曼氏裂头蚴病诊断研究进展
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中国人兽共患病学报
Chinese
JournalofZoonoses
2007,23(9)
文章编号:1002—2694(2007)09—0942—03
曼氏裂头蚴病诊断研究进展*
王越,干小仙
中图分类号:R383.35文献标识码:A
曼氏裂头蚴病是由曼氏迭宫绦虫(Spirometramansoni)的幼虫一曼氏裂头蚴(plerocercoid)侵入人体引起的疾病。曼氏迭宫绦虫的中间宿主以蛙、蛇为主,人获感染的途径主要有民问用蛙或蛇的肉、皮局部贴敷伤口,裂头蚴从伤口侵入I生食或半生食蛙、蛇及转续宿主如猪等;饮用生水或游泳时误吞被感染的第一中间宿主剑水蚤。裂头蚴可侵入皮下
的感染肉芽肿。张永革n∞等分析了27例脑裂头蚴病人的CT扫描结果,认为多数病灶表现为低密度影,高密度病灶者少见,部分病例可见到细小钙化点,这与虫体死亡后变性有钙盐沉积及裂头蚴体内散在分布圆形、椭圆形石灰小体有关。病灶周围可见轻中度水肿,对诊断有一定帮助。寄生于神经系统的寄生虫,除曼氏裂头蚴外常见的还有猪囊尾蚴,两者都存在石灰小体,CT扫描均可见钙化灶。石灰小体是分布在绦虫实质组织中的钙镁碳酸盐微粒。外面被以包膜,且活虫与虫体死亡的病灶中均有发现,仅从影像学特征性钙化点上两者较难鉴别。脑曼氏裂头蚴病的病灶常为单个,而脑囊虫病的病灶一般为多发,流行病学资料对两者的鉴别诊断具有重要的价值。
2.2
组织形成皮下结节,也可侵犯腹腰内脏器、组织。还可穿过横
膈侵犯胸腔,危害最大的是侵入眼部和中枢神经系统,可致残疾甚至危及生命口1。据不完全统计,至1998年我国已报道632例曼氏裂头蚴病,广泛分布于23个省、市、自治区∞。
曼氏裂头蚴可在人体内移行,寄生部位多变,临床表现各不相同,并且缺乏特异性表现,误诊、漏诊较为普遍。本文就近20年来国内外对曼氏裂头蚴病诊断及研究报道综述
如下。
MRI检查MoonwK等o”统计了11例病人的14次
MRI扫描结果,并与其中10例病人的CT扫描作了比较,认为该病在MRI影像学表现方面的特点为:(1)CT扫描上显示的白质退行性病变均呈低密度影。而在MRI上表现为TlWI为低信号。T2WI为高信号;(2)MRI上变性脑组织和正常脑组织的对比明显,增强MRI扫描上病灶区通常显示有串珠样增强或扭曲的条索样增强,与裂头蚴形态吻合;对病人进行追踪复查,如发现病灶出现迁移或形态改变,则提示有活虫存在,对本病的诊断价值更大f(3)在CT上发现小点状钙化是诊断脑裂头蚴病的一条重要线索,MRI对小钙化灶的显示则不理想。因此,在诊断脑裂头蚴病时,CT优于MRI,但在随访疾病的活动性方面,MRI较为优越。2.3超声检查
超声检查发现特征性的匍行低回声结构也
1病原学诊断
裂头蚴在体内的寄居部位,以皮下、眼部、口腔颌面部及中枢神经系统居多,近年来更有寄生于肺、椎管、泌尿生殖器官睁∞等部位的报道。绝大部份病人通过手术或病理组织活检发现虫体而确诊。病灶中常可见白色带状虫体,活虫蜷曲成团,能蠕动,体不分节,头部膨大,体前端中央呈唇状凹陷,末端钝圆,体表具明显横皱褶,体内含有大量石灰小体。病灶常形成嗜酸性肉芽肿或脓肿,内有大量坏死组织,可见窦道痕迹。对囊肿周围组织进行病理切片检查,常可见有大量炎性细胞和较多嗜酸性粒细胞浸润订{’。
病原学检查阳性虽是曼氏裂头蚴病确诊的依据,但通常人的感染度较低,据绝大多数病例报道只有一条,深部脏器等寄生部位不易发现病灶,难以查见虫体,漏检率高。尤其是中枢神经系统裂头蚴病,手术风险大,故病原学诊断存在
着较大的局限性。
有助于对本病的诊断。ChoJH等n幻对8例皮下和骨胳肌裂头蚴病人进行超声检查,均可见匍行的、低回声的管状束,与虫体的形状相吻合,其中一半病例管腔内有发生回波的结构。SeoboSIM等。3’曾经用乳房造影法和超声波检查一乳腺裂头蚴病患者,亦显示一特征性的、匍行低回声的索状结构,并与周围脂肪有粘连。3免疫学诊断
曼氏裂头蚴感染者通常起病隐匿,局部形成的嗜酸性肉芽肿囊包或脓肿与肿瘤相似,常被误诊、漏诊。血清免疫学检测方法不仅创伤小.并且敏感性高、特异性强、简便快速经济,尤其对轻度感染、早期感染、隐性感染、异位寄生和深部组织寄生的病例,是一种较好的术前辅助诊断手段,可弥补
