抗细胞膜DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断价值及与其他抗体联合检测的意义
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抗细胞膜DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断价值及与其他抗体联合检测的意义
魏华
吕志勤茹晋丽
李小峰许珂温鸿雁
【摘要】目的探讨抗细胞膜DNA(mDNA)抗体在系统性红斑狼疮(SLE)患者的表达以及该特异
性抗体对SLE患者的诊断价值及与其他抗体联合检测的意义。方法用间接免疫荧光法观察培养的
HL60细胞的特异性细胞膜的荧光图形,以细胞周连续的环状荧光为抗mDNA抗体阳性。同时检测SLE的其他常见抗体,采用pearsonr检验进行统计学处理。结果抗mDNA抗体在205例SLE患者中有145例阳性,阳性率70.7%,在55例类风湿关节炎(RA)患者中5例阳性,阳性率为9.1%,45例原发性干燥综
合征(pSS)患者中10例阳性,阳性率为22.2%,35例皮肌炎/多肌炎(PM/DM)患者中4例阳性,阳性率14.3%,50名健康对照组中均为阴性。抗mDNA抗体对SLE诊断的敏感性为70.7%,特异性为86.7%。抗
mDNA抗体阳性+抗核抗体(ANA)阳性联合检测的敏感性94.6%,特异性76.7%;抗mDNA抗体阳性+抗双链DNA(dsDNA)抗体阳性联合检测的敏感性76.8%,特异性95.5%;抗mDNA抗体阳性+抗Sm抗体阳性联合检测的敏感性79.6%,特异性100%;抗mDNA抗体阳性+抗核小体抗体(AnuA)阳性联合检测的敏感性93.0%,特异性100%。结论抗mDNA抗体是一种诊断SLE的新的标记抗体,其敏感性较高,特异
性强。较抗dsDNA抗体、抗Sm抗体检测更先进。与SLE常用其他抗体联合检测可进一步提高敏感性和
特异性。
【关键词】红斑狼疮,系统性;自身抗体;抗体,抗核
ThedetectionofDNA-associatedautoantibodiestoeelltoantibodiesinthediagnosisof
membraneanditscombinationwithother
an-
WElHua,LUZhi-qin,RUj访-li,LI
Xiao币ng。XUKe,WENHong--yan.DepartmentofRheumatologyandImmunology.theSecondAffiliatedHospitalofShaxiMedicalUniversity,Taiyuan03000l,China
systemiclupuserythematosm
【Abstract】objective
Toevaluatethediagnosticvalueof
autoantibodies
to
cellmembraneassociated
诵thDNA(mDNA)insystemiclupuserythematosus(SLE)andtIlecombinationwithotherautoantibodiesinthediagnosisofSLE.MetllodTheanti—mDNAantibodyhadthecharacteristicpatternofperip—heralmem—
brahefluorescence
on
cultured
test
HL60.The
sanle
semmsamples
weredetected
forother
was
antibo—diesofSLE.
Pearson’SChi-squareaertlmsamplesofSLE
w船usedforstatisticalanalysis.Results
This
pattern
observedin145of205
patients.butin5of55theserumsamplesofrheumatoidarthritis。in10of45primary
sjijgrensyndrome’spatientsandin4of35PM/DMandabsentin50blooddonors.Thesensitivityandspec击cityofanti-roDNAantibodytoSLEwas70.7%and86.7%.Thesensitivityandspecificityofcombined
anti—mDNAantibodyandANA
w髂94.6%and
antibodyandanti-dsDNAantibodywas
mDNAantibodyandanti—SmantibodyWaS79.6%and
mDNAantibodyandAnuA
can
76.7%.Thesensitivityandspecificityofcombinedanti-mDNA
76.8%and95.5%.Thesensitivityandspecificityofcombinedanti—
100%jThesensitivityandspecificityof
combined
better
anti—
wastest
93.O%and100%.Conclusion
forSLEpatients.Due
to
This
novelrapidimmunofluorescencemethod
than
be
a
usefuldiagnostic
itshigh
sensitivity
and
specificity.itis
otherdiagnostictestssuch
a8
anti-dsDNA
antibodyandanti-Smantibodyforthediagnosisof
SU£.
