动物细胞染色体制备实验的改进_林颖

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文章编号:1000-2235(2002) 02-0228-02

J ou rnal of Fujian M edical University 　Vol. 36　No. 2　J un e, 2002

动物细胞染色体制备实验的改进

林　颖, 姜　芬

关键词:　蛙, 牛; 染色体; 标本制备

中图分类号:　R 394. 22　　　文献标识码:　B 　　动物细胞染色体的制备和观察是细胞生物学教学中的重要实验, 主要训练学生掌握制备动物细胞染色体的技术原理, 熟悉制备程序要点, 能够自己动手制备动物细胞染色体, 并对染色体进行形态观察、分析和计数。目前, 许多实验手册中都是用小白鼠骨髓细胞来制备动物细胞染色体。笔者根据本实验室的具体情况, 参考相关资料, 在实验材料和实验方法等方面进行改进, 报告如下。1　材料和方法

1. 1　材料　牛蛙(市场购买) , 淀粉肉汤(牛肉膏0. 3g , 蛋白

胨1. 0g , Na Cl 0. 5g , 蒸馏水100ml , 可溶性淀粉6. 0g , 煮沸灭菌, 置4℃冰箱保存, 用时水浴融化) , 秋水仙素, 固定液(甲醇∶冰醋酸(V /V) =3∶1) 。1. 2　方法

1. 2. 1　预处理　实验前牛蛙腹腔注射淀粉肉汤1ml, 或在背部剪去1cm ×1cm 皮肤, 或将蛙脚趾剪去3～5mm 。处死前3～4h 腹腔注射秋水仙素4μg /g(体重) 。

1. 2. 2　收集细胞　用脊髓穿刺法将蛙处死, 取股骨, 剪掉两端股骨头, 用针筒吸取0. 075mo l /LK Cl 低渗溶液1. 5ml, 冲洗股骨, 将骨髓洗出, 于高速离心管中将骨髓用吸管吹打制成骨髓细胞悬液。

1. 2. 3　低渗　置37℃水浴中低渗处理20min [1]。

1. 2. 4　固定和离心　加固定液0. 1ml, 混匀, 盖紧管盖, 置高速台式离心机中以7000r /min离心30s, 弃上清, 向沉淀加入固定液1ml , 用吸管吹打混匀, 静置10min , 重复离心一次[2]。

1. 2. 5　制片　吸去上清, 加固定液约0. 5ml, 吸管吹打混匀, 常规滴片, 烤片, Giemsa 染色。2　结　果

显微镜下, 可以清晰地见到被染成蓝色的牛蛙间期细胞核以及分散在它们之间的许多中期分裂相。中期分裂相可见染色体被染成蓝色, 呈X 形, 染色体总数(共2n =26) , 染色体较长, 较大, 分散程度较佳(附图) 。

3　讨　论

以往动物细胞染色体制备实验通常用小白鼠骨髓细胞制备染色体, 由于小白鼠骨髓细胞染色体数目多(2n =40) , 且染色体呈U 形, 形态小, 不易进行形态观察和计数。现改用牛蛙作为实验材料, 牛蛙骨髓细胞染色体数目较少(2n=26) , 且染色体呈X 形, 形态较长, 较大, 易于进行形态观察和计数。牛蛙可随时从市场上购买, 材料易得, 且骨髓量较多, 实验成功率高。在实验过程中也尝试使用野生蟾蜍作为实验材料, 由于蟾蜍染色体组较小(2n=22) , 染色体形态与牛蛙染色体相近, 也能获得与牛蛙染色体相同的实验效果, 但野生蟾蜍受季节影响不易获得, 且无法从市场购得, 故将牛蛙作为最佳实验材料。

实验前通过对牛蛙腹腔注射淀粉肉汤或对背部皮肤或脚趾进行损伤, 以刺激牛蛙的免疫系统, 使白细胞数量增加, 提高骨髓细胞分裂相, 相应的中期细胞分裂相也增多。该方法简便易行, 效果明显, 有助于学生在显微镜下寻找和观察分裂相及计数。

以往进行细胞离心时多采用低速离心机离心, 每次离心用时需5～10min, 现改用高速离心机离心, 只需30s, 大大缩短时间, 提高实验效率, 可以避免由于学生人数增加, 上课时间缩短, 对实验效果造成的不良影响。

通过以上对实验材料、方法的改进, 有效地改善了动物

收稿日期:2002-01-10　　　修回日期:2002-03-28

作者单位:福建医科大学细胞生物学与遗传学系, 福州　350004

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附图　牛蛙染色体中期分裂相(×1000)

细胞染色体制备和观察实验。已在实际教学中推广应用, 取。

福建医科大学学报　2002年6月　第36卷　第2期

医科大学出版社, 1997. 38～39.

