人体血清中的多溴联苯醚.邻苯二甲酸酯和双酚 A的连续

第××卷

××××年×月 分析化学（FENXI HUAXUE） Chinese Journal of Analytical Chemistry 第×期 ~

人体血清中的多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A 的连续在线分离及气

相色谱-质谱测定

邵敏 陈永亨* 李晓宇

（广州大学环境科学与工程系，广州 510006）

摘 要 建立了人体血清中多种环境雌激素: 多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A 快速和可靠的连续在线分离及在气相色谱-质谱上的分析方法。血清样品经过用浓盐酸使蛋白质变性

[1]

，用乙醚萃取，经硅胶柱分离出多个族组分：

多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers, 即PBDEs ) 、邻苯二甲酸酯(phthalate esters, 即PAEs ) 和双酚A(Bisphenol A , 即BPA ) ，最后由气相色谱-质谱的选择离子检测测定。PBDEs 、PAEs 和BPA 标准曲线回归方程拟合度R 2 均＞0.99，表明在测试的浓度范围内线性关系良好。PBDEs 目标化合物的检出限为0.005～0.048 ng/mL, PAEs 目标化合物的检出限为0.103～0.833 ng/mL, BPA 的检出限是0.035 ng/mL。标准样品重复样中，PBDEs 的RSD （relative standard deviation）值分别为2.76%～10.9%，PAEs 的RSD 值分别为5.63%～9.90%,BPA 的RSD 值为3.03%。实际血清样品中，PBDEs 的加标回收物PCB209（polychloride diphenyl ether 209）的回收率范围是74.8 %～88.5%；PAEs 中的加标回收物DBP-D4（Dibutyl phthalate-Deutorium 4）的回收率范围是78.7%～97.0%； BPA 中的加标回收物 BPA-D16（Bisphenol A-Deutorium 16）的回收率范围是76.3%～93.1%。该方法检测血液中多种环境雌激素灵敏度高、重现性好和回收率良好。

关键词 人体血清；多溴联苯醚；邻苯二甲酸酯；双酚A ；气相色谱-质谱

1 引 言

近年来，随着对环境污染问题的日益关注，环境内分泌干扰物[2]，作为一类污染源引起了环境科研人员的研究兴趣，环境雌激素尤其成为这类干扰物的研究热点[3]。研究证明，环境雌激素对人类的健康与生殖，神经系统有着直接的危害作用[3-5]。它们主要通过模拟内分泌激素的作用与下丘脑垂体、子宫等器官的雌激素受体结合，从而干扰人体和其它动物的内分泌系统的正常运作，导致生殖系统的发育不良，肿瘤及畸形，生育能力下降。

环境雌激素多溴联苯醚（polybrominated diphenyl ethers, 即PBDEs ）、邻苯二甲酸酯（phthalate esters, 即PAEs ）和双酚A(Bisphenol A , 即BPA ) 作为重要的化工原料[6-7,8-10,11]，广泛应用于生产人们日常生活中的消费用品，对人们的生活环境与健康有着直接与深刻的影响。

多溴联苯醚的重要用途是阻燃剂，应用于电子、电器、化工、建材、纺织等领域，是家用电器、计算机、泡沫塑料、地毯和布料、汽车内饰不可缺失的成分。常用的为五溴、八溴和十溴联苯醚，其中十溴联苯醚用途最广，因其价格低廉、性能优越、急性毒性在所有溴代联苯醚中最低。

邻苯二甲酸酯是一种增塑剂，通过改变高聚物分子间的结构来增加其成型时的可逆性与流动性，改变其成品的柔韧性，被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、清洁剂、润滑剂、指甲油、头发喷雾剂、香皂、农药载体驱虫剂、塑料与橡胶产品中。

双酚A 是生产聚碳酸酯（polycarbonate , 即PC ）树脂及环氧树脂的主要原料，广泛应用于婴儿奶瓶、塑料容器、罐头内壁、黏合剂等。

迄今为止，这些雌激素对环境、人体的污染研究都是对某种单一的雌激素进行检测和分析[6-11,12-14]，所以有必要开展多种雌激素在血清中的污染研究。由于临床血清样品待测组分含量低，组分复杂且干扰严重，给定量分析的精确度带来一定的难度。本研究用浓盐酸有效地除去血清中的大分子蛋白质，利用硅胶柱分离与纯化血清中的三种族组分PBDEs 、PAEs 和BPA ，降低了背景干扰，利用GC-MS 选择性离子检测方法结合内标法，建立了可靠与快速同时检测血清样品中多种环境雌激素PBDEs 、PAEs 和BPA 的分析方法。

