端粒酶活性对SGC7901胃癌细胞活性的影响
【摘要】 目的 探讨端粒酶活性对sgc7901胃癌细胞活力的影响。方法 sgc7901细胞分组培养，其中对照组不施加处理因素，其余各组给予端粒酶抑制剂叠氮脱氧胸苷（azt）即azt-4、azt-8及azt-16组，分别给予azt 4、8及16 mmol/l，24、48及72 h后以甲基噻唑基四唑（mtt）法检测各组细胞活力，根据mtt实验结果检测azt抑制sgc7901细胞活力最明显时各组细胞端粒酶活性。结果 azt可抑制sgc7901细胞活力，呈时间依赖性及剂量依赖性。72 h后azt-4、azt-8及azt-16组端粒酶活性下调率分别为（28.1±4.3）%、（45.4±3.6）%、（63.7±5.1）%，呈明显的剂量依赖性。结论 端粒酶活性增强是sgc7901胃癌细胞永生化的重要机制之一。
【关键词】 端粒酶；sgc7901胃癌细胞；细胞活力
胃癌严重威胁着人类的健康，但发病机制不清，仍无有效治疗手段。端粒-端粒酶体系在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，端粒酶的激活导致了端粒的延长，而端粒的延长则促进了肿瘤的永生化，但仍有10%的肿瘤细胞端粒酶无活性增高表现[1]。叠氮脱氧胸苷（3-azido-deoxythymidine，azt）可抑制端粒酶活性，进而阻止端粒的延长，从而抑制肿瘤的永生化。因此，本实验拟利用azt探讨端粒酶活性对胃癌细胞株sgc7901存活率的影响，探讨端粒-端粒酶体系在sgc7901细胞增殖分化中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料及仪器 sgc7901胃癌细胞株（中科院上海细胞库），dmem高糖培养基及胎牛血清（gibco公司），azt（sigma公司），甲基噻唑基四唑（mtt，南京建成生物工程研究所），trap-elisa端粒酶活性试剂盒（roche公司），酶标仪（北京普郎克公司）。
1.2 实验分组 sgc7901细胞株以1×104/孔的密度铺于96孔板，细胞贴壁后分组培养，对照组（mdem培养基+10%胎牛血清），azt-4、azt-8及azt-16组分别添加azt 4、8及16 mmol/l，通过mtt实验确定azt抑制sgc7901细胞增殖的最佳浓度及时间，再利用trap-elisa法检测该条件下azt对sgc7901细胞端粒酶活性的影响。
1.3 mtt法检测sgc7901细胞存活率 分组培养24 h、48 h及72 h后，以无血清培养基继续培养4 h，每孔分别加入20 μl mtt（5 mg/ml），孵育4 h后弃去培养液，加入150 μl二甲基亚砜振荡15 min，以酶标仪检测吸光度（a值），根据公式计算细胞活力：检测组a值/对照组a值×100%。
1.4 trap-elisa法检测端粒酶活性 根据mtt实验结果，检测最佳抑制时间各组sgc7901细胞端粒酶活性。收集细胞，根据试剂盒说明建立pcr反应体系，以ct值（cycle threshold）判断端粒酶活性值，ct值小表示模板数大，端粒酶活性高，根据公式计算端粒酶活性下调率=（实验组平均ct值-对照组平均ct值）/对照组平均ct值×100%。
2 结果
2.1 azt对sgc7901细胞活力的影响
mtt实验显示，azt可抑制sgc7901细胞活力，具有明显的时间依赖性及剂量依赖性，其中azt作用72 h对sgc7901细胞存活率影响最为显著，因此本研究检测了72 h后各组细胞端粒酶活性（表1）。
2.2 azt对sgc7901端粒酶活性的影响
trap-elisa法检测显示，azt浓度越高，sgc7901细胞端粒酶活性越低（表2）。 3 讨论
端粒-端粒酶体系与肿瘤的增殖关系密切，该体系的激活具有促进肿瘤细胞增殖的作用。端粒是位于真核细胞染色体末端的核酸-蛋白复合体，可防止染色体dna降解、缺失、末端融合以及非常规重组等，具有维持染色体结构和功能的完整性及稳定性等作用，与肿瘤的发生及凋亡密切相关[2]。端粒酶是一种核酸蛋白酶，属逆转录酶，能以自身的rna为模板合成端
粒dna序列，使端粒延长，是维持端粒稳定的重要因素。端粒酶激活、端粒延长与肿瘤的发生关系密切，端粒酶活性高的肿瘤细胞易发生耐药性[3]，抑制端粒-端粒酶活性已成为抑制肿瘤增殖的研究的热点。
azt是逆转录酶抑制剂，可与端粒酶这一逆转录酶结合，抑制端粒酶活性。本研究显示，不同浓度azt均可抑制sgc7901细胞端粒酶活性，并明显抑制肿瘤细胞增殖，且azt浓度越高，端粒酶活性越低，细胞存活率越低，提示端粒酶-端粒体系的活化是sgc7901细胞增殖的重要机制之一。尽管目前针对端粒酶的抑癌治疗策略尚不完善，对机体的毒副作用尚不完全清楚，尚难用于临床治疗。但随着对端粒-端粒酶在胃癌发病中研究的深入，端粒-端粒酶体系有望成为胃癌治疗新的突破口。