*浙江省自然科学基金资助项甘(M303823),淅江省卫生厅重点项
目(2003ZD001)
2影像学诊断
随着CT、MRI、超声检查等现代影像学技术的普及,近年来裂头蚴病、特别是中枢神经系统裂头蚴病的发现有逐渐增加的趋势。中枢神经系统裂头蚴病临床表现酷似脑瘤。常有阵发性头痛,严重时昏迷或伴喷射状呕吐、视力模糊、间歇性口角抽搐、肢体麻木抽搐,甚至瘫痪,易与脑胶质细胞瘤、炎性肉芽肿、转移瘤及脑囊虫病相混淆,应用CT、MRI等影像学检查有助于鉴别诊断。
2.1
CT扫描ChangKH等。’认为CT检查如有以下三
联征表现,则有助于脑裂头蚴病的诊断:(1)白质区不规则的低密度占位灶,伴有邻近脑室略微扩张,反映白质退行性病变;(2)点状钙化灶;(3)病灶结节状或不规则增强,提示活动
通讯作者l干小仙,EmailIxiaoxian_gan@hotmail.ODm作者单位:淅江省医学科学院,杭州310013
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病原学和影像学诊断的不足。3.1检测方法
3.1.1酶联免疫吸附试验(ELISA)
戚锡亮等n”用常规
其它寄生虫之间存在较多的共同抗原,交叉反应率高。
郭虹等。钉应用PAGE和SDS-PAGE技术对曼氏裂头蚴的可溶性抗原蛋白作了初步分析及分子量测定,证实在裂头蚴SDS-PAGE图谱中,分子量为33kD的组分与成虫有相同迁移率,是主要的抗原成分。周金春等∞’通过ELIB技术对曼氏裂头蚴可溶性粗抗原的免疫学特性进行分析,发现裂头蚴抗原内有5种组分可被感染兔血清识别(分别为26.5—30kD,55kD,88kD,90kD及115kD),其中以低分子量组分(26.5--30kD)反应最强,是主要的血清学抗原;裂头蚴可溶性蛋白与大多数寄生虫感染血清有交叉反应,其中与猪囊虫感染血清交叉反应尤为明显,可见有10余种被识别的组分,与正常人和正常兔血清无反应。
3.2.2特异性组分抗原韩国学者ChoiSH等n力分析了曼氏裂头蚴粗抗原的各蛋白组分的抗原性,发现29kD和
Choi
ELISA法检测曼氏裂头蚴感染鼠和正常鼠血清中特异性抗体,结果显示敏感性和特异性均为100%,未见与血吸虫、蛔虫、短膜壳绦虫感染鼠血清有交叉反应。YeoIS等。钉应用裂头蚴单克隆抗体建立了竞争ELISA法检测病人血清中的特异性抗体,敏感性为94.1%(16/17),与常规ELISA相同;特异性为90.o%(45/50),略高于常规ELISA的86%(7/
50)。NishiyamaT等n钉建立化学发光ELISA检测病人血
清中特异性抗体,敏感性和特异性分别达到100%(14/14)和97.6%(41/42),与肥胖带绦虫、阔节裂头绦虫感染病人血清均无交叉反应,13例囊虫病人血清中仅有1例呈阳性反应。
3.1.2免疫印迹(Immunoblotting)
SH等n力应用免
36kD蛋白是反应最强、敏感性最高的主要抗原条带。ChoSY等臼她们发现36kD蛋白也是曼氏裂头蚴的排泄分泌抗原中的主要抗原成份,具有半胱氨酸蛋白酶活性。用粗抗原免疫小鼠。取其脾细胞与瘤细胞杂交制备单克隆抗体,以单克隆抗体做配体,亲和层析纯化抗原,其中仅包含29kD和36kD蛋白组分。用纯化抗原包被,ELISA法检测曼氏裂头蚴病人血清的敏感性为96.4%(27/28),与粗抗原的敏感性相近;检测健康人群血清及囊虫、阔节裂头绦虫、肥胖带绦虫、肺吸虫、肝吸虫、片形吸虫等寄生虫感染病人血清的特异性为96.9%(96/99),与用粗抗原检测的特异性86.8%(86/99)相比明显提高。
Kong
疫印迹法检测了15例曼氏裂头蚴病人和24例囊虫病人血清中特异性IgG,发现裂头蚴粗抗原中有6至19种抗原蛋白组分能与曼氏裂头蚴病人血清反应,其中36kD和29kD组分的敏感性最高(14/15),且29kD比36kD组分的反应更强。但24例囊虫病人血清中亦有10例显示能与曼氏裂头蚴粗抗原反应,且其中7例显示参与反应的主要抗原组分也
为36kD和29kD。