________________________________

本文系国家环保部公益性行业科研专项（201109001-08）资助。 E-mail ： [email protected]

分析化学 第××卷

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

Trace DSQ气相色谱一质谱仪（美国Thermo Fisher公司），EFAA-DC 12型氮吹仪（上海安谱实验仪器有限公司），Laborota 4000 efficient型旋转蒸发仪（德国Heidolph 公司），SB 3200DT型超声清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。正已烷，二氯甲烷，甲醇为HPLC 级试剂，丙酮、乙醚为分折纯，经二次重蒸后使用。硅胶（60-200 µm ）实验前与脱脂棉均系二氯甲烷索氏抽提72h 后置于干燥器中备用；镊子，药勺和氮吹针头都用甲醇超声清洗后待用；无水硫酸钠与氯化钠于450˚C 焙烧4h 后，密封于干燥器中待用。购自美

，

国Accustandards(New Haven, CT)的标样有：多溴联苯醚9种混合标样（10 mg/L，其中包含2,4,4-三溴联苯醚(BDE-28)、2,2’,4,4’ -四溴联苯醚(BDE-47)、2,3’,4,4’ -四溴联苯醚(BDE-66)、2,2’,3,4,4’-五溴联苯醚(BDE-85)、2,2’,4,4’,5-五溴联苯醚(BDE-99)、2,2’,4,4’,6-五溴联苯醚(BDE-100)、2,2’,3,4,4’,5’-六溴联苯醚(BDE-138)、2,2’,4,4’,5,5’-六溴联苯醚(BDE-153)、2,2’,4,4’,5,6’-六溴联苯醚(BDE-154)）；6种邻苯二甲酸酯混标（2000 mg/L, 其中包含邻苯二甲酸二甲酯(dimethyl phthalate ，DMP) 、邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate ，DEP) 、邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate ，DBP) 、邻苯二甲酸二辛酯(dioctyl phthalate ，DNOP) 、邻苯二甲酸丁基苄基酯(benzyl butyl phthalate，BBP) 和邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate)，DEHP ）) ；DBP-D4（100 mg/L,氘代-邻苯二甲酸二丁酯）；BPA （100 mg/L）；BDE209（50 mg/L，十溴联苯醚）。购自美国UITra Scientific(North Kingstown, RI)的标样有PCB209 （500 mg/L，十氯联苯醚）。购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH （Augsburg) 公司的标样有BPA-D16（氘代-双酚A ）；BB （benzyl benzoate, 苯酸苄酯）。购自美国Cambridge

’’

Isotope laboratories(Andover, MA)的标样有：BDE118（50 mg/L，即2,3,4,4,5-五溴联苯醚）；BDE183 （50 mg/L,即2,2’,3,4,4’,5’,6-七溴联苯醚）；13C 12 -BPA（100 mg/L）；13C 12 -BDE209（50 mg/L）。 2.2样品的前处理 将1 mL 血清倒入125 mL 锥形瓶中，加入回收率指示物PCB 209，DBP-D4和BPA-D16，再加入1 mL （6 mol/L）HCl 溶液，震荡，然后加入20 mL 乙醚，剧烈震荡，倒入80 mL 的分液漏斗，静止，分层，分离出有机相，然后用10 mL乙醚再萃取两次，合并有机相，用40 mL饱和氯化钠溶液洗涤，弃去氯化钠溶液。有机相用无水硫酸钠脱水干燥后在旋转蒸发仪上浓缩到1 mL左右，过中性硅胶柱，用10 mL正己烷与二氯甲烷的混合液（v/v, 7:3）淋洗PBDEs 组分。接着用10 mL正己烷和丙酮的混合液（v/v，8:2）淋洗PAEs 组分，最后用10 mL 的乙酸乙酯淋洗BPA 组分。在旋转蒸发仪上把淋洗液旋干后转移入细胞瓶，用氮吹仪吹干溶剂后，在PBDEs 组分中加入内标物BDE-118（除BDE-209外的PBDEs 的内标，）和13C 12-BDE209（BDE-209的内标），用正己烷定容至300 µL ，待测。在PAEs 组分中加入内标物BB ，用正己烷定容至300 µL ，待测。在BPA 组分中加入内标物13C 12-BPA ，用正己烷定容至300 µL ，待测。至此，完成了对血清样品中PBDEs ，PAEs 和BPA 三种组分的连续在线分离。

