实验2过氧化氢酶活性测定
实验2 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）
一、 实验目的
熟悉用滴定法测定过氧化氢酶活性。 二、 实验原理
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系；过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 = 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
三、实验器材 1材料：植物叶片
2仪器设备： 研钵； 酸式滴定管； 恒温水浴； 3试剂：10% H2SO4； 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；
0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml；
0.1mol/L H2O2市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml。 四、实验步骤
1、酶液提取：取植物叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml量筒中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至量筒中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 2、取50ml三角瓶2个（1个测定，另1个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
3、 用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为
终点。 五、实验结果
酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：
过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min）＝（A－B）×Vt×1.7/(W×Vs×t)
式中：A-对照KMnO4滴定ml数； B-酶反应后KMnO4滴定ml数； Vt-提取酶液总量（ml）； Vs-反应时所用酶液量（ml）； W-样品鲜重（g）； t-反应时间（min）；
1.71ml0.1mol/L KMnO4相当于1.7mg H2O2 六、实验思考
过氧化氢酶与哪些生化过程有关?