3.1.3金标免疫渗滤法(DIGFA)胶体金是与酶、放射性同位素并列的三大标记物之一,于上世纪80年代初开始应用于血清免疫学诊断。因其检测方法具有简易快速、不需特殊仪器设备、试剂稳定等优点,而迅速应用于各种感染性疾病的抗原、抗体检测。王越等a鼬以胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白为探针,用金标免疫渗滤法(DIGFA)检测曼氏裂头蚴特异性抗体,检测49份感染小鼠血清和30份正常鼠血清,敏感性和特异性均为100%,可与ELISA法相媲美。但与囊虫、包虫、旋毛虫、肺吸虫、华支宰吸虫均存在交叉反应,其中与肺吸虫的交叉反应率高达80%(8/10),与囊虫的交叉反应率为42.5%(17/40),这与所用的抗原为成分复杂的粗抗原有关。3.2诊断抗原
3.2.1可溶性虫体粗抗原从自然感染的青蛙或蛇中分离裂头蚴,或从人工感染的小鼠、家兔中获得虫体,将虫体研磨成匀浆,经冷浸、超声粉碎、离心后获得的上清液即为可溶性裂头蚴粗抗原。戚锡亮等n93以此抗原检测41只曼氏裂头蚴感染鼠和6只阴性对照鼠血清中特异性抗体,敏感性和特异性均为100%。周金春等咖’则发现曼氏裂头蚴粗抗原与囊虫、血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、钩虫等多种寄生虫感染病人血清存在着强弱不等交叉反应,抗体效价达到l。20~1。
160。Kim
Yoon等。钉则使用葡聚糖凝胶一步法亲和纯化曼
氏裂头蚴粗抗原中29kD和36kD蛋白组分,用于检测特异性抗体并与粗抗原平行比较,提示纯化抗原的敏感性为92.6%(25/27),特异性则从89.0%(81/91)增至95.6%(87/91),与其他蠕虫的交叉反应大大减少。3.3抗体
3.3.1
IgG及其亚类ChungYB等馏的对曼氏裂头蚴感染
小鼠抗体反应进行了初步研究,感染后第2周血清中即可测得特异性IgG抗体,免疫印迹显示参与反应的抗原组分主要为26--36kD和103kD。在IgG亚类中IgG4抗体水平最高,与总IgG的水平相近。其次为IgGl。IgG4抗体主要与31—36kD抗原组分反应,与总IgG相同。提示在曼氏裂头蚴感染早期,IgG抗体中的主要成分是IgG4;31—36kD组分是诱导感染早期特异性IgG和IgG4亚类抗体反应的主要抗原组分。
王越等n耵用ELISA检测了不同感染度的小鼠(1—5条)血清中总IgG,提示感染组与正常组小鼠之间抗体水平差异有统计学意义,不同虫荷数的感染小鼠之间抗体水平差异没有统计学意义。提示1条裂头蚴即可刺激小鼠产生高水平的特异性IgG。
3.2.2
IgE
Kong
H等侣1’用粗抗原检测了7例经手术证实的曼氏
裂头蚴患者血清,敏感性为85.7%(6/7),检测其中2例脑型病人脑脊液中的抗体,均为阳性;特异性为95.7%(68/71),但与肥胖带绦虫病人血清存在较高的交叉反应率(3/7)f而曼氏裂头蚴病人血清与肺吸虫及囊虫抗原无交叉反应。以上实验表明裂头蚴粗抗原虽然有较高的敏感性,但与
Y等o”发现曼氏裂头蚴病人血清中IgE
抗体可与可溶性抗原中的2l、27和53kD抗原组分特异性结合,21和27kD抗原蛋白具有半胱氨酸蛋白酶活性,53kD抗原蛋白具有蛋白内切酶活性,均与诱导产生IgE抗体有关。
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C中hi曼。人eJo兽ur盏喜薹。羔s报es
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4结语
目前我国尚未建立明确的曼氏裂头蚴病诊断标准,市场上缺乏商品化的诊断试剂,曼氏裂头蚴病依然通过手术或病理组织检查取得虫体得以确诊和治疗。而免疫学检测方法敏感性高,经济、简便、创伤性小,可为临床诊断提供科学的依据。是较为理想的辅助诊断手段。但是,曼氏裂头蚴与其它蠕虫之间普遍存在着交叉反应,采用可溶性粗抗原作为诊断抗原虽然可获得较高的敏感性,但特异性差,影响免疫学诊断的准确性。因此,采用亲和层析等生物化学技术或基因重组技术制备曼氏裂头蚴特异性抗原,是曼氏裂头蚴病免疫诊断的关键。简易快速、敏感性高特异性强、试剂稳定保质期长又可单份检测的金标免疫渗滤法或免疫层析法,非常适合病例数较少的曼氏裂头蚴病临床辅助诊断。既准确又简易快速的免疫诊断试剂开发和应用,有望减少曼氏裂头蚴病的误诊率和漏诊率,进一步提高我国疑难食源性寄生虫病诊治水平。
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