第11章 动物细胞培养所需要的基本条件 (1)
动物细胞工程
动物细胞工程(animal cell engineering)
对动物的细胞、组织或器官进行培养、细胞融合、
细胞重组、遗传物质转移和生殖工程等,从细胞水平
改变动物细胞的遗传特性,用于生产特定生物制品、 培育动物新品种。
动物细胞培养和反应器、细胞融合和单克隆抗体、
干细胞和组织工程…
动物细胞工程发展历史:
1907:组织培养的鼻祖——蛙胚神经培养(R. Harrison ) 1940:首次进行了单个细胞的克隆培养(W. Earle ) 1965:首次用灭活的仙台病毒实现种间杂交(Okada ) 1972:脐带血干细胞治疗白血病
1976:建立杂交瘤培养(Kohler 和Milstein ) 1986:Demo Biotech 用杂交瘤细胞生产单抗 1997:克隆羊Dolly 诞生(Roslin 研究所) 1998:建立人胚胎干细胞系(Thomson )
第十一章 动物细胞培养所需要的基本条件
◆动物细胞培养基的组成和制备
◆影响动物细胞培养的环境条件
动物细胞 特点;
无细胞壁
倍增时间长,生长缓慢需氧量少,对搅拌敏感聚集体形成
原代细胞培养50代即开始退化
动物细胞培养定义
动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织,模拟体内的生理环境,在无菌、适温和丰富的营养条件下,使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。
是动物细胞工程的基础。
动物细胞培养
营养要求
基础培养基:碳源、氮源、维生素、微量元素,
等渗溶液、缓冲pH
Eagle 、F 10、RPMI1640、Fischer ‘s等
血清:5-20%
、抗生素、 辅助因子:贴壁因子(纤黏素、明胶等)
生长因子(EGF 、NGF 等)
开发无血清培养基是动物细胞工程的重要内容
11.1 动物细胞培养基的组成和制备
●水和平衡盐溶液
●天然培养基
●合成培养基
●无血清培养基
一、水和平衡盐溶液
水:三蒸水或超纯水
平衡盐溶液:在生理盐水基础上发展起来的,用来洗涤组织细胞以及配制溶液。
如:Hanks 液,PBS 缓冲液
二、天然培养基
:血浆去处纤维蛋白1、血清(serum )
原所得,使用最多。包括胎牛血清、小
牛血清、新生犊牛血清、马血清、兔血
清、羊血清、人血清等。使用前灭活。
2、胚胎提取液:如鸡胚和牛胚提取液
3、水解乳白蛋白:含丰富的氨基酸
4、鼠尾胶原:促进组织和细胞的附着。
三、合成培养基
组成:氨基酸、维生素、无机离子、碳源、其他。
配制方法:
如RPMI-1640(2g Hepes, 2g NaHCO 3)
四、无血清培养基
血清:
1. 激素和生长因子
2. 结合蛋白
3. 贴壁因子和铺展因子4. 微量元素和低分子量营养因子5. 酶抑制剂
11.2 影响动物细胞培养的环境条件
●温度:37℃
● pH :7.2-7.4
●溶解氧和二氧化碳
●渗透势