2.3仪器条件

(a) 多溴联苯醚组分

PBDEs ：DB-5MS （30m*0.25mm i.d*0.1µm ）毛细管柱[6]，载气为He ，恒流，柱流量为1.2 mL/min，无分流进样，进样量为1 µL ；进样口温度270o C ，升温程序为：初始温度100o C ，保持1 min ，然后以20o C/min升温到210o C ，再以4o C/min升温到250o C ，再以2o C/min升温到290o C ，并保持5mins 。（标准与血清样品色谱图见图1(a),(b)）

BDE-209：BDE-209组分的耐热性不是很好，在30m 色谱柱里高温时会分解，所以换用15m 的色谱柱[7]

。 DB-5MS （15m*0.25mm i.d*0.1µm ）毛细管柱，载气为He ，恒流，柱流量为1.2 mL/min，无分流进样，进样量为1 µL ；进样口温度270o C ，升温程序：初始温度100o C ，保持1 min，然后以20o C/min升温到240o C ，再以10o C/min升温到300o C ，并保持10mins 。（标准与血清样品色谱图见图2(a),(b)）

质谱条件：PBDEs 组分电离模式为：离子源温度为200o C [7]，为负化学电离源（NCI ），高纯甲烷（≥99.9999%

o

电子轰击能量为100 ev，接口温度是290C ，样品定量检测时用选择性离子扫描模式（SIM ）。检测离子见表1。

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图1(a) 多溴联苯醚组分标准样品色谱图

Fig.1(a)

Polybrominated diphenyl ethers standard sample chromatograph

图1(b) 多溴联苯醚组分血清样品色谱图

Fig.1(b) Polybrominated diphenyl ethers serum sample chromatograph

图2(a) 十溴联苯醚标准样品色谱图

Fig.2(a)

Brominated diphenyl ethers 209 standard sample chromatograph

图2(b) 十溴联苯醚血清样品色谱图

Fig.2(b) Brominated diphenyl ethers 209 serum sample chromatograph

(b) 邻苯二甲酸酯组分

DB-5MS （30m*0.25mm i.d*0.25µm ）毛细管柱，载气为He ，恒流，柱流量为1 mL/min，无分流进样，进样量为1 µL ；进样口温度270o C ，升温程序为: 初始温度100o C ，保持1 min，然后以20o C/min升温到170o C ，再以5o C/min升温到270o C ，并保持10 mins。（标准与血清样品色谱图见图3(a),(b)）

质谱条件：电离模式为电子轰击源（EI ）， 能量为70 ev, 接口温度是290o C ，离子源温度为260o C 。检测离子见表1。

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图3(a) 邻苯二甲酸脂组分标准样品色谱图 Fig.3(a)

Phthalate esters standard sample chromatograph

图3(b) 邻苯二甲酸脂组分血清样品色谱图 Fig.3(b) Phthalate esters serum sample chromatograph

(c) 双酚A 组分

由于双酚A 的羟基气相色谱特性不好，所以在进色谱分析前，要对其进行硅烷化衍生化，以改善其分析的灵敏度。衍生化条件是在吹干的分离物中加入100 mL的硅烷化试剂（BSTFA 99%+1%TMS）与50 mL 吡啶后，加盖后在60o C 下加温30 mins，然后用正己烷定容至300 µL ，直接进样分析[15]。

