噬菌体效价实验
中国典型培养物保存中心 China Center for Type Culture Collection (CCTCC)
噬菌体效价实验
实验材料：
菌株：CCTCC AB 2013329（λ噬菌体溶原株）Escherichia coli K12 WK 6 λ
CCTCC AB 2013330（λ噬菌体敏感株）Escherichia coli C600 CR34 培养基：肉汤培养基；软琼脂：肉汤培养基中加入0.5%琼脂10ml/管 培养条件： NA 培养基或LB 培养基，37℃
实验步骤：
7.5ml 新鲜E.coli λ 菌液（CCTCC AB 2013329）离心
菌沉淀用1ml 无菌水悬浮
菌悬液加在无菌平皿中央，开皿盖，在安全柜的紫外灯下照射15秒（0.15mJ/cm2）
加入NA 培养液
5ml
37℃暗培养3小时
吸取以上菌液-培养液混合物，加1 - 0.5ml氯仿震荡后离心12000rpm2分钟
上清十倍稀释至10-7
选择10-5、10-6、10-7上清稀释液100ul 与100ul 受体菌（CCTCC AB 2013330）混合
37℃温浴20分钟
混合菌液加入到NA 软琼脂（不烫手）中震荡混匀倒NA 平板
实验结果：
稀释度为10-4的平板：布满噬斑不可数
稀释度为10-5的平板：噬斑346个
稀释度为10-6的平板：噬斑37个
稀释度为10-7的平板：噬斑4个
图
1.
上一排为平板背面照片，下一排为平板正面照片。
教学建议：
噬菌体液体放置在室温下两周会导致数量下降一个数量级。
宿主菌必须是噬菌体敏感菌株CCTCC AB 2013330，教学用普通大肠菌和噬菌体溶原菌株不能产生噬菌斑。
琼脂的浓度（1.5%-2.0%），过高或过低的琼脂含量均不能达到好的效果。 噬菌体与细胞的比例，测定噬菌体效价应采用低感染复数。
指示菌密度是在平板上获得清晰噬菌斑效果的重要因素之一，其细胞密度不宜过高。一般控制在1ⅹ107个细胞/ml为宜。
实验教材：
沈萍，陈向东《微生物学实验》4版. 高等教育出版社.2007, 35-39.
王建波，方呈祥《遗传学实验教程》武汉大学出版社. 2004, 111-114.