荧光分析法在药物分析中的应用

荧光分析法的应用

摘要：作为灵敏度较高的荧光分析法，近年来，关于荧光分析法的研究越来越受到重视。荧光分析法应用技术主要有:同步荧光分析技术、液相色谱-质谱联用技术及流动注射分析法。 荧光分析法在分析领域具有广泛的应用，本文主要介绍其在药物分析及其他方面的应用。

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荧光指物质分子因吸收外来辐射的光子能量进而基态激发至激发态，然后从第一电子激发单重态所产生的辐射跃迁返回到基态并且伴随的发光现象。荧光分析法也就是凭借物质的荧光性能针对不同物质进行分析的方法。但是，该方法也会受到检测物质特性的影响，因为能够拥有发射荧光特性的物质不是很多，同时有些药物的分子会部分吸收荧光光谱，这样引起荧光减弱甚至熄灭；同时许多药物之间荧光光谱互相重叠，会产生一定的干扰等等因素限制了荧光分析法的应用，所以近年来一些新型的荧光分析技术得以发展。一种新的非同位素标记分析技术, 分辨荧光分析法的主要优势是拥有高度的灵敏度、选择性佳以及避免放射性污染的产生。该技术通过消除背景荧光以及杂质的方式提升信噪比,已经在药物含量测定、DNA检测以及酶活性测定等方面得到了广泛的应用。

一、在药物分析中的应用

1 同步荧光分析技术

传统的荧光分析技术由于受到荧光光谱互相干扰等因素的影响，检测受到限制，同步荧光分析法与传统的方法相比较的主要优势为谱图简化、选择性增加、光散射干扰降低等, 对于多组分混合物的分析尤为适用。

1.1 同步扫描技术与同步荧光光谱：同步扫描技术较传统的荧光测定方法最大的优势是可以对激发以及发射两个单色器波长进行同时扫描，做到了光谱的简化、谱带的窄化、光谱的重叠现象减少以及减小了散射光。该方法根据不同的光谱扫描方式分成恒基体法、恒波长法、可变角法以及恒能量法。

1.2 同步荧光与化学计量法的结合在药物分析中的应用研究：导数-同步技术及结合化学计量手段能够针对光谱重叠非常严重的物质进行监测，分辨程度更有优势。该方法在药物的检测中起到了举足轻重的作用。

2 液相色谱-质谱联用技术

液相色谱-质谱联用技术是利用液相色谱高效的在线分离能力以及质谱的高选择性的检测效果联合, 解决了传统液相检测器的缺点，能够同时获得化合物的储存时间、分子量及特征结构碎片等数据,可以作为组分复杂样品分离分析最有优势的研究方法。该方法目前主要用于药物成分的分析、药物代谢研究以及残留药物成分鉴定分析。

3 流动注射分析法

流动注射分析由丹麦的化学家提出，作为一项新型快速自动分析技术,该方法获得较快的发展，作为新型的微量、高速以及自动化的分析技术受到了重视。该技术一改以往的必须实现化学平衡才能进行定量检测的限制，做到了在物理和化学非平衡动态情况下就能开展物质含量的测定。作为高度灵敏的痕量分析技术，流动注射与化学发光检测器的联合应用得到了很大的发展。有研究显示，作为一种新方法，流动注射时间扫描荧光分析法能够测定青霉素V钾。另有研究者发现了流动注射碱性降解分光法快速测定微量金霉素的方法，为临床检测工作做出很大贡献。

4 分辨荧光分析法

作为目前研究发现的最有发展前途的非同位素标记分析技术，时间分辨荧光分析可利用时间分辨技术检测特异荧光,获得固定波长的荧光强度-时间曲线以及固定时间的荧光发射光谱,能够分辨测定混合物中光谱重叠而荧光寿命有差异的成分,对于大分子物质的检测提供了研究的途径。该方法以适当的激发光源和检测体系,借助对合适延缓时间及测量时间的设置，进而延迟测量时间, 直至本底短寿命荧光消失以后，再进行复合物的长寿命荧光的测定，这样一来，就做到很大程度上消除本底荧光的干扰, 增加了检测灵敏度，亦无放射性污染。该方法主要应用于药物含量的测定、酶活性测定、DNA检测以及时间分辨荧光免疫分析。

二、荧光分析法在其它方面的应用

荧光分析法除了应用于药物分析外，还应用于许多方面。下面介绍一下，探析水质分析中荧光分析法的应用。

1单项指标的测定

荧光分析法对于单项指标测定方面的应用十分普遍。如测定水中的金、银、铜、镉、猛、硼、铍、铝、硒、氟、铁、钼、锌和部分稀土元素等。其中，对于铍、铝、硒、镉的测定选用的是荧光增强法；氟、铁、硫、铜等的测定则是采用荧光猝灭法；铍、钒、铝、锰等的测定则主要采用的是催化荧光法。除了以上提及的元素指标外，荧光分析法在有机物的测定中也有应用。如糖类、有机酸等并

不发光的脂肪族有机物，通常都是通过加入反应物，使之发生化学反应并产生荧光物质进而测定；而对于多环芳烃、酚、醌、油分等芳香族有机化合物，也要采用荧光分析方法来测定。

2 综合指标测定

水质分析中，水环境污染主要是有机污染物。有机污染物具有组成复杂且种类繁多的特点，为水质分析过程带来了一定的难度，若是对于单项指标进行鉴定，就很难获得全面的水质分析结果，因此，必须要进行综合性的指标测定。目前，我国对于有机物综合指标测定的案例还很少，传统的COD、BOD测试过程又有着耗时长、灵敏度差的缺点。但是在实践中充分证明了荧光分析法在水体有机污染物综合指标测定中具有可行性，其灵敏度和选择性都高于传统的COD、BOD测试过程，而且发展前景非常广阔。

三、展望

近年来，伴随新分析方法的层出不穷和仪器设备的日新月异,荧光分析技术得到了很大程度的发展, 显示了美好的发展前景。荧光分析法的仪器操作简单，方便易掌握，检测灵敏度高，选择性佳，不但能充分地应用于药物和生化分析中，还能作为液相色谱和毛细管电泳的检测方法而得到广泛应用。目前在荧光分析技术中最具发展前景的就是时间分辨荧光分析法，对于大分子物质的检测提供了研究的途径，有很大发展前景，值得推广。荧光分析法用于药物检测具有灵敏度高的优势，随着新型荧光分析仪器的应用使荧光分析法保持更加高效、快捷的方向发展前景，荧光分析方法一定会在不断的发展过程中将药物分析引领到一个前所未有的新高度。

参考文献：

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