大豆小分子肽抗氧化效应的初步研究

・196・中华医学研究杂志 Journal of Chinese Medicine Research 2007年第7卷第3期

・论 著・

大豆小分子肽抗氧化效应的初步研究

郭 红, 李茂辉, 阎 萍, 高淑杰, 卢桂华

【摘要】 目的

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1

1

2

3

３

通过动物实验来初步探讨大豆小分子肽(分子量300～700Da) 的抗氧化作用。方法采用昆明种小

鼠, 实验组小鼠分低、中、高[3. 0g /(kg ・d) 、6. 0g/(kg ・d) 、9. 0g /(kg ・d ) ]三个剂量组灌胃大豆小分子肽25天, 测定小鼠耐缺氧能力的影响。老年雄性Wistar 大鼠20只, 随机分为老年对照组10只, 老年实验组10只, 老年实验组灌服大豆小分子肽, 按6. 0g /(kg ・d) 剂量, 老年对照组灌服同体积的生理盐水。第60天末取样测定血红细胞和肝脏中丙二醛含量和超氧化物歧化酶(superoxide dimutase, SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH -Px) 活性。结果 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组(生理盐水组) 相比(小白鼠死亡只数) , 耐低压缺氧能力增强, 老年实验组与老年对照组比较, 血红细胞SOD 酶活性升高(P 0. 05) 。血红细胞与肝脏组织丙二醛含量有减低趋势, 但无统计学意义(P >0. 05) ; GSH -Px 酶活性升高(P

【关键词】 大豆小分子肽; 抗氧化; 耐缺氧能力; SOD 丙二醛; GSH -Px

【中图分类号】 R -33 【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2007) 03-0196-03

Pr eliminary study on anti -oxidative capability of soybean minor peptides

GUO Hong, LI Ma o -hui, Y A N Ping, et a l. Dep of P rev entive Medicine, Shenyang Medica l College, Shenya ng 110034, China 【Abstr act 】 Objective To study and discuss the anti -oxidation effects and the antiaging effect of soybean minor peptides(MW300-700Da) in old rats. Methods Soybean minor peptides was administered to mice in treated group for 25days by 3. 0g/kg /d, 6. 0g /kg /d, 9. 0g /kg/drespectively, and the changes of the bear anoxi ２a ability were measured. Twenty Wister old rats were randomly divided into 2groups:old control group and tes ２ting old group with 10rats in each group. Testing old group were perfused with soybean minor peptides6. 0g/(kg ・d) for 60days. The rats old control group were fed with water in the same volume. At the end of the 60th days. biochemical index were measured:the activities of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase (GSH —Px) and the concentration of malondialdehyde(MDA) in Hb and liver. Results compared with control group, the bear anoxia ability of the administered mice in treated group were longer , Compared with those in the old control group. The activities of S0D in Hb were decreased(P 005) , and the concentrations of MDA in Hb and liver had also a increase tendency, but without any significant difference (P >0. 05). As compared with those in control the the activities of GSH —px had a increase tendency, (P

在20世纪4O 年代, 一些西方学者用酶法改性蛋白质来补充极其缺乏的动物蛋白质, 当时由于技术水平的限制, 大豆肽的研究无多大进展。到6O 年代末, 随着生物技术的进步和生命科学的发展, 生理活性肽的生理功能逐步被

３

人们发现, 并受到越来越多的重视, 尤其是一些活性肽的结构和生理功能逐渐明确, 推动了活性肽的研究, 也促进了大豆肽的研究与开发

[1]

。

大豆多肽是大豆蛋白质的水解产物, 能有效刺激甲状腺激素分泌, 促使胆固醇代谢生成胆汁酸。胆汁酸又被食物纤维所吸附, 排出体外从而阻碍对胆固醇的吸收, 起到降低胆固醇作用。我国于20世纪80年代中后期开始了大豆多肽的研究。目前在大豆多肽的研究与开发中存在的主要问题是大豆多肽与生理功能的关系[2]。大豆小分子肽的

