四种小型猪内源性逆转录病毒基因研究

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１Ｏ ６　

实验动物与 比较 医学 Ｌ ｂ ｒ ｏｙ ｉ ｌｎ 　ｏ ａａｖ　 ￣ｃ 　 ａ ｏａ ｒ Ａｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｅＭｅ ｍｅ ｔ 　 ｉ

Ｊｎ２ ０，８３ ｕ ． ８２（） ０ 　

四种小型猪 内源性逆转录病 毒基 因研 究　

李 金 泽， 岳 敏， 张建 明， 玉珏 ， 为 望　 王 顾 （ 南方 医科 大学 实验 动物 中心 暨 比较 医学研 究所 ， 州 ５ ０ １） 广 １５ ５　

［ 摘要１ 目的 检测四种小型猪在 内源性逆转 录病毒基 因（Ｅ Ｖ 拷 贝数上的差异 ， 图找 出不含　 ＰＲ ） 试

或含 有 较 低 拷 贝数 的 个体 或 品种 。方 法 采 用 半 定量 Ｐ Ｒ方 法检 测 了我 国四种 小 型猪 内源性 逆　 Ｃ

转 录病毒基 因的拷 贝数 。 结果

贵州小型猪 、 五指 山猪 、 西藏小型猪 、巴马小型猪 的Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ的拷　

贝数 分 另 是 ３ ． ｌ ４１ ｊ ２士 １　６ ９ ８± １ ． ，２ ．１士 １ ．１ ７１ ６９ ，２ ． ３ ３８ ３ ８ ７ ４１， ． ２ ２士 １ ． （ｒ ．１ ， ＝ ． ９ ，Ｅ ｖ 　 ４４ １ ０６ ４ Ｐ ０ ０ ） ｎ Ａ ３　 ＿ ６

的拷 贝数 分 别是 ９７ ． ８士５ ８ ００ ． ，１ ． ４ ６± ５ ４ ０ ３±５７ ，１．１士 ６ ３　 ００ ４ Ｐ ０ ８ ） ｎ Ｂ ． ，１ ． ３ ２ ．１ ０５ ． （ ． ， ＝ ． ８，Ｅ ｖ 　 ２ ４ ９

的拷 贝数 分 别 是 ２ ．４± ｌ ． ，２ ．２士 ８ ６ 　 ３ ４１ １６ Ｏ ２ ７ ． ，１ ，５± ８５ ， １ ．０士 ８ ５　 １５ ２ Ｐ ０２ １。 ３ ８ ．０ ７６ ． （ ．１ ， ＝ ． ） ６ ２ 　

尚不 能认 为 四 个猪 种 间 Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ、Ｅ ｖ ｎ Ａ、Ｅ ｖ ｎ Ｂ的拷 贝数 之 间 的差 异 具 有 统 计 学意 义 。结论 四种　

常用的小型猪 内源病毒 负载量较低 ， 表明其用于异种 器官移植研 究的可行性 。 　

［ 关键词　Ｊ型猪　 内源性逆转 录病毒　 贝数　 、 猪 拷 半定量Ｐ Ｒ Ｃ　

［ 中图 分类 号］ ３ ２ Ｒ一３ 　Ｑ９ — ３ ［ 献标 识码］ 　 ［ 耄编 号 ］ ０ ４８ ４ （０ ８０ — １００ 　 ５３ 　 文 Ａ 文 １ ０ －４ ８２ ０ ）３ ０ ６ —４

实验 用 小 型猪 在 医 学 、生命 科 学 研 究 领 域 有　 着 广泛 的用 途 。西藏 小型 猪 是一种 可 以培 育 成 医学　

体或 一个 品种， 由此培 育 出一个 没 有 内源 病毒 威胁 、 　

适用 于异种 器官 移植 的品种或 品系矬 一步挖 掘我 国　

地 方 品种 的资 源 优 势 ， 福 子 人 类 和 社 会 。 造 　

实验动物 的优 秀 资源， 其体 形 小， 重 缓慢等 特 点都　 增 是培育 成 实验 用 小型猪 得 天独 厚 的优 势 。猪 和人 在　 解 剖学 、生 理 学 方 面 极