【Keywords】Lupuserythematosus,systemic;Autoantibodies;Antibodies,antinuclear
系统性红斑狼疮(systemic
lupus
erythematosus.SLE)是一些B淋巴细胞、单核细胞和人白细胞的细胞膜上有表达,被称为抗细胞膜DNA(mDNA)抗体,且在SLE患者中阳性率高,特异性强It-21。1资料与方法1.1临床资料
1.1.1病例组:来自山西医科大学第二医院风湿免疫科血清库中2:905年1月至2006年lO月门诊及住院SLE患者205
种多因素参与的特异性自身免疫病,突出表现为多种自身抗体,可通过免疫复合物等途经。造成几乎周身每一系统、每一器官都町能受累。近年来文献报道一些DNA相关抗体在一
DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-7480.2010.03.012
作者单位:030001太原.山西医科大学第二医院风湿免疫科
(第一作者现在江苏苏北人民医院血液风湿科)
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例,男性22例,女性183例,年龄15~5l岁,平均(27+24)岁,病程0.3.10年。均符合1982年美国风湿病学会修订的SLE的分类诊断标准。
1.1.2对照组:来自同一血清库同期患者150例,包括原发干燥综合征(pSS)45例,类风湿关节炎(RA)55例:皮肌炎,
多肌炎(PM/DM)35例,其他结缔组织病(CTD)15例。男性
25例,女性125例,年龄20~50岁,平均30岁,病程1.16年。
以上病例均符合目前公认的国际诊断标准。
1.1.3健康对照组:50名健康志愿者来自山西医科大学第二医院健康医护工作者。
1.2抗mDNA抗体的实验方法及步骤12t
1.2.1
HL60细胞株:HL60细胞株培养是在37℃,5%CO,孵
箱条件,RPMI1640培养基中含lo%1Jn热灭活的胎牛血清,
2
mmol/L谷酰胺和40mg/ml庆大霉素,由离心收集并用于实验。
1.2.2
HL60细胞株的间接免疫荧光:HL60细胞用Hanks液
洗涤2次,以0.5x10Vml重新悬浮,随后在分隔的玻片上点成20恤l的点,37℃下干燥。室温下甲醛固定3min,用磷酸盐缓冲液(PBS)(10mmol/L,pH7.4)洗涤1次,然后与山羊
b;G(欧蒙,6斗i,孔,20—PBS)孵化。避免非特异性血清的
IgG或荧光结合的IgG与之结合。HL60细胞用PBS洗,用PBS—Tween20(20“Ⅳ孔)分别稀释患者和对照血清。加入后室温下25min。用PBS洗1次,使用前整数倍血清稀释样本56℃加热30min灭活PBS洗后.加入荧光结合的山羊抗
I蜘后30lIIin用PBS洗2次,用偶氮蓝对比染色,玻片用甘油/PBS(2:1),pH9.0封固。在荧光显微镜下观察(40x10倍)。
1.2.3细胞膜荧光染色阳性结果判断:见图1。3。1.3其他抗体的检测方法
抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体采用间接免疫荧光法检测,抗Sm抗体采用免疫印迹法检测;抗核小体抗
体(AnuA)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测。
1.4统计学处理
采用SPSS
l
I.0统计软件进行统计学处理,率的比较采用Pearsonr检验;P<O.05为差异有统计学意义。2结
果
2.1抗mDNA抗体在SLE,RA,pSS,DM/PM及其他CTD中
的阳性结果分析:HL60细胞的免疫荧光:患者和对照血清在甲醇同定的HL60细胞上产生3种不同的免疫荧光图形。细胞膜膜免疫荧光图形分为:无荧光;不连续膜荧光;细胞周连
续的环状荧光。比较3种不同的免疫荧光图形在不同人群的
阳性率。
将检测结果为细胞周连续的环状荧光作为阳性,不连续膜荧光及无荧光作为阴性,计算抗mDNA抗体在SLE,RA,pSS,DM/PM及其他CTD中的阳性率分别为:SLE阳性率70.8%,pss阳性率22.2%,RA阳性率9.1%,PM/DM阳性率14.3%,其他CTD及健康对照均为0。SLE与pSS,RA,PM/DM及其他CTD的阳性率差异有统计学意义(P均<o.05),见表I。2.2抗mDNA抗体在SLE的敏感性、特异性、阳性预测值及
表1
SLERApSSDM/PM及其他CTD中
抗mDNA抗体的结果分析
阴性预测值:205例SLE中抗mDNA阳性145例,阴性60
例;150例对照组中抗mDNA阳性19例,阴性131例。其中敏感性70.7%,特异性86.7%,阳性预测值87.9%,阴性预测值
68.4%。
2.3抗mDNA抗体与SLE其他抗体联合检测的敏感性和特
异性的比较:将205例SLE患者血清抗mDNA抗体阳性及ANA阳性、抗dsDNA抗体阳性、抗Sm抗体阳性、AnuA阳性
