甲醛滴定法测定氨基酸含量
2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）
3、结果计算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）；
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）；
1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量（mg）
五、注意事项
利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白
质水解完成后，滴定值不再增加。
六、实验报告
根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的优缺点。，
七、思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/
2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？
甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验方法 2008-11-17 23:12:33 阅读668 评论0 字号：大中小 订阅
一、目的：初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。
二、原理
氨基酸是两性电解质，在水溶液中有水解平衡是弱酸，完全解离时pH为11―12或更高，若用碱滴定一NH3，所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3，释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9．0左右)。因此，可用酚酞作指示剂，用
标准氢氧化钠溶液滴定。
如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量①。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水
解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。
三、器材
1．25 mL锥形瓶 2．3 mL微量滴定管 3．吸管
四、试剂
1．0．1 m01／'L标准甘氨酸溶液 300 mL 准确称取750mg甘氨酸，溶解后定容至100mL。 2．0．1 mol／L标准氢氧化钠溶液 500 mL 准确称取2g氢氧化钠，溶解后定容至500mL
3．酚酞指示剂 20 mL 0.5％酚酞的50％乙醇溶液
4．中性甲醛溶液 400mL
在50mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0．1％酚酞乙醇水溶液，用0．1 mol／L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中
和。
五、操作
1．取3个25 mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入2 mL 0.1 mol／L的标准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2mL甲醛
溶液，再混匀，分别用0．1 mol／L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的
回收率。
甘氨酸氨基氮回收率％= 实际测得量 / 理论加入量 × 100%
公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶耗用的标
准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14．008。
2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘14．008。即为加入理论量的mg数。
2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每ml甘氛酸
溶液中含有氨基氮的mg数。
式中： 为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。 为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧
化钠溶液的平均mL数。Mol/NaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。
思考题
选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基？