基金项目:沈阳市自然基金项目(编号:1053125-1-39)

心

2110031辽宁沈阳, 沈阳体育学院运动生化教研室3110001辽宁沈阳, 辽宁省疾病预防控制中心

作者单位:1110034辽宁沈阳, 沈阳医学院预防医学系卫生检验中

中华医学研究杂志 Journal of Chinese Medicine Research 抗氧化以及抗衰老作用仅见体外实验报道, 而动物体内实验尚少见报道。本实验是用我们实验室自己研制的大豆小分子肽, 通过动物实验模型来探讨其抗氧化的作用, 为更好地开发大豆小分子肽提供初步的理论依据。1 材料与方法

1. 1 原料及处理 大豆小分子肽的生产工艺:脱脂大豆饼→水提取→豆乳→粗胰酶预酶解→酶解乳→中性蛋白酶水解→酶解液→分离→大豆多肽→脱色→脱盐超滤→大豆小分子多肽液经浓缩→喷雾干燥→大豆小分子肽粉→用去离子水配成透明溶液以备灌胃用。该工艺制成大豆小分子肽采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC) 测定:小分子多肽峰值分子量范围为300～700Da 之间。1. 2

实验动物 实验动物昆明种小白鼠由本学院实验动

物中心提供。Wistar 种老龄大白鼠由沈阳药检所提供。昆明种小白鼠80只, 雌雄各半, 体重(18±2) g, 按性别、体重随机分为1个对照组和3个试验组。分组后饲养观察3天, 剔除不合格个体后灌胃, 空白对照组灌胃适量生理盐水, 各实验组灌胃大豆小分子肽溶液, 剂量分别为每天3. 0g/kg 、6. 0g /kg、9. 0g/kg 。连续25天, 实验期间, 小鼠自由摄食及饮水

[3]

。取鼠龄为20个月, 体重为(381. 75±39.

23) g, Wistar 老龄雄性大白鼠20只, 按体重随机分为1个对照组和1个实验组。分组后饲养观察3天后灌胃, 对照组灌胃生理盐水5ml /d, 试验组灌胃大豆小分子肽溶液6. 0g/(kg ・d) 。饲养60天, 实验期间, 大鼠自由摄食及饮水[4]。1. 3

低压缺氧状态的影响组

小鼠连续给样第25天后,

于末次给样后2h 将小白鼠放入减压至负压80mmHg, 持续时间为5min, 记录小白鼠死亡只数[5]。

1. 4 对大白鼠各组SOD 、GSH -Px 活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA) 含量的影响

[6]

大鼠连续给样60天后,

分别剪断股动脉, 血用肝素抗凝, 取肝脏用冰生理盐水冲洗, 滤纸吸干, 精确称重, 加入冰生理盐水, 玻璃匀浆器制成10%的组织匀浆, 离心后吸取上清液备用。按微量邻苯三酚快速测定红细胞, 肝脏的SOD 活性。而GSH -Px 活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA) 含量测定采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒。

1. 5 统计学处理 所有数据输入计算机, 用SPSS 10. 0For Windows 统计软件进行单因素方差分析, 统计处理数据用x 珋±s 表示。组间比较用t 检验, 显著性水平为P

2. 1 大豆小分子肽对低压缺氧的影响 大豆小分子肽实验组中的高剂量组与对照组(生理盐水组) 相比(小白鼠死亡只数) , 耐低压缺氧能力是否明显增强, 差异有显著性(P

2. 2 大豆小分子肽对老年大白鼠SOD 活性的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比, 实验组的红细胞(Hb) SOD 活性显著增加(P 0. 05) 。见表2。

2007年第7卷第3期・197・

表1 大豆小分子肽对低压缺氧的影响

灌胃液

动物数剂量观察时间动物死亡[g/(kg ・d) ]

(min) (只) 生理盐水20适量517肽液203. 0516肽液206. 0515肽液20

9. 0

5

10

表2 大豆小分子肽对的红细胞(Hb) 肝脏的

SOD 活性影响 (U/mg)