其 相 似 ，所 以常 在 心 血 管　 系 统 、 消 化 系 统 、 生 殖 系 统 、 内分 泌 系 统 、营　

养 学 、 皮 肤 、牙 科 、 眼 科 等 研 究 中用 作 实 验 动　

１ 材 料 和 方 法　

１１ 实 验动 物　 ．

本研 究 所考 查 的西藏 小型 猪群 体为 南方 医科 大　

物 。近 年来异 种 组织器 官 移植 已受到 医学 界 广泛重　

视 ，猪 作 为 组 织 器 官供 体 显 示 出的 美 好 前 景 。 　

学 实验动 物 中心 于 ２ ０ 从 西 藏 高原 山区 引入 ５　 ０４年 Ｏ 头原种 西藏 小 型猪 到广 州 地 区后 自繁 自养 形成 的种　 群 。 随机 取 １ 　 为 研 究对 象 。另 有 巴马 小 型猪 ， ５头 　 贵 州 小 型猪 ， 五指 山猪 ＤＮＡ 样 本 各 １ ５份 ， 由 中　 国农 业 科 学 院 畜牧 兽 医研 究所 李奎 教 授 惠 赠 。 　

１ 主要 仪 器 设备 与试 剂　 ． ２

中 国地 方 猪 种 在 地 域分 布 、进 化 程 度 等 方 面　 存 在 着 较大 的差 异 ，具 有 良好 的 遗 传 多样 性， 易　 容 找到 没有或低 拷 贝内源 病毒序 列 的品种 或 个体， 因此　

本项 研 究主要 利用 半定 量 Ｐ Ｒ的方 法检 测 中国 的主　 Ｃ 要几种 小 型猪 在猪 内源 性逆 转录 病 毒（Ｅ Ｖ 拷 贝数　 ＰＲ ）

上 的差异， 图找 出不 含或 含有 较低 拷 贝数 的一个 个　 试

【 收稿 日期】 ０ ８０ ．０ ２ ０ —４１　

【 基金项 目】 广东省科研条件建 设项 ￣（０ ６ ６ １ １５ ）广　 ２ ０ Ｂ ０ ０ ０ ９； 东省农业 攻关计￣ （０６ ２ ２ ｌ５ ） Ｊ ０ Ｂ ０ ０ ｏ ３　 ２

普通 Ｐ Ｒ仪 Ｂｉｅ　 　 ｙ ｌ （ 国博 日公司、 Ｃ ｏｒ ＸＰ Ｃ ｃ ｒ中 ｅ ， 　

凝 胶成 像 仪（ Ｏ—ｉ ，ＵＶ １０ 紫 外分 光光 度计　 ＢＩ Ｒ Ｄ） 一７ ０

（ ＨＩ ＡＤＺ ， 血 液 基 因 组 ＤＮＡ 提 取 试 剂 盒　 Ｓ Ｍ Ｕ）

（ Ｉ ＮＧ Ｎ公司） ｅ ｅｔｈ ｔ 　ａ　 Ｃ ＴＡ Ｅ ，Ｐ ｒ ｃＳ ｏ　 Ｔ ｑＰ Ｒ试剂盒　 ｆ Ｍ

（ ａ Ｒａ公 司）　 Ｔ Ｋａ 。 １ 方 法　 ． ３

【 作者简介１ 李金泽（９ ３） 男， １８ 一 ， 在读 硕士， 主要从 事实验 动物　

学研 究 。 　 【 通讯作者】 为望（９ ６）男， 顾 １５ ・ ， 教授， 博士生导师， 　

１ ． 血 液 采 集　 西 藏 小型 猪 在清 醒状 态 下， ．１ ３ 保定， 　

采 前腔 静 脉 血 ５ｍｌ ＤＴ 　 ，Ｅ Ａ抗 凝 。于 － ０Ｃ ７ 。低温 冰　 箱 保 存 。其 它猪 ＤＮＡ 样本 由李 奎 教 授 惠 赠 。 　

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．

2 0 0 8 2 8 (3 )

