苹果酸和柠檬酸的测定报告 (1)
生物仪器分析课程
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验 报 告
2016－2017学年第 2学期
一、 实验目的
1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。 2、掌握液相色谱的操作方法。 二、 实验原理
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC ）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm 处外标法定量分析。 三、 实验简要步骤（最好以流程图形式表达）
1、标准溶液的配制：分别准确称取100mg 苹果酸及柠檬酸标准标准品并用超纯水定容至100mL ，配制成1000mg/L的贮备液。然后分别吸取上述溶液2mL 、4mL 、8mL 、10mL 定容到10mL （相当于浓度200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L），配制标准品混合溶液；
2、样品的处理：将样品经0.45μm 水相微孔滤膜过滤后备用；
3、流动相的配制及过膜：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节至pH=2.5）配制，并过膜，脱气；
4、高相液相色谱仪操作流程： 1）开机顺序：
点击电脑图标，听到哔哔两声则说明仪器和LCsolution 工作站已连接上。（关机顺序完全相反） 2）柱平衡
排气（Purge ）：使用前按A 泵、B 泵和进样器的Purge 键进行自动排气排杂。
3）流动相
选择事先处理好的无机相0.05mol/L磷酸二氢铵在A 泵输送。 4）工作站LCsolution 中的系统设置及开启
① 在LCsolution 中，点击“Normal ”，对时间程序和结束时间（通过单标保留时间定性，第一次设置时间可设置久一点）、泵（Pump ）、柱温（Oven ）、总流速（Total Flow）、B 泵浓度（Pump B Conc）进行设置；
② 点击高级设置“Advanced ”，选择泵“Pump ”，选择二元梯度洗脱模式、对A 泵B 泵流速进行详细设置；
③ 选择“PDA ”，打开所需要的检测灯（Lamp ）、检查波长（要包括所检验的波长，紫外区范围190~1100nm）；
④ 设置好之后，保存检测方法（Save Method File As..），再下载（点击“DownLord ”）, 然后开始运行。 5）进样准备及进样
点击“OK ”后，仪器开始自动进样分析。
6）数据文件的处理
7）冲柱
选择方法文件“清洗方法”进行仪器的清洗，清洗程序结束后再关机。 四、 实验结果与分析
提供实验过程图片、实验结果图片、实验结果数据表及相关分析。
样品3
mAU 250
0.0
酸
5.0
柠檬酸
min
附1 标准曲线
五、 总结与体会（此部分手写）。
注：
1、实验报告用A4纸打印，将所有实验装订为1册上交。 2、第一、二、三项请自己组织语言简明扼要叙述。
3、第四项请认真分析，严禁抄袭，实验过程中注意多记录，多收集图片等实验结果信息。 4、第五项总结与体会请手写。