细菌膜蛋白提取方法
细菌膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
细菌膜蛋白抽提液A 细菌膜蛋白抽提液B 膜蛋白溶解液 蛋白酶抑制剂混合物
BB-3151-1
50T 25ml 500ul 10ml 100 ul
BB-3151-2 100T 50ml 1ml 20ml 200 ul
储存条件：
蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：
一年。
产品简介：
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
贝博细菌膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学方法的高产膜蛋白提取试剂盒。细菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。该试剂盒提取的蛋白具有天然活性，可用于各种下游实验。
使用方法：
1、 每500ul抽提液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。 2、 将菌液在低温下10000×g离心5分钟，收集菌体，用PBS洗菌体2次。
3、 按每20mg湿重菌体样本加入500ul抽提液A（大约菌体和提取液体积比1:2-1:3，完
全淹没菌体即可），混匀，冰上放置2-3小时，中间每隔30分钟振荡混匀30秒。 4、 将菌液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。 5、 在上清中加入10ul抽提液B，充分混匀。 6、 在37℃水浴10分钟。
7、 在37℃ 1000×g离心5分钟。 8、 小心吸取管底部大约50ul液体。
9、 用溶解液稀释该溶液，即得细菌膜蛋白样品。该样品可以用Bradford或BCA方法进
行定量，调整相应的浓度用于下游实验。
参考文献：
● Gang Zhou, Qing-shan Shi et al. Involvement of outer membrane proteins and peroxide-sensor genes in Burkholderia cepacia resistance to isothiazolone
World Journal of Microbiology and Biotechnology 2013 （IF=1.262）
● Longwen Xiao, Liang Zhou et al. Apa is a trimeric autotransporter adhesin of Actinobacillus pleuropneumoniae responsible for autoagglutination and host cell adherence Journal of Basic Microbiology 2011 （IF=1.395）
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