．

实验 动 物 与 比 较 医 学

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pa r a tiv

e

M

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e

16 l

1 3 2

． ．

血 液 全 基 因组 D N A

DNA

提取

用 T IA N GE N 公司

p G

e n o m

0 1 5 6 2 5 和 0 0 7 8 12 5

． ．

n

g／l 4 g

个梯 度 测 定 P E R V p 和 膜

：9

产血 液基 因组

提 取 试 剂 盒 (T I A N a m

ic

蛋白

1 3 5

． ．

B

。

D N A K i t )提 取 西 藏 小 型 猪 血

，

液全基 因组 D N A

，

。

全基

PCR

s

一

反 应 条件 ：

50 ℃30

s

一

PER Vp 72 ℃ 30

s

4 C

。

变 性 10

25

。

m

in

；

因 组 D N A 用 T E 溶 液溶解 稀 释 10 倍 紫外 分 光 光

94 ℃ 30

，

循环

in

；

次 ：7 2 ℃

C30

5

m

度 计 测 定 O D 280 将

．

Ⅲn

和0

D

2 6 0 。。

。

根据测 定 的 0

一

D

260

。。

值

。

延 伸 5 m in

62 ℃ 30

E

n v s

一

；

E

n v

A

：9

s

4 口 C

，

变性

25

10

m

94

s

一

DNA

．

浓度调 整到

10

n

g／l g

。

2 0 ℃ 低温

冰箱保存

72 ℃ 30

循环

in

；

次；

72℃

S

一

延伸

in

s

一

；

1 3 3

PCR

引物 设 计

根据

，

PERV

基 因 的聚合 酶 区

Vp

B

：9

4 ℃

s

，

变性

10

m

94 ℃ 30

56 ℃ 30

；对 照

：

段 (P E R V p ) 设 计 了特 征 引 物 使 P E R

PE R V

的拷 贝数 代 表

72 ℃ 30

循 环 2 5 次 ；7 2 ℃ 延 伸 5 m i n

in

；

94 ℃

s

，

基 因 的拷 贝数

：5

'

-

。

变性

10

m

94 ℃30

s

一

56 ℃ 30

m

s

一

72 ℃ 30

PE R V p：

循环

GCTA CA ACCA TTA GGA A A A CT AA A A G 3

—

25

次；

7 2 ℃

延伸 5

in

。

正向

’

．

：

1 3 6

． ．

基 因拷 贝 数 的 计 算 利 用

，

S c io

n

Im

a

g

e

软件估

CE L

反 向：5 A A C C A G G A C T G T A T A T C T T G A T C A G 3

'

一

’

：

测 扩 增 片 段 的 灰 度 值 假 定 G C A T 含 量 相 等 的前 提 下

膜 蛋 白 A (E

’

一

n v

A)

：

’

5 正 向： T G G A A A G A T T G G C A A C A G C G 3

一

将其矫正 到

30 0 bp

的 灰度 值

。

利用微软 的 E X

，

： ：

5 反 向：

’

一

A GTGATGTTA GGCTCA GTGG 3

．

’

软 件 计 算 系 列 稀 释 后 的直 线 斜 率 各 基 因 的斜 率 与 相 对 应 单 拷 贝基 因 斜 率 的 比 值 既 为 该 基 因 的拷 贝数

。

膜 蛋 白 B (E n v

’

一

B )

：

’

．

5 正 向： T T C T C C T T T G T C A A T T C C G G 3

：

’

1 -3 7

．

统 计 学处 理

．

结 果 以 夏 ±s 表 示 所 有 数 据 用

，

5 反 向：

’

一

TA CTTTA TCG GG TCCCA CT G 3

一

：

SPSS l 3 0

统 计 软 件 处 理 并 用 单 因 素方 差 分 析 进 行 组

，

单 拷 贝 基 因 对 照 (猪

'

-

s e x o n

l

仪) ：

’

一

间 比较

：

。 ’

一

，

P

0 0 5

．

为差异有统计学意义

。

正 向： 5 T C G G A G G A G G A A A G A G G G A G 3

反 向： 5 G G

'

-

GA GGA GA A CTG CTGTA G G 3

2

bp

、

结果

．

PE R V p E

n v

扩 增 片段 长 度 为 3 2 6

、

bp

。

、

En

v

A

为 359

B

为

263 bp

对照为

388 b

p

2 1

西 藏小型猪 P E R V 基 因 P C R 结果

1 _3 4

．

DNA

的 系列 稀 释 将 每 个

和 1 25

．

DNA

，

样 品稀 释 成

0 3 12 5

．

在 进 行大规模 半 定 量

了准 确 测 定 同

PCR

，

检 测 之 前 测 定 了规

，

10

、

5

、

2 5

．

n

g／ l 4 g

一

个梯度 用 于 测 定 单拷

0 625

．

模 化 测 定 时 的 P C R 反 应 条件 对 模 板

一

DNA

浓 度进 行

贝对 照 和 膜 蛋 白 A

；进

步稀 释 成

，

，

。

个个体 的 4 种基 因 P C R 产物 在 同

4 00 bp

3 0 0 bp 200bp

1 l ／ 1／ 1／ 2 4 8

M 13

：

～

1

～

1 ／ 1／ 1／ 2 4 8

8

、

1

l ／ 1／ l ／ 2 4 8

4

l

B PCR

1／ 1／ 1／ 2 4 8

标 准 对 照 ；1

16

：s e x o n

～

4

：P

ERVp PCR

产 物 ；5

1／ 2

、

：E n v

A PCR

产 物 ；9

12

：E n v

产物：

l~

PCR

产物；1

、

1／ 4 E

1／ 8

为 稀释 倍 数

E

n v

图

M

：D

～

1

西 藏小型 猪 P E R V p

～

、

n v c

A

、

B

、

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的

P CR

c t；9

产 物 的 电泳 图 谱

～

NA 16

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E R V p P C R pro du

，

t；5

～

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A P C R pr o du fa

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１２ ６　

实验动物 与 比较医学 Ｌｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌ ｎ Ｃ ｍｐ ｒｔ ｅ ｄｃ ｅ ａｏａｏｙ ｎｍａａ ｄ ｏ ａａｖ　 ｉｉ 　 　 ｉ Ｍｅ ｎ

