小球藻的培养

藻种培养：

1．藻种培养设施：藻种的培养要在保种室中进行，保种室要求通风条件好，光线条件好，温度可控性好，保种室要配有空调、冰箱、具有人工光源的培养架等。培养中常用培养仪器有显微镜、解剖镜等，容器有三角烧瓶、广口玻璃瓶等。保种室要严格消毒，防止病菌的侵入。

2．容器、工具的消毒：进行单细胞藻类的纯培养，容器、工具、培养基都要进行严格灭菌，但一般生产性的单种培养，则只须达到消毒目的就可以了。常用的消毒方法有高温消毒法和化学药品消毒法。

高温消毒法是利用高温杀死微生物的方法。不耐高温的容器如塑料和橡胶制品等不能利用高温法消毒。a、直接灼烧消毒 接种环、镊子等金属小工具，试管口、瓶口等可以直接在酒精灯火焰上短暂灼烧消毒。载玻片、小刀等则最好先蘸酒精，然后在酒精灯火焰上点燃，等器具上的酒精烧完，也就完成了灭菌操作。b、煮沸消毒 把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般煮沸10-20分钟。大型锥形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一称量瓶盖，在锥形瓶内加少量淡水，置电炉上加热煮沸5-10分钟，可使整个瓶壁消毒。消毒完毕即用消毒的纸或消毒的纱布包扎瓶口。此法适合消毒小型的容器工具。c、烘箱干燥消毒 将玻璃容器、金属工具用清水洗干净后，放入烘箱。关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源加热。当温度上升到120℃时，关闭通气孔，停止加热。如果进行纯培养，容器必须灭菌，当温度上升到105℃时，关闭通气孔，继续加热至160℃，保持温度，恒温2小时，然后停止加热。必须要等到温度下降到60℃以下，才能打开烘箱门。有棉塞和纸包扎的容器、工具灭菌，不能超过180℃，以免烘焦。

化学药品消毒主要用于生产性大量培养中，大型容器、工具、水泥池等常用化学药剂消毒。a、漂白粉消毒工业用漂白粉一般含有效氯25%~35%，消毒时按万分之1-3的含量配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡半小时，再用消毒水冲洗3~4次即可。b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。c、高锰酸钾消毒以百分之五的比例配成溶液把要消毒的容器、工具浸泡5分钟，然后取出用消毒水冲洗2~3次，便可达到消毒目的。如果是对玻璃钢水槽、水泥池等消毒，可以用高锰酸钾溶液拨在池壁上，拨洒几遍后刷洗池底，10分钟后再用消毒水冲洗干净。d 石炭酸石炭酸消毒按3%~5%的比例配成消毒液，把要消毒的容器和工具放在其中浸泡半小时，再用消毒水冲洗2~3次。

小球藻常用培养液配方：

NH4NO3 50-100毫克

K2HPO4 5毫克

FeC6H5O7 0.1-0.5毫克

海水 1000ml

微藻的培养液是在消毒的海水或淡水中加入各种营养盐配制而成。培养液的配制，首先按配方先后称量各种营养物质，可逐一溶解，也可以同时溶解。遇到难溶的含金属的物质可以加热或与NaEDTA一起溶解，配方中的维生素一般等水温降至60℃后再加。生产上为了方便可以将营养盐配方浓缩1000-2000倍配成母液，使用时可以根据培养水体多少量取母液的体积即可。

3．培养液的制备和消毒：保种培养液的消毒一般采用加热消毒法，经沉淀、过滤的海水，一般加温至90℃左右维持5分钟或达到沸腾即可。由于海水中的一些对藻类生长有促进作用的有机物在高温时易遭破坏，所以加温时间不宜太长。

4．接种：接种就是把作为藻种的藻液接入新配好的培养液中，进行丰富培养。选择无污染、生长旺盛、颜色正常、藻液中无沉淀、细胞无附壁的藻种进行接种。一般来说藻种液和新培养液的比例为1:2。接种的时间最好在上午的8~10时，这个时间是藻类细胞代谢最旺盛的时候。培养条件:保种的条件最好保证在藻种的最适生长条件，要保证藻种不受污染。

5．藻种培养：

温度保持在25 ～30 ℃。pH 保持在6～8 。

6．日常培养管理:1）注意保种室的卫生，定时打扫，谢绝无关人员的进入等；2）外观检查。检查藻液颜色是否不再浅变浓，或是出现浑浊或沉降等反映藻体生长不正常，处于老化时期受到病虫侵染的现象。3）镜检检查是否发生污染，是否老化，以确保试验的顺利进行。4）控制温度。通过暖气控温装置控制温度，使试验藻细胞在适宜的温度环境中。5）摇瓶。在培养过程中每天摇瓶1-3次,使藻均匀分布。6) 调节光强。 保持合适的光强，白天避免阳光直射。

7． 藻种保藏方法：存藻种时可以根据保种目的和保种条件的不同分别采取不同的保种方法。1）固体培养基保存法。保种用的固体培养基的营养浓度应比正常的液体培养液的高，一般增加一倍。琼脂量为1-1.5%。固体培养基分装灭菌后，冷却待用。将无污染的藻种用喷雾法或划线法接种到固体培养基上。常用固体培养基保种方法有两种，一种通常把藻种接种在固体培养基上，在弱光低温条件下慢慢培养保存，接种一次可以保存半年到一年。另一种方法，接种后首先放在光线充足的地方（防止直射光照射），使藻类细胞较快速地繁殖起来，直到培养基上出现颜色，即可放入冰箱或冷库中，一般在5℃左右的低温下保存。每天给藻种几个小时的弱光照。此法保存的时间可长达2至3年。2）液体培养基保存法。低温、弱光下培养。一般两个月更换一次培养液。