DB-5MS （30m*0.25mmi.d*0.25µm ）毛细管柱, 载气为He ，恒流，柱流量为1 mL/min，无分流进样，进样为1 µL ；进样口温度为270o C ，升温程序为初始温度100o C ，保持1 min，然后以20o C/min升温为220o C ，再以4o C/min升温到260o C ，以20o C/min升温到280o C ，保持10 mins。（标准与血清样品色谱图见图4(a),(b)）

质谱条件：同（b ）。检测离子见表1。

图4(a) 双酚A 标准样品色谱图

Fig.4(a) Bisphenol A standard sample chromatograph

图4(b) 双酚A 血清样品色谱图

Fig.4(b) Bisphenol A serum sample chromatograph

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表1 多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A 的保留时间(分钟) 和特征离子

Table 1 Polybrominated diphenyl ethers, phthalate esters and bisphenol A retention time(min) and characteristic ions

目标化合物 Analyte

BDE （brominated diphenyl ether，多溴联苯醚）组分

BDE-28（ 2,4,4-三溴联苯醚） BDE-47（2,2’,4,4’ -四溴联苯醚） BDE-66（2,3’,4,4’ -四溴联苯醚） BDE-100（2,2’,4,4’,6-五溴联苯醚） BDE-99（2,2’,4,4’,5-五溴联苯醚） BDE-85（2,2’,3,4,4’-五溴联苯醚） BDE-154（2,2’,4,4’,5,6’-六溴联苯醚） BDE-153（2,2’,4,4’,5,5’-六溴联苯醚） BDE-138（2,2’,3,4,4’,5’-六溴联苯醚） BDE-183（2,2’,3,4,4’,5’,6-七溴联苯醚) BDE-118（2,3’,4,4’,5-五溴联苯醚) PCB-209（十氯联苯醚） BDE-209（十溴联苯醚)

13

，

保留时间 Retention time

9.68 12.37 12.90 14.85 15.78 17.32 18.14 19.72 21.85 24.46 16.56 16.92 17.10 17.08 6.03 7.48 9.98 12.66 12.68 19.03 21.93 24.84 11.66 11.75 11.77

定量离子 Quantitative ions

79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 79,81 498 486.7, 494 163 149 105 153 149 149 167 149 368 384 357

定性离子 Qualitative ions

488.7 492 194 177 91 223 223,167 206,238 149,279 279 369,386 371,369 372

C 12BDE-209（带13C 12的十溴联苯醚)

PAEs （phthalate esters，邻苯二甲酸脂）组分

DMP （dimethyl phthalate，邻苯二甲酸二甲酯） DEP （diethyl phthalate，邻苯二甲酸二乙酯） BB （benzyl benzoate,苯酸苄酯）

DBP-D4（D4-dibutyl phthalate，氘代-邻苯二甲酸二丁酯） DBP （dibutyl phthalate，氘代-邻苯二甲酸二丁酯） BBP （benzyl butyl phthalate，邻苯二甲酸丁基苄基酯）

DEHP （(Di(2-ethylhexyl)phthalate)，邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯 DNOP （dioctyl phthalate，邻苯二甲酸二辛酯）

BPA （bisphenol A，双酚A ）硅烷化后 BPA-D16（D16-bisphenol A, 氘代双酚A ）

13

C 12-BPA （13C 12-bisphenol A, 带13C 12的双酚A ）

BPA (bisphenol A, 双酚A)

2.4 质量保证和质量控制

在实验过程中，为确保数据的可靠与精确，运用方法空白、空白加标、样品重复和内标法定量进行质量控制。每十个实验样品都要做方法空白和空白加标，在化学前处理时，所有样品中都要加三种组分回收率指示物PCB209、DBP-D4和BPA-D16进行示踪，并且在样品上机分析前分别在PBDEs 组分加入内标物BDE118

和13C 12-BDE209，PAEs 组分中加入BB ，在BPA 组分中加入13C 12-BPA 用以定量，尽量减少实验过程中人为因素和仪器的原因对实验结果所产生的影响。