Ｊｎ２ ０ ，８３　 ｕ ．０８２ （）

五 指 山猪 ｗｕ Ｚ ｉ ｈ １ ｎ。ｉ ｈ． ｉ ｍｉｉ ｇ ｓｎ ｐ　

１　 ５

２ ． － ３８　 ９３ ４ ． ８－ －１ ３

１．６＿ ５３　 ００ ４ ． － ４

２ ． 　－ ． 　 ０７ ４ ８３ ２－ ６

西藏 小 型猪 Ｔｂ ｔ ｎ－ｉ ｉｅｍｉｉ ｇ ｐ　

巴 马 小 型猪 Ｂ ｍａ ｎ－ｉ ａ ｍｉ ｐｇ ｉ 　

１　 ５

１　 ５

２ ．１ １．１ ８７ ± ４１　

２ ． 　 ４４　 ７１ ｉ ． ２ －１ ３

１ ．３４ ５７　 ０２　－ ．１

１ ．１± ６２　 ０５ ． ３

１． ８３ ５± ８ ０ ．　 ５

１． ７６ ０± ８６　 ．５

一

块凝胶 上 进行 荧光 强度 测 定， 使背景 的影 响保持 一　

除 Ｐ ＲＶ 的 可 能威 胁 。 而 且 我们 知道 ，人 体 内 自 Ｅ 　 然 存 在 的抗 　．ａ抗 体 能 阻止各 种 表面 表达 ｃ ｇ ｌ ｇｌ ｃ ａ抗　 － 原 的微 小有 机 体（ Ｐ ＲＶ） 如 Ｅ 的入 侵 。来 自转基 因猪　 的 Ｐ ＲＶ没 有　．ａ 抗 原 表达 ， Ｅ ｇｌ 理论 上讲 比来 自非转　 基 因猪 的 Ｐ Ｖ 更 具 有病 原性 【。 ＥＲ 引　 本 文 首 次报 道 了

利 用 半定 量Ｐ Ｒ方法 对西藏 小　 Ｃ

致 ， 加 了数 据 的可 靠性 。凝胶 板 不 宜 过 大， 增 否则 发　 生偏 光 ；特 别是 在 凝胶 的 ４周， 时较 弱 的带 很难　 有 分 辨清 楚， 实验 误差 增大 。图 １ 示 了不 同稀 释倍 数　 表 情况 下 西藏 小型 猪 ４个基 因 的凝 胶 电 泳结 果 。 　 ２２ 西 藏 小型猪 Ｐ ＲＶ基 因拷 贝数 分析 结 果　 ． Ｅ 西藏 小 型猪及 其 它ｚｌ ４ 型猪 Ｐ ＲＶ基 因拷 贝 ￣， Ｅ 　 数 分析 结 果见 表 １ 由测 得 的每 个 个 体 的数 据 可 以　 。 看 出膜 蛋 白 Ｂ 的拷 贝数 低 于 Ｐ ＥＲＶＰ 的拷 贝 数 。 　 Ｐ Ｒ ｐ 映 内源病 毒基 因 的拷 贝数， 病 毒基 因依　 ＥＶ反 内源 据膜 蛋 白的类 型 又 划分 为 Ａ、Ｂ 和 ｃ 型 ，ｃ 型 内 　 源 病 毒 又 与 性 别有 关 。在 本 实 验 中没 有 考 虑 性 别， 　 故只 检测 了膜 蛋 白 Ａ和 Ｂ 两 种 膜 蛋 白类 型 ；因 此　 Ｐ Ｒ ｐ应 大于 或等 于膜 蛋 白Ａ和 Ｂ的两者 之和 ， ＥＶ 膜　 蛋 白 Ｂ 的拷 贝数 不应 超过 Ｐ ＲＶ Ｅ ｐ的拷 贝数 。 　 在所 测 得 的几 种 中 国小型 猪 中 ，都 有膜 蛋 白Ａ　