联合计算敏感性、特异性。抗mDNA抗体+ANA(94.6%)、抗
mDNA抗体+AnuA(93.O%)与抗mDNA抗体的敏感性比较差异有统计学意义(P均<O.05)。特异性:抗mDNA抗体+抗dsDNA抗体(95.5%)、抗mDNA抗体+抗Sm抗体(100%)、抗mDNA抗体+AnuA(100%)与抗mDNA抗体的特异性比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。3讨
论
近年来发现某些DNA相关抗体在一些B淋巴细胞、单核细胞和人白细胞的细胞膜上有表达。一些证据表明这些DNA相关抗体可以与细胞膜上一个相对分子质量为30
000
的蛋白质受体结合㈣。起初人们用人B淋巴细胞实验发现了
2种特异的荧光图形,并发现这种抗mDNA抗体在SLE患者中敏感性高,特异性强阁。进一步的实验将SLE患者的强阳性
(细胞膜连续的环状强荧光)血清样本纯化,用DNase酶处理后可使细胞膜连续的环状荧光消失,但是用RNase酶或蛋白酶处理后却不能使细胞膜连续的环状荧光消失。说明这种细胞膜的荧光图形来源于DNAl6]。抗mDNA自身抗体在绝大多数SLE患者中呈阳性(细胞膜连续的环状强荧光),而在健康
对照和其他CTD患者中阳性率显著低于SLE患者。
本文结果表明,抗mDNA抗体的HL60细胞膜免疫荧光
对SLE的特异性是86.7%,敏感性是70.7%,这比文献f51报道
的Wil2细胞膜免疫荧光对SLE的特异性(99.5%)略低,而敏感性(60.5%)高出很多。这可能与选用不同的细胞株和不同人种的差异有关。而国内陈海英等121的结果中敏感性74.7%,特异性96.4%,与本文结果相似,但由于其病例选择中对照组中强直性脊柱炎及RA病例较多,故其特异性较高。
目前已知,SLE的自身抗体中抗Sm抗体和抗dsDNA抗体等对SLE有很高的特异性,分别为99%和95%;但二者敏感性均较低。AnuA是以细胞凋亡过程中释放的核小体为靶
生堡匾望痘堂盘盍垫!Q生3旦箜!垒鲞箜3塑£丛n』丛鲤堂丛。丛g艘h垫!垒3丛!i生盟垒3
分子的自身抗体,对SLE诊断的敏感性和特异性分别为
229-233.
・187・
64.2%。74.1%和97.9%。98.8%。本文将抗mDNA抗体与ANA、
抗Sm抗体、抗dsDNA抗体及AnuA共同应用于SLE的诊断中,比较抗mDNA抗体与上述其他抗体联合检测对于SLE
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8
tohuman
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诊断的特异性与敏感性嗍,可以看到抗mDNA抗体与ANA、
AnuA联合检测可使SLE诊断的敏感性显著提高,达90%以上。抗mDNA抗体与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA联合检测特异性最高亦达95%以上。
本研究证明HL60早幼粒细胞表面有细胞膜DNA相关蛋白,SLE患者的特异抗体可以与其结合。陈海英等12}证实细胞膜DNA在人的B细胞、T细胞均有表达,在aaji细胞株表达较好。用DNA没预处理的细胞涂片,再行检测后膜荧光图形消失,而用RNA酶、胰酶预处理后图形不消失,证实其为膜DNA抗原。本文采用培养较为容易、价格也较便宜的HIf)0早幼粒细胞进行mDNA抗体检测,可得到与陈海英等121相似的结果。同时也建立了一种诊断SLE的新方法。这种实验方法简便易行。敏感性较高,特异性强,可能与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA一样,成为SLE的一种标记性抗体。抗mDNA抗体与ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA联合检测可提高SLE诊断的敏感性、特异性。
(本文图1.3见插页第3-2页)参考文献
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(本文编辑:董海原)
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本刊编辑部
硫氧还蛋白5在类风湿关节炎患者滑膜组织
滑液及血液中表达的研究
(E文见第173页
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抗细胞膜DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断价值
及与其他抗体联合检测的意义
(m文霓第1好页)
C57黑鼠骨关节炎模型的关节病理积分与血清及滑膜中
基质金属蛋白酶一3白细胞介素一1水平的相关性研究
(正文见第195页)
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