正交实验法优选芙蓉膏提取工艺
正交实验法优选芙蓉膏提取工艺
邾枝花,夏伦祝
1
2
(1.安徽中医学院,安徽合肥 230038;2.安徽中医学院第一附属医院药剂科,安徽合肥 230038)
摘要:目的 用正交实验法优选芙蓉膏提取工艺。方法 以槲皮素含量、新藤黄酸含量及浸膏得率为评价指标,选择乙醇浓度
(%)、加醇量(倍)、提取时间(h)和提取次数为考察因素,选用L9(34)正交试验确定芙蓉膏的提取工艺。结果 以A3B1C3D2即6倍量80%乙醇提取3h,共提2次为最佳工艺条件。结论 该法提取效率高,稳定性好。关键词:芙蓉膏;正交实验;槲皮素;新藤黄酸
Optimizationoffurongointment’sextractiontechnicsbyorthogonaldesign
ZHU Zhi2hua,XIALun2zhu
1
2
(1.AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Hefei 230038,China;2.TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Hefei 230038)
Abstract:Aim Tooptimizeextractiontechnicsoffurongointment.Methods Assessmentindexesarequercetin,neogambogicacidandextractionrateofextractum.Wechooseorthogonaldesigntooptimizetheextractiontechnics.Results Theoptimumextractiontech2nicsconditionsareasfollows:adding6foldsof80%ethanol,extractingtwicetimesand3hourseverytime.Conclusion Themethodhashighrateofextractionandgoodstability.
Keywords:furongointment;orthogonaldesign;quercetin;neogambogicacid
芙蓉膏是安徽中医学院第一附属医院名老中医的经验
方,30多年来临床用于治疗痈疽疖肿、外科疮疡[1]等,疗效显著。芙蓉膏中含芙蓉叶、生南星、藤黄等药材,以芙蓉叶、藤黄清热解毒为主,配生南星散结消肿止痛,伍冰片清热防腐止痛,加薄荷油、冬青油清热解毒凉血,共为佐使[2],能有效清热解毒、通经活络、活血化瘀、消肿定痛,托里排脓等。经过多年来的临床实践证明,芙蓉膏对外科疮疡具有确切的疗效,用途广泛,在我院一直享有盛誉,为广大医生和患者所乐于接受。
近年来对芙蓉叶和藤黄的化学成分研究表明,芙蓉叶中
β-谷甾醇、主要含芦丁(芸香苷)、氨基酸、鞣质以及烷烃、三
萜酸类等[3],芙蓉叶的有效组分提取和药效学筛选试验表明,总黄酮为有效部位之一,具有抗炎抗菌消肿等作用[4];藤黄中的主要化学成分和活性成分为藤黄酸和新藤黄酸[5]。本文以君药芙蓉叶中的芦丁水解物槲皮素和藤黄中的新藤黄酸为评价指标,利用L9(34)正交试验优选芙蓉膏的提取工艺条件,可为进一步提高芙蓉膏的药效及质量提供资料。1 仪器与材料
Waters600高效液相色谱仪,SymmetryC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,Waters2487双通道紫外检测器(美国Wa2ters公司);HHS22124B电热恒温水浴箱,上海医疗器械五厂;
AE240电子天平,瑞士梅特勒公司。
2.1.1 正交设计 槲皮素与新藤黄酸极性均较小,故设计用
不同浓度的乙醇来提取,因素水平见表1。
表1
水平
1
2因素水平表
乙醇浓度/%
6070因 素
加醇量/倍提取时间/h提取次数/次
681212称取芙蓉叶57g,藤黄15g,生南星19.5g,根据L9(34)正交表安排实验,提取液浓缩,移至200ml量瓶中,定容至刻度。
2.1.2 槲皮素含量的测定 精密吸取5ml浓缩液,加25%HCl80ml,水浴回流1h,再用石油醚萃取3次,每次30ml,弃
去石油醚层,水层用乙酸乙酯萃取3次,每次30ml,再蒸干乙酸乙酯,残渣用甲醇定容于5ml量瓶中,过0.45μm滤膜,即得供试品溶液。分别进样10μl,按外标两点法计算槲皮素含量。
2.1.3 新藤黄酸含量的测定 精密吸取5ml浓缩液,每次
用10ml氯仿萃取至氯仿层近无色(约5次),蒸干氯仿,残渣用甲醇定容于5ml量瓶中,过0.45μm滤膜,即得供试品溶液。分别进样10μl,按外标两点法计算新藤黄酸含量。
2.2 正交试验结果分析 对正交试验测得的数据分析见表2～3。
2.3 方差分析 将正交试验结果进行方差分析,结果见表4。以槲皮素为考察指标,由表2中极差R值大小显示,各因
