常规检测(20)
乙型肝炎病毒前S1蛋白检测的临床应用
作者:马 兰,贺 岩,陈 萍,朴文花 作者单位:宁夏自治区人民医院,宁夏 银川 750021
【摘要】 目的 分析乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)在乙肝病毒复制、诊疗中的应用价值。 方法 采用ELISA法检测血清中HBV标志物(HBV-M )和Pre-S1,使用聚合酶链反应定量测定HBV-DNA含量。 结果 420例乙肝患者Pre-S1与HBV-DNA总检出率分别为61.9%、68.0%,两者差异无统计学意义(P
【关键词】 前S1蛋白;HBV-DNA;HBeAg
乙型肝炎病毒(HBV)的外膜包括S、前S1、前S2三种成分,前S1主要存在于Dane颗粒上,含有肝细胞膜受体,它是HBV与肝细胞的直接结合位点,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答的过程中起重要作用[1]。本文对420例乙肝患者标本进行乙肝HBV-M、HBV-DNA和Pre-S1检测,旨在分析Pre-S1在诊断慢性HBV复制中的作用,为预测乙肝病毒的复制情况、传染程度、治疗及预后判断提供实验依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料:所有标本均来源于2008年6月-2009年7月本院门诊及同期住院乙肝患者,共计420例,男240例,女180例,年龄18-70岁,平均37岁。健康对照组50例,均选自健康体检者。
1.2 检测方法:Pre-S1和HBV-M均采用ELISA法检测。HBV-DNA采用PCR法。
1.3 试剂和仪器: Pre-S1和HBV-M试剂分别由上海复星长征医学科学有限公司和北京万泰生物药业股份有限公司提供,HBV-DNA试剂由深圳匹基生物技术有限公司提供。仪器使用Lightcycler荧光PCR扩增仪,严格按说明书进行。
1.4 统计学方法:两样本比较用χ2检验,以P
2 结果
2.1 不同血清学模式组合、HBV-DNA与Pre-S1的检出:结果见表1。420例乙肝患者Pre-S1检出率为61.9%(260/420),HBV-DNA检出率为68.1%(286/420),两者差异无统计学意义(χ2=3.36,P>0.05);HBeAg阳性组中,HBV-DNA与Pre-S1检出率分别为94.7%(145/153)和94.1%(144/153);HBeAg阴性组中HBV-DNA与Pre-S1检出率分别为52.8%(141/267)和43.4%(116/267)。50例健康对照组Pre-S1均为阴性。表1 不同血清学模式组合、HBV-DNA与Pre-S1检出结果
2.2 HBV-DNA与Pre-S1、HBeAg检测结果的关系:见表2。286例HBV-DNA阳性中Pre-S1阳性率为88.1%(252/286),HBeAg阳性率49.3%(141/286),两者差异有统计学意义(χ2=100.0,P
3 讨论
HBV是嗜肝细胞病毒,病毒附着于肝细胞膜上,最重要的介导部位是前S1蛋白的氨基酸(aa)21-27片段,此片段相当保守,变异的病毒只要这一取段完好就有传染性,且前S1蛋白的体液免疫应答常在急性HBV的早期出现 [2]。
本结果显示,420例乙肝患者Pre-S1和HBV-DNA检出率分别为61.9%和68.0%,两者
差异无统计学意义,说明Pre-S1与HBV-DNA结果有较好的一致性,在反映病毒复制方面Pre-S1是较好的指标。HBeAg(+)组中 HBV-DNA与Pre-S1检出率分别为94.7%和94.1%,此模式病毒复制率较高,传染性强,HBeAg阳性与乙肝病毒的复制情况及传染性的强弱呈正相关;HBeAg(-)组中HBV-DNA与Pre-S1检出率分别为52.8%和43.4%,说明HBeAg转阴约有半数患者仍存在病毒复制,主要原因:与其有关的C区基因变异产生终止密码,使分泌型HBeAg表达障碍; ELISA试验中HBeAg浓度过高产生后带效应,导致假阴性; HBeAg在体内形成特异性免疫复合物(HBeAg/IC),导致无法测出[3]。以上三种情况均可表现为HBeAg阴性,Pre-S1的检出弥补了HBeAg缺失而造成的诊断和治疗困难。HBeAb阳性以往被认为是机体对乙肝病毒感染具有保护作用和预后良好的征象。在检测中我们发现HBeAb阳性仍可检测出HBV-DNA和Pre-S1阳性,说明HBeAb阳性仍具有病毒复制且有传染性。这部分患者病情往往较重,其中有部分可演变为肝硬化和肝癌,这种情况虽然占恢复期乙肝的少数,但仍应引起临床医师和患者的重视[4]。不论HBeAb阳性与否,其血清中可能存在乙肝病毒的复制,单一HBeAg作为乙肝病毒复制活跃与否的指标是不够的[5] 。其次,在表2结果的比较中以HBV-DNA>1×103拷贝/ml,作为HBV复制的金标准,共286例HBV-DNA阳性中Pre-S1和HBeAg阳性率分别为88.1%和49.3%,两者间存在统计学意义; Pre-S1、HBeAg与HBV-DNA的总符合率分别为88.5%和62.6%,符合率亦有统计学意义,说明在判断HBV复制方面Pre-S1优于HBeAg[6],Pre-S1检测可避免上述变异而造成的HBeAg阴性不足 ,对“两对半”起重要补充作用。50例健康对照组Pre-S1均为阴性,说明该蛋白仅存在于HBsAg(+)的标本中,表明试验的特异性很好。
HBV-DNA与Pre-S1的检测存在着一定的交叉阳性和交叉阴性,这可能与病毒管状颗粒上存在前S1蛋白而不含HBV-DNA有关,HBV-DNA定量检测可直接体现病毒复制,提供直接证据,而Pre-S1-Ag只能反映体内的抗原抗体携带形式,是诊断HBV感染的间接证据和重要补充,两者不能完全取代。
HBV-DNA的检测主要依靠PCR法,其敏感性和特异性都很高,但其对实验室条件和操作人员等的要求高,作为常规检测有一定困难。用酶联免疫吸附试验法方法简便,特异性强,不需要特殊仪器和高标准的实验室条件,且成本低,不容易污染和出现假阳性,更便于推广,适合中小型医院常规开展检测。故在无条件检测HBV-DNA而HBeAg阴性的血清,Pre-S1虽不能替代HBV-DNA的检测,但也能较好地反映病毒的复制状态和传染性[7]。因此,Pre-S1可作为临床上HBV感染诊断、治疗、预后的一项较理想的补充检测指标。 晋升网(http://www.js120.net)致力于成为医务工作者晋升职称心灵导师;是目前国内收录医学期刊、医学杂志最多最权威的医学学术平台;提供免费医学期刊在线阅读;网罗和甄选海量优秀医学论文检索,独立研发医学在线资源分享库和医学在线模拟考试库;整合刊类、标题、关键词检索及全文检索,并独家研发刊社管理和刊社加盟系统、在线投稿、在线查稿、在线阅读、远程审稿、在线下载等系统;聚刊社力量,建服务平台,让晋升网通过“专业”走入每一个医务人员的身边是我们不懈的追求目标。
【参考文献】
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