溶液，分别加入0．5、再加入1%吐80溶液1mL ，温-于37℃水浴锅中摇匀，过滤，进样10μL ，按照上述色谱条件进行HPLC 分析。测得平RSD 为2．3%。均回收率为98．5%，2．2
助溶剂和增溶剂的选择
厚朴酚难溶水，直接用HBSS 溶解，其溶解性很不理想，饱和浓度只有25．7μmol /L。为了提高厚朴酚在HBSS 中的溶解度，需在HBSS 中加入一定量的有机溶剂以改善其溶解性。
厚朴酚易溶于甲醇，因此选择甲醇作助溶剂。精密称取厚朴酚对照品适量，置5mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，浓度为20000μmol /L。用HBSS 稀释至理论浓度200μmol /L，测定其峰面积，计算得实际浓度只有88μmol /L，溶解性不理80以继续改善其加入0．1%吐温-想。在此基础上，
80后，溶解性。结果表明，在加入0．1%吐温-厚朴酚的溶解度达到了166μmol /L，见表1。
表1
厚朴酚在不同溶剂中的溶解性
The solubility of magnolol in different solvents （n =2）
c （厚朴酚）/（μmol ·L －1）
20025．788166
Table 1溶剂甲醇HBSS
HBSS （ρ=1%甲醇）
HBSS （ρ=1%甲醇+ρ=0．1%吐温-80）
法，用不同pH 值的HBSS 稀释定容，平行2份，置37℃的电热恒温水浴锅中，不定时的摇动容量瓶，在2、4、8、12、16、24、72、168h 时间点取样，进行HPLC 分析，考察厚朴酚在37℃下、不同pH 值的HBSS 缓冲液中的溶解性和稳定性随时间变化的情况。2．3．3
pH 7．4HBSS 中的溶解厚朴酚在不同温度、
“2．3．1”按项下的样品配置方
性和稳定性的变化
用pH 7．4的HBSS 定容，摇匀，平行2份，将样法，
4℃，37℃的电热恒温水浴锅中。品分别置－20℃、
4℃、37℃温度下的样品于2、4、8、12、18、24、72、168、720h 时间点取样，－20℃下的样品于2、72、168、720h 时间点取样，进行HPLC 分析，考察厚朴酚在不同温度下的溶解性和稳定性随时间变化的情况。2．3．4
光照对厚朴酚在HBSS 中的稳定性的影响按“2．3．1”项下的样品配置方法，用pH 7．4的HBSS 定容，摇匀，平行2份，分别于常温避光、常温4、8、12、18、24、72、168h 时间不避光下保存，于2、点取样，进行HPLC 分析，考察光照对厚朴酚的稳定性的影响。
3
3．1
结果
厚朴酚在37℃、不同pH 值HBSS 中的溶解性从图2可见：厚朴酚在强酸强碱中的稳定性较
和稳定性的变化
好；在pH 7．4HBSS 中的稳定性比较理想；在pH 5HBSS 中，厚朴酚在72h 内很稳定，随后发生降解，到第168小时降解了约1/4；在pH 9HBSS 中厚朴酚一直发生降解。3．2
pH 7．4HBSS 中的溶解性厚朴酚在不同温度、
从图3可见：厚朴酚在37℃环境中发生了少量降解，在4℃和－20℃的环境下很稳定。因此，当厚朴酚达到溶解平衡时需低温保存。3．3
光照对厚朴酚在HBSS 中的稳定性的影响从图4可见，光照对厚朴酚的稳定性无影响。和稳定性的变化
2．32．3．1
溶解性和稳定性实验样品配制
精密称取厚朴酚对照品适量，置
5mL 的容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度（浓度为20000μmol /L），摇匀，放置，作为母液。精密吸取
第6期吴安国，等．厚朴酚在Hank's 平衡盐溶液的溶解性和稳定性571
180c /(μm o ·L -1)
和稳定性。本实验使用混合溶剂以提高厚朴酚的溶
pH=1.2
pH=3pH=5pH=7.4pH=9pH=11.5
80的浓度均为无毒浓解性，当中的甲醇和吐温-度
［3－4］
120600
2
4
8
1218
t /h
2472168
，为厚朴酚生物样品的配制提供了参考。
4．280的加入顺序影响厚朴酚在实验中吐温-
HBSS 中的状态。先加入吐温-80，溶液不会出现浑浊现象，后加入吐温会出现微浑浊的现象，因此本实80的方式。验采用先加入吐温-4．3
影响药物溶解性和稳定性的因素是多方面的，pH 值、比如剂型、温度、光照等因素。温度的考察包括样品的处理温度、测定时的温度、实验中的温度、储存时的温度，即冷冻（－20℃）、低温（4℃）、体温（37℃），只有掌握不同温度对稳定性的影响，才可进一步对药物及其制剂的贮存和使用情况做出考虑。厚朴酚在低温下的稳定性较好，因此当厚朴酚达到溶解平衡时需低温保存。药物在人体须经过胃（pH 为1．2左右）和肠道（pH 为7．4左右），因此pH 值也是应该考察的重要因素。厚朴酚在pH 为5和9的HBSS 中，在72h 后其含量显著降低，其原因
+－
可能是溶液中的H 和OH 没有达到平衡，从而使
图2厚朴酚在37℃、不同pH 值HBSS 中的溶解性和稳定性的变化
The changes of magnolol in solubility and stability in
Figure 2
the different pH of HBSS at 37
℃
180c /(μm o ·L )
1206002
4
[**************]
t /h
20℃
4℃37℃
图3
-1
pH 7．4HBSS 中的溶解性和稳定厚朴酚在不同温度、性的变化
The changes of magnolol in solubility and stability in
Figure 3
厚朴酚发生水解反应和氧化反应的结果。由于大部分药物在处理、储存、运输中都会与光接触，因此光照也是应该考察的主要因素。本实验结果表明，光照对厚朴酚的稳定性没有影响。
HBSS with pH =7．4at different
temperatures
180c /(μm o ·L )
-1
1206002
4
8
12t /h18
2472168
避光
光照
参考文献：
［1］罗凤平．厚朴酚及其衍生物的合成、结构与性质的研究
［D ］．无锡：江南大学，2008．
［2］PYO M K ，LEE Y ，YUN Choi ，et al．Anti-platelet effect of
the constituents isolated from the barks and fruits of Magnolia obovata ［J ］．Arch Pharm Res ，2002，25（3）：325－328．
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［4］李莉．丹参脂溶性成分吸收机理研究［D ］．成都：四川大
2004．学，
图4光照对厚朴酚在HBSS 中的稳定性的影响
The influence of light on stability of magnolol in HBSS
Figure 4
4
4．1
讨论
在药物的吸收和药动学研究中，对于难溶性或
者稳定性差的化合物，可以采用β-环糊精包合技术和固体分散体等新技术来提高药物在体内的溶解性
（责任编辑：陈翔）