型猪 内源病毒基因拷贝数 的研究，并 比较 了不同品 　 种 小 型 猪 间 内源 病 毒 基 因拷 贝数 的 差 异 。半定 量　 Ｐ Ｒ方法 主 要利 用 Ｐ Ｒ反应 的灵 敏性和 特异 性等特　 Ｃ Ｃ 点 ，通过 在线 性 增长 期 内 目的片 段 的扩增 强度 与单　

拷 贝基 因的 强度 相 比较 ，判 定 目的基 因 的拷 贝数 。 　 由于模 板Ｄ 量和扩 增 片 段 的荧光 强度测 定受 到所　 ＮＡ

用 方 法 精 度 的限 制 ，被 称 为 半 定 量 Ｐ Ｒ。连 正 兴　 Ｃ 等［ ３ 】 模化 检 测 之前 ， 以制备猪 基 因组 Ｂ 在规 ＡＣ文库　 的长 白猪 基 因组 ＤＮＡ为模 板 ，检测 了内源 病 毒基　 因拷 贝数 ，结 果 与用 该 ＢＡＣ库 筛选 并测 序 的 内源　 病 毒 基 因拷 贝数 相 同 ， 肯 定 了此 方 法 的可 靠 性 。 　

和 膜蛋 白Ｂ的重 叠现 象， 些 个体 膜 蛋 白Ａ和 Ｂ之　 即某

和大 于 Ｐ Ｖ 基 因 的拷 贝数 ，且 在 多个 位 点 发 生 。 ＥＲ 　 五指 山猪 的所 有 个体 都 发生 了重叠 现 象 。 　

内源 病 毒序 列 以有 丝 分裂激 活 的方式 感染 人的　

细 胞 系 ，造 成 了异种 器 官 移 植恐 惧…。据估 计猪 的　 内源 病 毒序 列 具 有 ５ ０个左 右 的拷 贝 ，同时 也造 成　 了通 过供 体选 择 消 除 内源 病 毒序 列 的 困难 ［。根据　 ５ Ｊ 膜 蛋 白 的类 型 不 同 ，猪 的 内源 病 毒分 为 ３种类 型： 　 Ｐ Ｒ Ａ、Ｐ Ｒ Ｂ和 Ｐ ＲＶ Ｃ Ｅ Ｖ． Ｅ Ｖ． Ｅ ． 。在 各个 不 同的猪种　 和 同

一个 体 的 不 同组 织 细胞 中 ，Ｐ ＲＶ 以 Ａ、Ｂ两　 Ｅ

种 亚 型 为主 ，Ｃ 亚 型 首先 发 现 于 猪 的 一种 淋 巴瘤　

３ 讨论　 　

自２０ ００年 Ｌ ｃ 【证 实，Ｐ ＲＶ可 以感 染接 受　 ｕ等 １ ｊ Ｅ

猪胰 岛移 植 的 Ｓ Ｉ 小 鼠后 ，跨种 间感 染及 异 种移　 ＣＤ

植 的安 全性越 来越 受 到重视 。通过 将 动物培 育 成无　 特殊病 原 菌（Ｐ ） Ｓ Ｆ动物 或无 菌动物 可使 大 多数 的外源　 性病 毒和 细 菌得 以消 除， 是 ， Ｅ Ｖ 是存 在猪 体 内 但 ＰＲ 　

的一种 内源 性病 毒，通 过猪 的 Ｓ Ｆ化无 法 消除 。 Ｐ 　

中 。Ｂ ｓｈ等［发现 ， Ｈ 的小型 猪 中有 极少 数个体　 ｏｃ ６ ］ ＮＩ

表 达 Ｃ亚 型 的 Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ，在 其他 猪种 中还 未 见有 Ｃ亚　

型 Ｐ Ｒ 的表 达 。 目前 有 人认 为 Ｐ Ｒ Ｃ与 性别有　 Ｅ Ｖ Ｅ Ｖ。 关 ，不 同 的类 型 与 宿 主 特 异 性 有 关【 　 　。

２０ 英 国 罗斯 林研 究 中心 的子 公 司 Ｐ Ｌ医　 ０４年 Ｐ 疗 公 司培 育 出 了５ Ｋ转基 因小猪 ， 它们 的一个 能引 发　

本 文 四种 小 型猪 均 为我 国培 育 的小 型猪　在所　 测 的 ３ 指标 的拷 贝数之 间无 统计 学差 异（＞ 　５。 个 Ｐ ０ｏ ） 　

这可 能是 与这 几种 小 型猪 在 实验 动物 化进 程 中均有　

人体排异反应的基因被关闭， 从而使异种器官移植技　 术 向前 迈 出重大 的一 步 。但 Ｐ ＲＶ与猪 共 生 了几 百　 Ｅ

万 年 ， 已变 成 猪 基 因的 一 部 分， 基 因猪 仍 不 能 消　 转

不 同 程 度 的近 交 有 关 。 　

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Ｊｎ２ ０ ，８３ ｕ ．０ ８２（） 　

实验动物与 比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒＡｎｍａａ ｄ ｍｐ ｒｔ ｅＭｅ ｉｎ 　 ａ ｏａ ｙ ｉ ｌｎ 　 ｏ 　 Ｃｏ ａａｖ 　 ｄ ｉｅ ｉ ｃ

