5.肌酸激酶测定试剂
肌酸激酶测定试剂(CK-NAC)
(NAC激活法)
一、用途
本试剂适用于人血清或血浆中肌酸激酶活力的体外定量分析。
二、临床意义
CK存在于心肌、脑和骨骼肌,这些组织受损或发生疾病时,会导致血清肌酸激酶水平的升高。CK有三种同工酶,最常测定的是CK-MB。当发生心梗时,它就显著升高。
三、方法学原理
CK 磷酸肌酸+ ADP → 肌酸+ ATP HK ATP +D-葡萄糖 → 6-磷酸葡糖 + ADP +G6PDH 6-磷酸葡糖+NADP→6-磷酸葡糖酸+NADPH+H+
以NADPH在340nm波长吸光度增加计算CK活力。
四、试剂组成
试剂1(R1)
咪唑缓冲液 30mmol/L 醋酸镁 100mmol/L
AMP 5mmol/L NADP 30mmol/L ADP 2mmol/L 葡萄糖 20mmol/L G-6-PDH 2500U/L HK 3000U/L EDTA 2mmol/L AP5A 10umol/L 试剂2(R2)
磷酸肌酸 120mmol/L
五、适用仪器
ZYA-1006:适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪; ZYB-1006:适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析; ZYC-1006:适用于日立7020全自动生化分析仪; ZYD-1006:适用于贝克曼CX系列全自动生化分析仪; ZYE-1006:适用于东芝全自动生化分析仪; TYA-1006、TYB-1006、TYC-1006:适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。
六、试剂贮存及稳定性
试剂自生产日期起2—8℃存放稳定12个月;R1、R2按4:1比例混为工作液2—8℃可稳定15天。
七、标本要求
血清或血浆标本,均不应溶血。血浆只能用肝素、EDTA和氟化物抗凝,柠檬酸盐对测定产生干扰。
样品避光保存于室温CK可稳定4小时;在2—8℃保存可稳定1天;冷冻可稳定3天。
八、测定方法
1. 试剂准备 若双试剂检测,该试剂盒可直接使用,无需配制;若单试剂操作,将试剂1与试剂2按4:1比例混合即可。
2. 基本参数
温度 37℃ 样品用量 40ul
波长 340nm 试剂用量 1.0ml
吸光度 0—2A 延迟时间 120秒
光径 1cm 测定时间 120秒
F值 4180 3. 测定 a. 半自动及单一试剂的全自动测定 按需要量将R1、R2以4:1比例配制工作液,平衡至测定温度。
混匀,37℃延迟时间120秒,测定时间120秒,测定△A/分。
b. 双试剂全自动生化仪测定
混匀,37℃延迟时间120秒,测定时间120秒,测定△A/分。
4. 结果计算
CK (U/L)=△A/分×F
Vt F=——————×103 Vs×ε×L
Vt = 反应液总体积(ul) Vs = 样本体积 (ul) L = 比色杯光径(cm) ε= NADPH在340nm处的毫摩尔吸光系数,为6.22 CK(U/L)=△A/分×4180 (单试剂、双试剂,光径1cm)
九、试剂性能
1. 线性范围:0—1000U/L 2. 精密度:批内瓶间差CV≤4.5% 批间差CV≤5.9% 3. 准确度:以国际公认的质控血清(如Roche公司生产的质控血清)为检测样本时,测定值在质控血清规定的可接受范围内。
4. 空白吸光度:A340nm≤0.600A
十、注意事项
1. 可根据仪器要求按比例改变标本、试剂用量。 2. 空白A340nm大于0.600A时请勿使用。
3. 建议每次实验皆做空白管。 4. 生化仪光径不为1cm时,依公式计算F值。
十一、参考值
男 24—195U/L
女 24—170U/L
建议各实验室建立自己的参考值范围。