水解氨基酸样品前处理
水解氨基酸样品前处理方法
酸水解(HCl法)
1.准确称取固体样品50——200mg(根据氨基酸的大体含量,如鱼粉可以少称,水果等可以大量称样),小心加入水解管中,注意:尽量防止挂壁。
左图是水解管的两种式
样,其中式样1是一次性
使用,管壁要求至少0.5mm
后,如果太薄,水解过程
中有发生炸管显现,但出
现较少;水解管式样2可
以多次使用,其管颈较长。
2.小心加入1:1的分析纯盐酸(约6M)10ml
3.酒精喷灯封管后置烘箱中于110℃水解22-24小时。
封管的三种方式:
第一:液态氮冷冻后封管(注意:冷等时不能将水解管直接置液氮中,否则容易冻裂)
第二:真空泵抽真空后封管(注意:如果真空泵抽力太大,则容易在封管过过程中将软化的玻璃抽碎)
第三:氮吹仪吹氮气15分钟后封管。
推荐:第三种方法,比较简单。
左图为封管后的式样,将
封管的样品置烘箱中110
度水解22-24小时后,取
出冷却开管。
4.样品过滤和定容。水解后的样品取出冷却至室温,开管后用小漏斗和滤纸过滤到25或50ml小容量瓶中,水解管用去离子水洗涤三次,洗涤液过滤到容量瓶中,用去离子水洗涤滤纸,洗涤液也收集到小容量瓶中。定容至刻度线。
5.吸取定容后的样品1-2ml,置真空脱酸仪上脱酸。温度60℃,脱至干燥,底
部留有少许固体或痕渍为止。
脱酸缓冲装置示意图
6.脱酸后的样品,加入1-2ml样品缓冲液,置震荡混合器上混合均匀,针管吸取少量,通过0.45或0.22um过滤器过滤后,上机分析。
附录:
关于蛋白水解钱处理的方法主要是三种:
第一种是液氮冷冻后抽真空的方法,这种方法用到的设备有:
水解管、液氮灌、真空泵、酒精喷灯(或手持式煤气灯)、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶(一般采用厚壁锥形瓶,至少三个)
第二种:水解管、真空泵、酒精喷灯(或手持式煤气灯)、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶
第三种:水解管、氮吹仪、酒精喷灯(或手持式煤气灯)、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶。
推荐第三种方法:原因是好多单位有氮吹仪,充氮气比液氮冷等成本低廉,液氮容易挥发,安钵瓶中装的液氮即使不用,段时间也会挥发完毕;充氮气不用抽真空,抽真空的方法因为水解管烧结的过程中容易抽碎,但是充氮气则无此麻烦。