实验八 革兰氏染色法
09-03
实验八 革兰氏染色法
(参考实验教材第9页)
一、实验目的
了解革兰氏染色的原理,学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、实验器材
土壤中的微生物,革兰氏染色液(草酸铵结晶紫、碘液、95%酒精、番红),载玻片,接种环,无菌水,显微镜,香柏油,二甲苯,擦镜纸。
三、操作步骤
按无菌操作要求,在酒精灯火焰旁进行
1.涂片:
在洁净干燥的载玻片边缘滴一滴无菌水,用接种环取少量菌体与水滴充分混匀;涂在玻片中央,形成薄而均匀的菌膜;
2.干燥:于空气中自然干燥
3.固定:将玻片通过火焰1—2次以使菌膜牢固附着在玻片上;
4.染色
(1)初染:在菌膜上加草酸铵结晶紫一滴,约1分钟,水洗;
(2)媒染:在菌膜上滴加碘液一滴,约1分钟,水洗;
(3)脱色:将载玻片上面的水甩净,用95%酒精滴洗菌膜至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约30秒钟,立即用水冲净酒精;
(4)复染:用番红液染1分钟,水洗。
5.干燥:将载玻片上的水吸干或于空气中自然干燥
6.镜检:将载玻片置于显微镜载物台上,按低倍镜—中倍镜—高倍镜---油镜的顺序观察。
革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
实验完毕后的处理:
①先用擦镜纸将油镜头上的油擦去;用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次;再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。
②用废纸将载玻片上的香柏油擦干净,再用沾少许二甲苯的纸将载玻片擦干净后放入有洗液的盆中浸泡。
四、实验报告
1.结果:绘出你所观察到的细菌的形态图,并说明它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌。
2.思考题:从初染到复染的过程中,染色成败的关键是哪一步?