１３ ６　

由于大 片段 ５ ’调控 区或 结 构基 因区 的缺 失造　 成 部分拷 贝失去 了转 录活 性和 功 能 ， 因此并 不是 所　 有 的拷 贝都 具 有 感 染 活性 ，然 而 ， 一个 内源 病 毒　

基 因的读 框可 以同其 他读 框 互 补或重 组产 生 具有 生　

［ 考 文 献】 参 　

… ｖ ｎｄｒ ａ ａ ＪＬ ｃ ｅ ， ｉ ｅ Ｃ ｅ Ｉｆｃ ｏ ｙ ａ ｅ Ｌ ｍ Ｌ ， ｏｋ ｙＣ Ｇｆ ｔ ｆ ｈＢ ， ｔ ｎｅｔ ｎｂ 　 　 ｉ

ｐ ｒ ｉ ｅｅ ｄ ｇ ｎ ｕ 　 ｔｏ ｉｕ 　ｆ ｒ ｓｅ ｘ ｎ ｌ ｓ ｌｎ ａｉｎ ｏ ｃ 　ｎ ｏ ｅ ｏ ｓｒ ｒ ｖｒ ｓａ ｅ ｉｌｔ ｅ ｏｍｎ ｐａ ｔｔ 　 ｎ ｅ ｔ ｏ

物 活性 的病 毒颗粒 ， 因此 可 以通 过选 择 性育 种 降低　

内源病 毒 的拷 贝数 【，近 交 猪 种 的 内源病 毒基 因拷　 ５ 】

ｎ Ｓ Ｉ 　 ｃ

【】 ｕｅ ２ ０ ， ０ ：０９ ． ｉ　Ｃ Ｄｍｉｅ Ｊ． ｔｒ， ００ ４ ７ ９ —４ Ｎａ 　 【】Ｆａ ｅ ， ｌ ｅ　Ｅ Ｄｅｒ　 ｒ 　 ｄ ｇｎ ｕ　 ｔ ｖ ｕ － ２ ｉ 　 Ｍｏｌ ｓ ， ｇ６Ｍ．ｉ ｅ ｏｅ ｏ ｓｅ ｏ ｉ ｓ ｎ ＡＥ ｎ Ｔ 　 ｎ ｇ ｒｒ ｒ 　 ａ ｈｅｔｏｃｎｃｌ ｅ ｏｒ ｓｌ ｔｔ ｎ ［ＡＰ Ｓ２０ ， ０　 　 ｒａｔ ｌ ｉａｘ ｎ ｔ ｎｐａ ａ ｏ ？Ｊ ＭＩ， ０ １８ ｔ 　　 ｉ 　 ａ ｎ ｉ ］ ０

（）２ １２ ０ ４： ４ —５ ． 　 【】 连正兴， Ｒ ｇ ｌ ａ ａｄ 李 宁， 利用半 定量 Ｐ Ｒ方　 ３ Ｃ． ｏ ｅ－ ｉｒ ， Ｇ ｌ 等． Ｃ

贝数 低 也证 明 了这 一 点 。更 有趣 的是本 实验 中发 现　

了膜蛋 白Ａ与膜 蛋 白Ｂ具有 重 叠现 象 。 ｏ ｅ Ｇ ｉａｄ Ｒ ｇ ｌ ａｌｒ　 　 ｌ

利 用猪 基 因 组 Ｂ ＡＣ文 库 筛 选 内源 病 毒序 列 时 ，共　

法分析中国地 方猪种 内源病毒序 列拷贝数的多态性［ Ｊ ］畜　 牧 兽医学报， ０ ２， ３６： ２ —２ ． ２０ ３ （） ５ １５ ４ 　 【］Ｗｉｏ Ｃ ， ｎ ＳＭｕｌ Ｊ ａ Ｔ ｐ Ｃｒ ｒｖ ｕ ｒｌ ｓｄ ４ ｌ ｎ Ａ Ｗｏ ｇ ， ｌｒ， ／ ｙ ｅ ｅｏ ｉ ｓｅ ａｅ　 ｓ ｅ 　 ． ｔ ｒ ｅ