3 结果与讨论

3. 1 标准曲线，检出限，精密度与回收率

本实验采用内标标准曲线法对待测组分进行定量，即以不同浓度的标准溶液中的待测物质和内标物的峰面积之比为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，从而可从标准曲线中查出待测组分含量。此法可清除仪器原因对实验结果的影响。PBDEs 的标准溶液的浓度分别为0.2,0.4,0.6,1.0,2.0,3.0,5.0,10.0 ng/mL；BDE-209的标准溶液的浓度分别为1.0,3.0,5.0,7.0,10.0,12.0,15.0,20.0 ng/mL；PAEs 的标准溶液的浓度分别为10,20,50,100,200,300,500 ng/mL；BPA 的标准溶液的浓度分别为20,50,100,200,300,400和500 ng/mL。PBDEs 目

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标化合物的检出限为0.005～0.048 ng/mL; PAEs 目标化合物的检出限为0.103 ng/mL～0.833 ng/mL; BPA 的检出限是0.035 ng/mL。将3 ng/mL的PBDEs ，100 ng/mL的PAEs 和100 ng/mL的BPA 衍生化后的标准溶液 连续上机测定5次，PBDEs 的RSD 值分别为2.76%～10.9%，PAEs 的RSD 值分别为5.63%～9.90%；BPA 的RSD 值为3.03%。 PAEs 方法空白中检测出DMP, DEP, DBP, DEHP 和DNOP ，在实际样品中扣除空白，BPA 方法空白中无BPA ；方法空白加标实验是采用萃取溶液乙醚作为基质进行空白加标，PBDEs 目标化合物回收率为70.5%～117.4%； PAEs 目标化合物回收率为48.5 %～127.6 %，BPA 目标化合物回收率为128.6 %； 实际血清样品中，加标回收物PCB209，DBP-D4和BPA-D16回收率分别为74.8 %～88.5%，78.7%～97.0%和76.3%～93.1%。

3. 2 实验样品的分析

本实验分析了7个血清样品，均采自患有子宫妇科疾病的患者。

(a) 多溴联苯醚的各组分含量见表2。与其他国家人体血清中PBDEs 的分布形式明显不同[16,17]，其他国家人体血清多以BDE47，99,100,153,154 为主要同系物。而在这次实验，其它成分几乎没有，只有BDE209含量较高，占∑PBDEs 的59% 以上，这可能与阻燃剂的使用有关，如前所述，其中十溴联苯醚在工业中用途最广，污染环境最为严重。另其数值与与其他国家人体血清中的∑PBDEs 相比[17]，明显偏低，可能是由于中国工业发展较晚，PBDEs 在生物与人体内富集不是很严重。

表2 7个人体血清样品中的多溴联苯醚含量

Table 2 Concentration of Polybrominated diphenyl ethers (ng/mL) in 7 human serum samples

BDE （brominated diphenyl ether） 多溴联苯醚

7个病例(7 Examples) 继发性不孕 Secondary infertility 继发性不孕 Secondary infertility 继发性不孕 Secondary infertility 纵膈子宫 Uterus septus 前庭大腺脓肿 Bartholinian abscess 子宫肌瘤 Hysteromyoma 子宫内膜异位症 Endometriosis uterina BDE 中值 Median 检出限 Limit of detection

0.006

0.005

0.018

0.048

0.011

0.013

0.87

0.05

0.09

0.13

0.05

0.09

0.46

0.77

59.4

0.04

0.01

0.09

0.04

0.05

0.43

0.66

64.8

0.01

0.00

0.13

0.05

0.08

0.52

0.79

66.0

0.05

0.00

0.15

0.07

0.08

0.64

0.99

64.4

0.07

0.01

0.16

0.08

0.09

0.71

1.12

63.6

0.04

0.01

0.17

0.06

0.07

0.66

1.00

66.2

2,4,4-三溴联苯醚 0.01

，

BDE-28 BDE-47 BDE-66 BDE-100 BDE-99 BBDE-209 ∑PBDEs BDE209/∑PBDEs(%)

