实验四 植物染色体标本的制备与观察
实验四 植物染色体标本的制备与观察
一、实验目的
1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。
2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。
二、实验原理
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式,是染色质紧密包装的结果,对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。
植物染色体标本的制备,常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法,其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤,简单易操作,但是染色体易变形、难分散开。
三、实验仪器、材料和试剂
(一)仪器、用具:显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。
(二)材料:蚕豆(Vicia faba, 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale, 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum, 2n=2x=42)、玉米(Zea mays, 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum, 2n=2x=14)、洋葱(Aillum cepa,2n =16)等根尖。
(三)试剂
1、 Carnoy 固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯) 。
2、苯酚品红染色液。
四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本:
(1) 取材:把蚕豆种子预先浸泡12h ,然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布,置25℃温箱中暗培养发根,经过48h 后幼根长至1—2cm 左右,于上午9—11时剪下根尖。
(2) 预处理:将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1%秋水仙素溶液中,浸泡处理2-4 h。
(3) 固定:用水洗净处理过的根尖,经Carnoy 固定液中固定2-4h ,转入70%乙醇中,4℃保存备用。
(4) 解离:取出根尖,用蒸馏水洗净,放入l M HCl中60℃解离8-10min ,再用蒸馏水洗净。
(5) 染色:改良苯酚品红 染色5—10min 。
(6) 压片:把根尖放在载玻片上、切取分生区部分、加一滴45 %醋酸,盖上盖玻片,用力垂直猛压,盖玻片上放上一滤纸,用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片,使细胞和染色体分散。
(7)镜检
五、实验结果
六、作业:绘制出中期染色体图。