ｆｏ ｐ ｒ ｉ ｅ ｐ ｍ ａ ｙ ｐ ｒｐ ｅ 　 ｌ ｏ 　 ｎ ｎ ｃｅ 　 ｅｌ　 ｒ ｍ　 ｏ ｃ ｎ 　 ｒ ｉ ｒ 　 ｅ ｉ ｈ ｍｌ ｏ ｄ ｍｏ ｏ ｕ ｌａ ｃ ｌ ｂ ｒ ｓ

获得 了 ６ 阳性 克 隆含 有 Ｐ Ｒ ２个 Ｅ Ｖｐ序 列 ，５ ％ 为膜　 ５

蛋 白 Ｂ、２ ％ 为膜 蛋 白 Ａ、 １ ％ 为 两种 膜 蛋 白类　 ９ 　 ０ 型 均有 的克 隆 ，即膜 蛋 白 Ａ和 膜 蛋 白 Ｂ 相重 叠【， ８　 】 而所 测 得 的几 种 中 国小型 猪 的两 种膜 蛋 白的重叠 率　 较 高 ，形成此 种现 象 的原 因可 能是基 因序 列 区 的部　

ｎ ｅｔｈ ｍａ 　 ｓＪ．　 ｒ ，９ ８ ７（）３ ８ －０ ７ ｉｆｃ 　ｕ ｎｃｌ ［］Ｊ ｉ ｌ１９ ， ２４： ０２３ ８ ． ｓ ｅ Ｖ ｏ 　

『１ ａ ｅ ｃ Ｃ ，ａ ｅ ｃ ｉ Ｗ ｅ ｓ Ａ． ｆｃ ｏ ｆ ｕ ｎ 　 ｌ 　 ５ 　Ｐ ｔ ｎ ｅ Ｔ ｋ ｕ ｈ Ｙ， ｉ Ｒ Ｉ ｅ ｔ ｎｏ ｈ ｒ ａ ｃ ｌ ｉ ｓ ｎ ｉ ｎ ｅｓ

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（） ２２２ ６ ３： ８ —８ ． 　

分 删 除 、突 变 或 引 物 区 的重 叠 等 原 因造 成 。 　 本研究 结果提 示 了通 过大 规模 的筛 选 或利用 选　 种 手段培 育无 内源 病 毒序 列 、适 用于 异种 器 官移 植　 新猪 种 的可 能性 。如 能对 我 国优 良地 方猪 种大

规 模　

检测之后 进行合 理开 发利用， 或可 对人异 种器 官移植　 中供 体 器 官不 足 的危 机 提 供 一 个 良好 的解 决 途 径 。 　

【】Ｂ ｓｈＳ Ａ ｎ ｕｄＣ，ｅｆ ６ Ｏｃ 　， ｒ ａｌ Ｊｓ ｎＡ． ｔｄ ｆｕｌｅｇｈｐ ｒｉｅ ｉ Ｓｕ ｙｏ ｆｌｌｎ ｔ ｏｃ 　 — ｎ

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Ⅶ ｏ， ０ ０ ７ （８： ５ ５８ ８ ． ｌ２０ ， ４１）８ ７ —５ １ 　 【】Ｌ Ｔｓｉ Ｐ Ｓｏ ｅ Ｐ Ｔ ｋｕ ｈ Ｙ ｅ ａ．ｗ 　 ｔｏ ｈ ｍ — ７ ｅ ｉｓ ， ｔｙ 　 ， ａｅ ｃｉ ，ｔ １ ｏｓ ｓ ｆ ｕ ａ 　 ｒ ｅ Ｊ Ｔ ｅ ｎ ｔ ｐｃｐ 　 ｔ ｖ ｕ ［］Ｎａ ｒ，　 ７ ３９ ６ １６ ２ ｒ ｉ ｉ ｒｒ ｉ ｓ ． ｔ ｅ ｌ９ ， ８ ： ８ —８ ． ｏ 　ｇ ｅ ｏ ｒ Ｊ ｕ ９ 　 【】Ｒｏｅ－ ａｌｒ　， ｏ ｒｅｕ ８ ｇ ｌ ｉａｄＣ Ｂ ｕｇ ａｘＮ， ｉ ｕ人 ｅ　． ｏ ｓ ｕｆ ｎ Ｇｌ Ｂｌ ｔ ｔ１Ｃ ｎｌ ｃ ｏ 　 ｌ ａ ｏ ｒ ｉ