芙蓉叶、藤黄、生南星,购自和义堂中药厂;槲皮素对照
品,购自中国食品药品生物制品检定所,批号10081-9905;新藤黄酸对照品,王效山教授监制[6],纯度经HPLC检测大于98%。2 方法与结果2.1 样品制备
素作用主次为A>D>C>B;由表3中方差分析结果表明:相对于B因素,A、C、D因素均有显著性意义,因此以A3B1C3D2
表2
因 素
试验号
1
2345678ABCD[***********][1**********]223正交试验设计表(n=3)
评 价指标
槲皮素含量新藤黄酸含量浸膏得率
0.2090.2760.2450.2880.3900.3790.5420.308-1
表4
误差来源
ABCDA
SS0.04690.0006990.01400.02100.6120.1370.5660.01045.0726.4217.925f[1**********]方差分析表
S0.02350.0003500.007000.01050.3060.06850.2830.00522.53713.2103.9625.2071.562>0.05>0.0520.00030.00028.84613.17354.423
0.05
F67.143
P
0.3460.4130.6080.6021.2170.4941.5571.023-1
13.80026.69529.90028.78819.58527.42023.88328.785槲皮素
新藤黄酸
BCDA
浸膏
表3 正交试验结果(n=3)
A
K0.2430.3460.2990.3550.4560.8350.6210.75523.46522.15723.335K0.3520.3250.3230.3990.7710.8840.5730.82125.26425.02225.633K0.4190.3430.3920.2801.0940.6021.1270.74424.69526.24624.4560.1760.02100.09300.1190.6380.2820.5540.0771.7994.0892.2980.04690.0006990.01400.02100.6120.1370.5660.01045.07426.4217.925BC F0.05(2,2)=19.00;F0.01(2,2)=99.00
表5
最佳工艺条件重复性实验
10.5381.572
20.5451.535
30.5511.542
RSD/%1.1961.268
槲皮素
BCDA
新藤黄酸
BCDA
槲皮素含量/mg・g-1新藤黄酸含量/mg・g-1
浸 膏
BC为佳。以新藤黄酸为考察指标,由表2中极差R值大小显示,各因素作用主次为A>C>B>D;由表3中方差分析结果表明:相对于D因素,A、C因素有显著性意义,B因素无显著性意义,因此以A3B1C3D2为佳。
以浸膏得率为考察指标,由表2中极差R值大小显示,各因素作用主次为D>B>C>A;由表3中方差分析结果表明:相对于A因素,B、C因素无显著性意义,D因素有显著性意义,因此以A1B1C1D3为佳。
由于本方中以槲皮素和新藤黄酸为活性成分,因此最终确定提取工艺条件为A3B1C3D2,即以6倍量80%乙醇提取3h,共提2次。2.4 验证实验 为进一步考察上述优选工艺条件的稳定性,按最佳工艺条件进行重复3次提取,测定槲皮素及藤黄酸的
含量,结果见表5,由表5可看出该工艺具有良好的稳定性。3 讨论
通过L9(34)正交设计得出芙蓉膏最佳提取工艺条件为A3B1C3D2,即以6倍量80%乙醇提取3h,共提2次。在该条件下各指标含量较高,说明提取较完全,并且经重复性实验验证,该方法稳定性好,说明工艺可行。参考文献:
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生植物资源,2003,22(1):14.
(收稿日期:2005
01
11)
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鲁南制药杯2004年中国食品药品监管十大新闻揭晓
鲁南制药杯2004年中国食品药品监管十大新闻评选近日揭晓。入选的十大新闻是(按新闻发生时间顺序排序):
1.全国食品药品监管系统掀起学习高志全热潮,大力加强队伍建设。2.农村药品"两网"建设在全国全面铺开。3.SARS疫苗Ⅰ期临床观察完成,受试者均未出现异常反应。4.全国食品药品监管系统开展执法检查。5.广东、上海食品安全监管体制改革实现新突破。6.阜阳发生劣质奶粉事件,国务院组成调查组进行查处。7.全国食品药品监管系统为实施《行政许可法》全面清理许可事项。8.7月1日起非OTC抗菌药凭处方销售。9.我国药品制剂和原料药实现在GMP条件下生产。10.全系统贯彻国务院作出的《关于进一步加强食品安全工作的决定》。
此次活动得到国家食品药品监管局的大力支持,全国食品药品监管系统、医药行业、在校学生约5000余人积极参与了此
(一步)项活动。