2,2’,4,4’ -四溴联苯醚 0.01

2,3’,4,4’ -四溴联苯醚 0.14

2,2’,4,4’,6-五溴联苯醚 0.04

2,2’,4,4’,5- 十溴联苯醚 五溴联苯醚 0.08

0.49

0.76 64.0

(b) 邻苯二甲酸脂的含量见表3。从表3可看出：虽BBP 没有检出，DBP 、DEP 、DBP 、DEHP 和DNOP 均被检出，说明PAEs 在人们日常生活中污染的普遍性，含量范围在20.46～354.48 ng/mL, 尤其是DEH P 含量很高，可达319.10 ng/mL, 中值为154.02 ng/mL, 这主要是这种材料是目前工业主要使用的增塑剂有关，它普遍存在人们生活的介质当中。此外，DBP 的数值也较高，12.62 ng/mL，这一结果与其它有关PAEs 在环境及血清中的污染状况的文章[10, 12-13]结论相吻合，代兴碧等人的文章[13]显示城市儿童血清中DEP 、DBP 、DEHP 含量（中位数）分别为2.60、35.90、106.25 ng/mL, 农村儿童血清中DEP 、DBP 、DEHP 含量（中位数）分别为0.00、40.60、52.45 ng/mL；黄晓群等人的文章[10]指出人体血清中DEHP >DBP>DEP >DNOP>DMP，这一结果与此次的实验结果一致，只是此次实验是用GC-MS 来测，发现GC 进样口带来DEP 污染，无法消除，所以DEP 数据被删除。DEHP 和DBP 数值变化较大，可作为区分雌性水平高的患者与健康人群的指标。

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表3 7个人体血清样品中的邻苯二甲酸脂含量

Table 3 Concentration of phthalate esters (ng/mL) in 7 human serum samples

7个病例(7 Examples)

DMP Dimethyl phthalate 邻苯二甲酸二甲酯

继发性不孕 Secondary infertility 继发性不孕 Secondary infertility 继发性不孕 Secondary infertility 纵膈子宫 Uterus septus 前庭大腺脓肿 Bartholinian abscess 子宫肌瘤 Hysteromyoma 子宫内膜异位症 Endometriosis uterina 中值 Median ∑PAEs 范围 Range ∑PAEs 中值 Median 检出限 Limit of Detection

1.05 20.46-354.48 170.99 0.238

0.536

0.612

0.714

12.62

154.02

3.29

1.41

15.01

195.46

0.77

0.98

19.14

131.83

0.59

0.98

5.95

82.17

1.88

1.41

15.64

319.10

18.33

1.21

18.77

261.61

0.36

0.19

4.06

15.94

0.26

1.20

DBP Diethyl phthalate 邻苯二甲酸二乙酯

9.80

DEHP

Di(2-ethylhexyl)phthalate 邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯

72.04

DNOP Dioctyl phthalate 邻苯二甲酸二辛酯

0.86

(c) 双酚A 的含量见表4. 石峻岭在其文章中指出普通人群中血清双酚A 的浓度, 正常基准值应低于6.80 ng/mL，在这7个血清样品中，BPA 的含量均较高，范围从9.66～110.13 ng/mL，中值为45.71 ng/mL, 与她们的医学背景相吻合，她们都患妇科不孕症，雌激素水平较高。此外，肖国兵[14]等人对环氧树脂生产过程中接触双酚A 的男性工人的血清中双酚A 水平及其对性激素水平的影响进行了研究。接触组（工人）的血清双酚A 水平显著高于对照组（健康男性人群）, 其平均水平为64.60 ng/mL 。

表4 7个人体血清样品中的双酚A 含量

Table 4 Concentration of bisphenol A (ng/mL) in 7 human serum samples

7个病例(7 Examples)

继发性不孕Secondary infertility 继发性不孕Secondary infertility 继发性不孕Secondary infertility 纵膈子宫Uterus septus

前庭大腺脓肿Bartholinian abscess 子宫肌瘤Hysteromyoma

子宫内膜异位症Endometriosis uterina 中值 Median

检出限 Limit of Detection

BPA （bisphenol A, 双酚A ）

9.66 81.70 69.35 26.28 110.13 13.94 18.55 45.71 0.035

3. 3 结论

1．建立了连续在线分离人体血清样品中的多溴联苯醚，邻苯二甲酸酯和双酚A 及GC-MS 的测试方法。三种环境雌激素的加标回收率分别为74.8 %～88.5%，78.7%～97.0%和76.3%～93.1%；相对标准偏差为2.76%～10.9%，5.63～9.90%和3.03%，结果较为满意。该方法简便，快捷，可靠和经济。