SOD 活性(珋x ±s) 组别动物数

剂量[g /(kg ・d) ]

红细胞(Hb) 肝脏(湿重) 对照组10适量11. 33±2. 1411. 71±3. 19剂量组10

6. 0

16. 83±4. 12３

13. 02±2. 92

2. 3 大豆小分子肽对老年大白鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px) 活性的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比, 实验组的红细胞(Hb) GSH -Px 活性显著增加(P 0. 05) 。见表3。

表3 大豆小分子肽对的红细胞(Hb) 肝脏的

GSH -Px 活性影响 (U/mg)

GSH -Px 活性(x 珋±s) 组别动物数剂量[g /(kg ・d) ]

红细胞(Hb) 肝脏(湿重) 对照组10适量15. 98±3. 0818. 65±3. 81剂量组

10

6. 0

18. 91±3. 99３

19. 79±2. 94

2. 4 大豆小分子肽对老年大白鼠的血红细胞与肝脏组织中丙二醛含量的影响 大豆小分子肽实验组与对照组相比, 实验组的红细胞(Hb) 和肝脏中的MDA 含量虽有降低的趋势, 但两组没有统计学意义(P >0. 05) , 见表4。

表4 大豆小分子肽对的红细胞(Hb) 肝脏的丙

二醛含量影响 (μmol /L)

MDA 含量(x 珋±s) 组别动物数剂量[g /(kg ・d) ]

红细胞(Hb) 肝脏(湿重) 对照组10适量11. 74±3. 018. 79±3. 11剂量组

10

6. 0

10. 97±3. 45

9. 03±2. 65

3 讨论

目前一般认为, 机体的衰老与自由基有很大的关系。机体在正常代谢过程中可以产生多种活性氧, 如超氧阴离子(.

O

2-

) 、羟自由基(. OH) 、过氧化氢(H 2O 2) 等, 其中.

OH

与机体中的多不饱和脂肪酸(LH) 作用, 可以产生LPO 。LPO 的最终代谢产物, 如小分子的醛、酮等可以与生物大分子作用, 使其失去生理功能, 最终导致机体损伤。生物体

・198・中华医学研究杂志 Journal of Chinese Medicine Research 2007年第7卷第3期

内的抗氧化物酶, 如SOD 、GSH -Px 可以清除活性氧, 对生物体起保护作用, 因此SOD 、GSH —Px 活性大小, LPO 浓度的高低可反映出机体被氧化损伤的程度[7]。

丙二醛(MDA) 是脂质过氧化(脂褐素) LPO 代谢物, 其含量高低可反映体内自由基的反应程度, 脂质过氧化物可引起细胞代谢及功能障碍甚至死亡, 故丙二醛(MDA) 的含量常可间接反映出机体受自由基攻击程度

[8]

时为功能性食品的开发, 提供了强大的物质基础。在实现经济和社会效益同时, 又拉动了大豆种植业, 激活了大豆初加工工业, 也会促进交通运输、水、电、煤等基础产业的发展。

【参考文献】

1 蔡木易. 大豆肽的国外开发现状. 中国食品报, 2004, (3) :18. 2 赵芳芳, 张日俊. 大豆肽的研究进展. 中国饲料, 2004, (1) :22-24.

3 李茂辉, 金山, 孟玉玲. 东北油松花粉酶法提取液抗疲劳作用的

实验. 中国公共卫生, 2002, (5) :610.

4 李茂辉, 叶丽杰, 卢桂华, 等. 心肌多肽抗疲劳效应的实验研究.

现代预防医学, 2006, 33(7) :1097-1099.

5 Gopalakrishnan J, Decker E A, Means W J. Antioxidant activity of

mechanically separated pork extracts. Meat Sci , 1999, 52:101-110.

6 陈勤. 抗衰老研究实验方法. 北京:中国医药科技出版社, 1996,

499-500.

7 凌智群, 谢笔钧. 莲房原花青素对氧自由基和脂质过氧化的作

用. 营养学报, 2002, 24(2) :121-125.