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本 实验 仅对 几种 小型 猪 的外 周 血 白细胞 Ｐ Ｒ 　 Ｅ Ｖ

进行 了拷 贝数分 析 ， 由于 Ｐ ＲＶ具有 不 同 的细胞 嗜　 Ｅ 性，因此 ，有必 要进 一步 对 几 种 小 型猪 体 内各 组 织　 和 器 官进 行 相应 的 Ｐ ＲＶ 及 其 亚型 分 析 。 Ｅ 　

ｍａ ｐ ｎ 　 ｆｐ ｒｉ ｅｔｐ 　 　 ｎ ｏ ｉａ　ｌｍｅ ｔ 【】 ｐ ｉｇ ｏ 　 ｏ ｃｎ 　ｙ ｅＣ ｅ ｄ ｖｒｌｅｅ ｎ ｓＪ． 　 Ｃｙ ｏ ｅ ｅｉ 　 ｄＣ ｌＧ ｎ ｔ ｓ １９ ， ５３４： ０・　 ． ｔｇ ｎ ｔ ｓ 　 ｅ　 ｅ ｅ ｃ，　 ９ ８ （－）２ ５２　　 ｃａ ｎ ｌ ｉ ９ １ １

Ｓ ｕｄ 　 ｎ ＰＥＲＶ　 ｅ 　ｎ Ｆｏ 　 ｏ ｋ 　 ｆＭ ｉ － ｇｓ ｔ ｙｏ 　 Ｇ ｎｅｉ 　 ｕｒＳｔ ｃ ｓｏ 　 ｎｉｐｉ 　

ＬＩＪｎ— ｅ ， 　ｉ ｚ 　 ＹＵＥ　 ｉ ，ＺＨＡＮ Ｇ　ｉｎ Ｍ ｉ ｇ Ｗ ａ ｇ Ｙｕ—ｕ ，ＧＵ　 ｅ — ａ ｇ Ｍ ｎ ｌａ － ｎ ， ｎ 　 Ｊ ｅ Ｗ ｉＷ ｎ 　

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．

ｃ ｐ －ｕ ｏ ｙ ｎ ｍｂｅ 　 ｆＰＥＲＶ，Ｅｎ ｒｏ 　 ｖＡ， Ｅｎｖ ｇｎ ｓｉ Ｏｕｉ ｈ ｕ ｍｉ ｉｐｉ Ｗ ｕｚ ｓ ａ 　 ｎ — ｇ， ｂ ｔ ｉ ｉｐｉ Ｂ　 ｅ 　ｎ　 ｚ ｏ 　 ｎ － ｇ　 ｈｉｈ ｍｉ ｉｐｉ Ｔｉ ｅ 　 ｎ － ｇ　 ｎ ｍ Ｂａ ａｍｉ ｉｐ ｇ ｗｅ ｅ ３ １ ￣１ ９ ｍ 　 ｎ － ｉ 　 ｒ 　 ４．２ ６．６，２ ３８ ３．３ ９． ￣１ ８

２ ．１ ４ １， ７１士１ ．３Ｆ ０６ ４ 尸 ＝ ０ ０ ） ８７￣１ ．１ ２ ． ２ ４４ （ ＝ ．１ ， ． ９， ６ 　 ９７ ．８± ５４ ， ００ ．８ １ ．６± ５３ ，１ ．３± ５７ ， ０５ ．４ ０２ ．１ １ ．１± ６２ （ ＝ ． ４ 尸 一 ０９ ８ ， ４ １ ．３Ｆ ００ ， ４ ．８ ） ２ ．４± １ ．６ １ ， ２　

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２． ０７ ２± ８３ ， ８３ ． １ ．５± ８５ ，１ ．０± ８ ５Ｆ １ １ ， ＝ ．２ ） ｅｐ ｃｉｅ ． ｃ ｒｉｇｔ　 ｅｅ ６ ．０ ７６ ． （ ＝ ． ２ Ｐ ０２ １ ｒｓ ｅｔ ｌ Ａｃ ｏｄｎ 　 ｔ ｓ　 ６ ５ ｖ ｙ ｏｈ

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．　

【 ｙｗｏｄ 】 ｎ—ｉ； Ｅ Ｖ ｏ ｙｎ ｍｂ ｒ ｅ —ｕ ｎｉ ｔ ｅＰ Ｒ Ｋｅ 　 ｒ ｓ Ｍｉｉ ｇ Ｐ Ｒ ；Ｃ ｐ —ｕ ｅ　Ｓ ｍ ｑ ａｔａｉ 　 Ｃ 　 ｐ ｉ ｔｖ