流式细胞检测服务之细胞周期
03-12
流式细胞仪分析DNA（细胞周期）
通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M/%，借此可以了解细胞的增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 正常细胞具有较恒定的DNA含量，而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来，这一指数对于肿瘤的早期诊断，交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。
细胞周期操作步骤：
1. 收获细胞于流式管中，加入3-4ml的PBS清洗细胞。
2. 1000rpm离心10分钟，弃上清。
3. 逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇，涡旋混匀细胞，4°C避光过夜（>18小时）。
4. 1000-1500rpm 离心细胞10分钟，弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。 注：第一次用1x PBS，第二次用染色液（货号：554656）。
5. 细胞染色：每管样本需10^6细胞。具体操作如下：
1) 对于PI/RNase 染色，将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase 染色液（货号：550825）。
2) 对于7-AAD染色，将细胞重悬于0.1 mL 染色液（货号：554656），同时加入20 μL7-AAD染色液（货号：559925）
6. 室温避光孵育15分钟。
7. 分析前4°C避光保存样本。1小时之内上流式细胞仪检测。
细胞周期检测所需产品：
使用说明：
DNA染料，尤其是PI，具有较强的粘性。样本上机检测之后，应遵照仪器说明书仔细清洗流式细胞仪，以免对下一位操作者结果造成影响。固定好的细胞可保存长达12个月(储存于70-80% 的乙醇，置于-20°C保存).