8 庞战军, 周玫, 陈瑗. 自由基医学研究方法. 北京:人民卫生出版

社, 2000, 118-120.

9 孙普存, 张建中, 段绍瑾. 自由基生物学导论, 合肥:中国科学技

术大学出版社, 1999, 19-92.

。

实验表明:大豆小分子肽可明显增加血红细胞(Hb ) SOD 、GSH —Px 活性, 而对肝组织中二酶的活性却不明显, 对MDA 含量的抑制作用亦不明显。

有关活性肽的抗氧化机制还不清楚, 可能是通过增加SOD 、GSH -Px 的活性, 加快体内自由基的清除, 从而抑制肝脏内过氧化脂质的二级分解产物MDA 的含量, 有利于保护细胞免受过氧化损伤, 对自由基有关的疾病有一定的防治作用。但具体是哪种物质对抗氧化起主要作用, 尚需进一步的研究[9]。

本实验大豆小分子肽只能增加血红细胞(Hb) SOD 、GSH —Px 活性, 而对肝组织的活性却不明显, 并对MDA 含量几乎没有抑制作用。仍需进一步实验研究来解释。 肽类功能性食品被国内外专家称为21世纪食品。功能性食品是高附加值产品, 关系到各年龄段人们的健康保健, 市场潜力巨大。东北地区又是大豆的主产区, 大豆小分子肽的开发可为食品工业提供了更为优质的食品辅料, 同

(收稿日期:2007-03-22) (编辑:守 中)

・临床医学・

AF 内固定治疗胸腰段脊椎骨折

刘贵成, 刘恩东, 唐志强, 张 威

【摘要】 目的 总结AF 内固定治疗胸腰段脊椎骨折的经验。方法 使用AF 系统内固定手术治疗胸腰段脊椎骨折34例。结果 平均随访16个月, 术后伤椎高度和Cobb 角均有满意的恢复。结论 AF 系统结构简单, 内固定治疗胸腰段脊椎骨折操作方便, 固定坚固, 疗效优良。 【关键词】 脊椎骨折; AF 内固定

【中图分类号】 R683. 2 【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2007) 03-0198-02 胸腰段是脊椎损伤的好发部位, 常伴有脊髓功能障碍。治疗胸腰段脊椎骨折的主要目的是恢复胸腰段脊椎的正常序列和椎管容积, 使受压脊髓得到充分减压, 并提供可靠的固定。短节段经椎弓根内固定系统治疗胸腰段脊椎骨折已在临床广泛开展。2000年1月～2005年1月, 我院应用AF 内固定治疗胸腰段脊椎骨折34例, 取得良好效果。1 资料与方法

1. 1 病例资料 本组34例, 男24例, 女10例。年龄20～57岁。致伤原因:坠落伤17例, 车祸伤12例, 压砸伤5例。骨折部位:T 101例, T 1214例, L 111例, L 26例, L 32例, 神经功能按Frankel 分级:A 级2例, B 级8例, C 级16例, D 级6例, E 级2例, 全部采用AF 内固定。受伤至手术时间

作者单位:150601黑龙江尚志, 尚志市人民医院

2～9天。

1. 2 影像学检查 全部病例均摄脊椎正侧位片, 并测量术前术后后突角和椎体前后缘压缩率。均行CT 检查, 以确定有无骨折块突入椎管, 脊髓受压程度, 并清楚显示有无椎弓根、关节突、椎板、棘突等骨折, 有无合并椎间盘破裂脱出等情况。

1. 3 手术方法 均采用持续硬膜外麻醉, 患者俯卧位, 以伤椎为中心取正中切口, 依次显露棘突、椎板、小关节突及横突, 在伤椎上下各一个椎体两侧钻入椎弓根螺钉, 采用

Weintein 等定位法[1]定位。4个进钉孔确定后, 置入克氏针C 臂X 线机透视, 证实进钉位置正确, 深度适中。分别扩孔, 拧入4枚AF 钉。依术前患者神经损伤情况, X 线, CT 扫描所显示的骨折类型、椎管狭窄程度、碎骨块移位状

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