2．实验的检测数据表明，BDE209的检测范围为0.66～1.12 ng/mL，中值为0.87 ng/mL，PAEs 的检出范围为20.46～354.48 ng/mL，中值为170.99 ng/mL，BPA 的检出范围为9.66～110.13 ng/mL，中值为45.71 ng/mL。

分析化学 第××卷

感谢广州医学院附属第二医院刘颖医生提供血清样品。邓红梅老师在实验和样品分析中给予了很好的建

议和讨论，在此一并致谢。

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第×期 邵敏等：人体血清中的多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A 的连续在线分离及GC-MS 测定

Consecutive Online Separating Polybrominated Diphenyl Ethers,Phthalate Esters and Bisphenol A in Human Serum and Their Measurement on Gas

Chromatography - Mass Spectrometry

SHAO Min, CHEN Yong-Heng*, LI Xiao-Yu

(Environmental science and engineering institute of Guangzhou University, Guangzhou 510006)

Abstract Established an efficient analytical method of consecutive online separating several environmental estrogens in human serum: polybrominated diphenyl ethers (PBDEs), phthalate esters(PAEs) and bisphenol A (BPA) and their measurement on gas chromatography - mass spectrometry (GC-MS). After denaturation of protein by concentrated hydrochloride acid, extraction by ether, separation by silica flash chromatograph, several group components including PBDEs, PAEs and BPA in human serum were separated and purified. Then these group components were detected by GC-MS in selected ion monitoring mode. The standard calibration curves of PBDEs、PAEs and BPA were linear over the assayed range with correlation coefficients equal or higher than 0.99. The detected limitations for the targeted compounds ranged from 0.005～0.048 ng/mL for PBDEs, 0.103～0.833 ng/mL for PAEs, and 0.035 ng/mL for BPA. In standard duplicated samples, the relative standard deviations were 2.76%～10.9% for PBDEs, 5.63%～9.90% for PAEs, and 3.03% for BPA. The surrogate recoveries in these 7 samples ranged from 74.8% to 88.5% for PCB209 (polychloride diphenyl ether 209) in PBDEs, from78.7% to 97.0% for DBP-D4 (Dibutyl phthalate-Deutorium 4) in PAEs, and from 76.3 % to 93.1% for BPA-D16 (Bisphenol A-Deutorium 16) in BPA, respectively. This method for detecting multiple environmental estrogens in human serum is sensitive, high reproducible with satisfied recoveries.

Keywords human serum; polybrominated diphenyl ethers; phthalate esters; bisphenol A; gas chromatograph-mass spectrometry

摘 要 建立了人体血清中多种环境雌激素: 多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯和双酚A 快速和可靠的连续在线分离及在气相色谱-质谱上的分析方法。血清样品经过用浓盐酸使蛋白质变性，用乙醚萃取，经硅胶柱分离出多个族组分：多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers, 即PBDEs ) 、邻苯二甲酸酯(phthalate esters, 即PAEs ) 和双酚A(Bisphenol A , 即BPA ) ，最后由气相色谱-质谱的选择离子检测测定。PBDEs 、PAEs 和BPA 标准曲线回归方程拟合度R 2 均＞0.99，表明在测试的浓度范围内线性关系良好。PBDEs 目标化合物的检出限为0.005～0.048 ng/mL, PAEs 目标化合物的检出限为0.103～0.833 ng/mL, BPA 的检出限是0.035 ng/mL。标准样品重复样中，PBDEs 的RSD （relative standard deviation）值分别为2.76%～10.9%，PAEs 的RSD 值分别为5.63%～9.90%,BPA 的RSD 值为3.03%。实际血清样品中，PBDEs 的加标回收物PCB209（polychloride diphenyl ether 209）的回收率范围是74.8 %～88.5%；PAEs 中的加标回收物DBP-D4（Dibutyl phthalate-Deutorium 4）的回收率范围是78.7%～97.0%； BPA 中的加标回收物 BPA-D16（Bisphenol A-Deutorium 16）的回收率范围是76.3%～93.1%。该方法检测血液中多种环境雌激素灵敏度高、重现性好和回收率良好。

关键词 人体血清；多溴联苯醚；邻苯二甲酸酯；双酚A ；气相色谱-质谱

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