不同培养时间的细菌革兰氏染色性与形态变化观察
中外医疗
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影像与检验
不同培养时间的细菌革兰氏染色性与形态变化观察
张桂芹 关盼香
（黑龙江省双鸭山市双鸭山煤炭总医院 黑龙江双鸭山 １５５１００）
【摘要】细菌革兰氏染色法是１８８４年丹麦细菌学家Ｈａｎｓ Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｃｒａｍ氏创立的，使用该法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。该染色法的原理有许多学说，如等电点学说、化学学说、胞壁通透性学说等，但多数学者认为，主要与细胞壁含有的其它胞壁质（Ｍｕｒｅｉｎ）厚度有关，此外还有一些影响因素。为探讨不同培养时间的细菌革兰氏染色性及其形态变化，作者对临床常见１２种细菌进行了实验观察。
【关键词】细菌革兰氏染色法 不同培养时间 形态变化【中图分类号】Ｒ４４６【文献标识码】Ａ【文章编
号】１６７４－０７４２（２００９）０５（ｂ）－０１６８－０１１ 材料与方法１．１ 实验菌种
共１２种２３株。除尸体梭菌外，其他菌种每种２株（标准菌株与临床参考菌株各１株）。
标准菌株从中国药品生物制品检定所和中国科学院微生物研究所获得，包括：金黄色葡萄球菌２６００１、表皮葡萄球菌２６０６９、藤黄微球菌２８００１、乙型溶血性链球菌３２２１０、肺炎链球菌３１１０７、流感嗜血菌５８５２７、单核细胞增生李斯物氏菌５４００１、铜绿假单胸菌１、９２２、枯草芽胞杆菌６３５０１、大肠埃希氏菌４４１０２、新型小丝担类酵母２、１５６２。临床参考菌株中的尸体梭菌来自齐齐哈尔市卫生防疫站，其他菌株来自辽宁省临床检验中心；大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌从临床感染的标本中分离，经过系统鉴定。１．２ 培养基
各种培养基均自制，培养基种类及培养条件，见表１。１．３ 革兰氏染液
采用Ｈｕｃｋｅｒ改良法。用金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌质控。１．４ 实验观察
将菌种３７℃增菌培养１８～２４ｈ后，于接种各自的专用培养基，用３７℃孵育４ｈ、８ｈ、１６ｈ、及２４ｈ不同时间的纯培养物作２枚涂片进行的革兰氏染色，从标本的上、下、左、右与中央５处各选１个约含３０个细菌体的视野，１０００倍扩大，镜检细菌的染色性及形态变化。２ 结果与讨论
实验结果显示，不同细菌的革兰氏染色性与形态因培养时间而有所变化。４～６ｈ培养物的革兰氏染色性好，前后对比其形态相对大。２４ｈ后培养物的革兰氏染色性差，形态相对变小，特别是有些菌体轮廓不清晰。
２．１ 葡萄球菌现微球菌
金黄色葡萄球菌的４～８ｈ培养物为微球菌样的球菌，被染成深兰色，培养８ｈ后形态变小，１６ｈ呈紫色为革兰氏阳性。同时，有一部分菌体呈革兰氏阴性被染成红色。表皮葡萄球菌未见上述变化，１６ｈ的涂片被染成紫色。
２．２ 肺炎链球菌与乙型溶血性链球菌
培养４ｈ的肺炎链球菌有部分菌体呈革兰氏阴性，被染成约色，部分有荚膜，１６ｈ后形态相对变小，同时见有较多菌体被染成革兰氏阴性，２４ｈ后革兰氏阴性的菌体明显增多。乙型溶血性链球菌的４～８ｈ培养特染成微球菌大小的革兰氏性球菌，１２ｈ后形态相对变小，１６ｈ后几乎均为革兰氏阴性。
２．３ 单核细胞增生李斯特氏菌
４～８ｈ的培养物染成深兰色到紫色的中等大、革兰氏阳性杆菌。８ｈ后菌体变短，１６ｈ为小杆菌，出现革兰氏阴性菌体。２４ｈ多灵敏为革兰氏阴性小杆菌。２．４ 铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、流感嗜血菌
不同培养时间这三种细菌均未见革兰氏阳性菌休。随着培养时间延长，前两种细菌见有小杆菌，有些菌体轮廓不清晰。流感嗜血菌不易着色，１６ｈ后出现丝状体。２．５ 枯草荛胞杆菌与尸体梭菌
培养４～８ｈ的枯草芽胞杆菌为深兰色大杆菌，１６ｈ后出现芽胞，形态变短，２４ｈ为整齐划一链状排列的革兰氏阳性大杆菌。不同培养时间的尸体梭菌，革兰氏染色性及形态变化与枯草芽胞杆菌大致相同，２４ｈ部分菌体见有芽胞。２．６ 新型小丝担类酵母
革兰氏染色性不良，呈弱阳性，菌体着色不匀，有少量条状物。有荚膜。将前染液在１５℃左右的水溶中加温数分钟后染色，染色性增强。
上述观察结果提示，想要确定细菌的革兰氏染色性，为鉴定该菌提供科学依据，一定要熟炼掌握革兰氏染色的技术方法，必须使用幼龄菌与对数增殖期的培养物作染色，并且要注意对比观察其染色性与形态变化是十分必要的。参考文献
［１］ 郭基平，袁晖蓉，陈幼红．标本涂片革兰染色在临床微生物检验中
的作用［Ｊ］．中国医药导报，２００６，３（３２）：１５５．
【收稿日期】 ２００９－０３－１７
表１ 实验菌种使用的培养基与培养条件
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