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参考文献:

[1]　蒋伟宏, 林　炜. 细胞与分子生物学实验指导[M].上海:上海

[2]　倪　岚, 余从年. 人类染色体标本制备改进[J ].生物学通报,

2000, 35(2):33.

文章编号:1000-2235(2002) 02-0229-01

富含脂肪组织标本制片方法的改进

高美钦, 袁芳平, 万　榕

关键词:　脂肪组织; 石蜡包埋

中图分类号:　R 361. 2　　　文献标识码:　B 　　在病理制片过程中, 发现富含脂肪组织的标本按常规的脱水程序处理所制取的包埋块, 切片不顺利, 经常出现破碎、挤压或切片不完整等现象, 甚至经脱脂处理的标本切片仍出现上述问题。因此, 笔者对这类标本的制片方法进行摸索与改进, 使这类组织切片的质量得以提高, 介绍如下。1　材料与方法

1. 1　材料　10%福尔马林液固定的脂肪瘤组织标本8例, 每例取材6块, 大小为2. 5cm ×2cm ×0. 3cm, 并分为6组。德国莱卡T P 1020型全自动脱水机。1. 2　方法

1. 2. 1　组织按常规方法脱水透明。

1. 2. 2　石蜡(熔点为56～58℃) 60℃1h ×3。

1. 2. 3　组织从脱水机取出, 将其中1组的组织常规包埋, 其他5组的组织块移到60℃恒温箱中的浸蜡杯内继续浸蜡, 其时间分别为2, 4, 6, 8, 9h 。

1. 2. 4　按浸蜡时间顺序先后进行常规石蜡包埋、切片、HE

染色。2　结　果

继续浸蜡时间为9h 的实验组脂肪瘤组织石蜡浸透彻底, 包埋块硬度适中, 切割性能良好, 切片平整, 不易破碎。镜下组织结构完整, 脂肪细胞框架清晰, 无细胞塌陷和重叠现象(附图) 。其他组的组织随着浸蜡时间的缩短石蜡浸透的效果就越差, 切片质量也越差。与常规标本浸透时间相同的实验组组织切片困难。3　讨　论

脂肪组织在常规的脱水程序处理过程中, 脂肪不容易被脱水剂完全溶解, 影响了石蜡的浸透速度, 以常规的浸蜡时

参考文献:

收稿日期:2002-03-08　　　修回日期:2002-04-16作者单位:福建医科大学病理学系, 福州　350004

:() , , [1]　李　筠, 楼　瑛. 介绍一种富含脂肪组织标本的制片方法[J ].

临床与实验病理学杂志, 1999, 6(1):51.

附图　脂肪瘤组织　HE 　×200

间, 不足以使脂肪组织完全被浸透, 石蜡起不到支撑组织的作用, 造成切片困难。因此, 在传统的脂肪组织制片过程中常用丙酮脱脂, 然后进行常规脱水、包埋等处理。但笔者在实践中发现丙酮脱脂存在着以下缺点:组织经丙酮脱脂时间太长, 产生明显的收缩, 甚至变脆, 影响切片质量, 进而影响组织结构的观察; 脱脂时间太短, 脱脂不彻底, 造成切片困难。有报道以汽油代替二甲苯使用, 具有脱脂与溶蜡的双重作用[1], 但汽油是一种易挥发易燃气体, 存在一定的实验室安全隐患, 此外, 脂肪组织需另行处理, 比较麻烦、费时。

本方法主要是通过延长组织的浸蜡时间, 使脂肪组织得以充分的浸透, 明显地改善了脂肪组织包埋块的切割性能。在方法上有以下优点:(1) 可以省去脱脂的步骤; (2) 可以同其他标本一起按常规脱水程序同时脱水; (3) 组织浸透充分, 容易切片; (4) 方法简便, 效果满意, 值得推广应用。本方法尤其适用于脂肪瘤标本, 也适用于富含脂肪的组织标本如乳腺等; 或因丙酮等脱脂时间不足造成切片因难时也可通过延长浸蜡时间来补救。